1、其他病原微生物概况 菌丝分支分隔,接触培养基的菌丝分化出足细胞,其上生出直立的分生孢子柄,顶端膨大成球形顶囊,在顶囊处以辐射方式生出杆状小梗(一排或两排),顶端产生一连串分生孢子。分生孢子柄、顶囊、小梗与 分生孢子合成孢子头,可用于产生淀粉酶、蛋白酶与磷酸二酯酶等,也是酿造工业中的常见菌种。分生孢子为单细胞，有黑、黄、白、绿等多种不同颜色，是鉴别不同菌种的依据。米曲霉、酱油曲霉是常用发酵菌种。黄曲霉、烟曲霉菌是常见禽畜致病菌。黄曲霉菌也是地球的早期生命。概况造成感染的曲霉菌详解黄曲霉菌烟曲霉菌 烟曲霉菌可使鸡鸭鹅鸽及鹦鹉发生曲霉菌病或霉菌性肺炎。也可在发霉的饲料中产生毒素,一起家畜中毒。是曲霉
2、菌属中致病性最强。烟曲霉菌烟曲霉菌分生子孢头、形态特征 孢子为圆形,呈蓝绿色,直径2、53、5um,呈连珠状排列。分生孢子柄长250300um,分布在有隔板的纵横交织的气中菌丝上。1、生物学特性2 2、培养基特征 在沙氏培养基上初形成白色、圆形、绒毛状菌落,最后变成深绿色或者灰绿色。37402、抵抗力抵抗力较弱,能被一般消毒剂或热力消毒法所灭,但孢子的抵抗力强,120干热1h或煮沸5MIN才能被杀死。对一般的抗生素均不敏感,制霉菌素、灰黄霉素及碘化钾对烟曲霉素有抑制作用 3 3、致病性 可使鸡鸭鹅等曲霉菌病或霉菌性肺炎，在幼禽多呈急性经过；哺乳动物及人也可感染。在感染组织的过程中，还可产生一种
3、蛋白毒素，可导致动物组织痉挛、麻痹、直至死亡。4 4、微生物学检查 刮取少数肺脏病变等材料,置于玻片上,加一滴盐水,盖上盖玻片,置高倍镜下观察形态特征,分生孢子柄不分支,菌丝分支分隔,顶端膨大,以及小梗、分生孢子的形态、排列与色泽等。黄曲霉菌 分布广泛,常生长于花生仁及玉米、花生饼、棉籽饼与秸秆等 饲料上,还能够在各种食物及肉类制品上生长繁殖,并产生黄曲霉素散入各基质中,引起人畜中毒。黄曲霉毒素是由黄曲霉与寄生曲霉产生的杂环化合物,它的代谢产物主要有B1B1、B2B2、G1G1、G2G2、M1M1与M2M2等类型。显微镜下的黄曲霉黄曲霉菌1 1、形态特征 分生孢子梗多从基质部生出,长度小于1m
4、m,壁厚无色粗糙。顶囊早起较长,晚期呈烧瓶形或近似球形,直径1065mm。顶囊上产生小梗(单层或双层),小梗顶端着生分生孢子,孢子呈球形、近似橘形。2 2、培养特征 能够培养于沙氏培养基、2%麦芽糖及7、5%氯化钠琼脂培养基上。生长温度为2830C,相对湿度在80%以上。菌落生长较快。呈扁平状,也有褶皱呈脑回状。最初带黄色,后变黄绿色,老龄菌落呈暗色,反面带褐色或无色。成份:蛋白胨、水、琼脂、葡萄糖或麦芽糖制法:将上述物质称好,放入水中煮沸溶解分装包扎,高压后凝固备用。用途:作分离培养霉菌用。注意:1 接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12、5%氯霉素沙氏斜面培养基上。实
5、验室条件下接种黄曲霉菌2、抵抗力黄曲霉菌的种类比较多,毒性大小也不同,但都易溶于脂溶性溶剂,耐热,熔点为200300,煮沸不能分解,但在PH910的强碱溶液中,毒素能迅速溶解3 3、致病性 黄曲霉菌的致病性主要是其所产生的毒素。在各类黄曲霉毒素中,黄曲霉毒素1的毒性最大,其次是M1、G1、M2、B2与G2。因此,许多国家规定了黄曲霉毒素在食品中的极限值,即食品中的黄曲霉毒素含量不允许超过此值。黄曲霉菌的毒性极强,远远高于氰化物、砷化物与有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性与胆管增生。当微量持续摄人,可造成慢性中毒,生长障碍
6、,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。B1B1毒性分类黄曲霉毒素是一种强烈的肝脏毒,可使牛、猪、马、鸡、鸭、绵羊等多种动物发生霉菌毒素中毒。4 4、感染途径散布在空气中的分生孢子在有利的条件下菌丝本身也可伸长增殖。菌丝形成隔壁即可产生两个独立的细胞。此外称做子囊孢子的有性孢子也具有增殖的能力。可引起以肺为主的多个脏器的非坏死性肉芽肿性病变。在病变部位可见大量的嗜中性粒细胞浸润,其中可见呈Y字型分歧的有隔壁的菌丝。分为化学方法(薄层层析)、生物学方法与免疫学方法三大类。5 5、微生物学诊断1 1、生物学方法 1 1)抑菌试验 黄曲霉菌有抑制某些微生
7、物生长的作用,故用其抑菌作用来测定黄曲霉菌的存在与含量。差不多发现巨大芽胞杆菌与短芽胞杆菌对AFT最敏感。通过平皿中抑菌圈大小来衡量黄曲霉菌含量。2 2)荧光测定法 依照黄曲霉菌在紫外光照射下可发出荧光的原理,将待检菌株接种于培养基中,2830C培养4872小时,产生的毒素便浸入培养基中,在紫外灯光下照射培养基会呈现出特异的荧光。此法操作简便。对AFT最低检出量为5pgml。3 3)大白鼠试验法 黄曲霉菌对大白鼠毒性最早出现损害的是肝脏,其受损范围广,而幼鼠最敏感,雄性幼鼠比雌性幼鼠敏感性更高,用100150g大白鼠作急性中毒试验,一般34天死亡。4 4)鸡胚试验 5 5)鸭雏试验 鸭雏对黄曲
8、霉菌特别敏感,致死性强,一般用一次剂量后72小时内死亡。6 6)斑点试验 本法用于检测真菌毒素致突变试验的一种有意义的方法。主要利用沙门氏菌/微粒体突变性来检测某些样品种AFT的存在与含量。A先将鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型变种的菌悬液,与一定量肝组织匀浆混合作倾注平板。B待凝固后,再将一定量被检物(含AFT)加在平板中央待黄曲霉菌往外围琼脂中扩散时,围绕中心点将出现密布的回复突变的菌落。本法作为一种生物学检验法广泛应用于开发安全、有用的化学物质与检测食品或农产品中黄曲霉菌。2 2、免疫学方法 黄曲霉菌是分子量为312346的二氢呋喃香豆素的衍生物,无免疫原性,不能引起抗体的产生,故必须与大分子
9、化学基团或蛋白质偶联,成为完全抗原,方能引起免疫动物的抗体形成,然后利用血清学方法检测AFT 由于黄曲霉菌的量一般都较低,因此,检测方法主要是敏感性较高的放射免疫测定法(RIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)。二、分枝杆菌分类分枝杆菌属归类于放线菌对人致病的放线菌可分含与不含分枝菌酸两类。前者有诺卡菌属、分枝杆菌属、棒状杆菌属,后者有放线菌属生物学特性形态与染色形态:菌体细长略弯曲,呈单个或分枝状 排列。经抗结核药物治疗,可转为L L 型菌,呈现多形性(颗粒状、丝状等)结构:荚膜(14(1418h18h分裂1 1次 ),培养3 34 4周出现菌落。液体:表面生长(菌膜)固体:颗粒、结节、花菜
10、状菌落,乳白或米黄,不透明生化反应不发酵糖类热触酶试验对区别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌有重要意义结核分枝杆菌大多数触酶试验阳性,而热触酶试验阴性非结核分枝杆菌则大多数两种试验均阳性抵抗力(四怕)对乙醇敏感对湿热敏感对紫外线敏感对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨基水杨酸等抗痨药物敏感,但长期用药容易出现耐药性抵抗力(四不怕)对干燥的抵抗力特别强结核分枝杆菌对酸(3%(3%HClHCl或6%6%H H2 2SOSO4 4)或碱(4%(4%NaOH)NaOH)有抵抗力,15,15minmin不受影响对碱性染料有抵抗力对青霉素等抗生素耐药 二、致病性致病物质荚膜脂质蛋白质荚
11、膜成分多糖、脂质与蛋白质有助于粘附与入侵可降解宿主组织中的大分子物质,为细菌繁殖提供营养防止宿主的有害物质进入细菌可抑制吞噬体与溶酶体的融合脂质索状因子 若将其从细菌中提出,则细菌丧失毒力磷脂硫酸脑苷脂蜡质D D 索状因子由分枝菌酸与海藻糖结合的一种糖脂能使细菌在液体培养基中呈蜿蜒索状排列能破坏细胞线粒体膜,影响细胞呼吸抑制白细胞游走与引起慢性肉芽肿磷脂促使单核细胞增生,与结核结节的形成有关硫酸脑苷脂抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合使 细菌能在吞噬细胞中长期存活蜡质D D肽糖脂与分枝菌酸的复合物具有佐剂作用,可激发机体产生迟发型超敏反应蛋白质有抗原性,与蜡质D D结合后能使机体发生 超敏反应
12、在形成结核结节中发挥一定作用致病物质荚膜 与细胞表面受体结合(粘附与入侵作用)含多种酶(分解利用营养物质)保护(阻止有害物质的进入菌体)脂质索状因子(破坏细胞,引起肉芽肿)磷脂(形成结核结节)硫酸脑苷脂(抑制吞噬体与溶酶体结合)蜡质D(引起迟发性过敏反应)蛋白质引起迟发性过敏反应 所致疾病 结核杆菌可通过呼吸道、消化道与破损的皮肤粘膜进入机体,侵犯多种组织器官,引起相应器官的结核病,其中以肺结核最常见。人类肺结核有两种表现类型。原发感染、原发后感染原发感染多发生于儿童原发灶-原发综合征-隐性菌血症细胞免疫(超敏反应)形成结核结节(即结核肉芽肿)转归原发后感染1、纤维化或钙化而自愈。长期潜伏少量
13、结核杆菌2、极少数免疫力低下者,结核杆菌向全身扩散,导致全身粟粒性结核或结核性脑膜炎。多见于成年人。大多为内源性感染,极少由外源性感染所致。感染的特点是病灶局限,一般不累及邻近的淋巴结,主要表现为慢性肉芽肿炎症,形成结核结节,发生纤维化或干酪样坏死。原发感染感染源:结核杆菌-呼吸道-肺泡 首次感染机体-外源性感染感染者:多见于儿童 尚未建立特异性免疫功能1、巨噬细胞吞噬,胞内寄生菌,接着繁殖,巨噬细胞遭破坏,释放大量细菌引起肺泡炎症 反应-原发病灶。继发感染感染源:外源性感染-呼吸道-再次进入 内源性感染-潜伏原发病灶感染者:多见于成人或较大儿童 已建立特异性免疫功能,但同时处于致敏状态。1、
14、特异性免疫功能已建立,巨噬 细胞发挥强大吞噬杀菌作用。2、细菌常扩散至附近淋巴管,并 运送至肺门淋巴结,引起肺门 淋巴结肿大-原发综合症。3、病灶有扩散倾向,多见于肺上 叶底部,且靠近胸膜下通气较 好的部位(需氧菌)4、感染3-6周,机体出现特异性 免疫,同时也伴有超敏反应。结核杆菌-磷脂 巨噬细胞 2、不引起肺门淋巴结肿大。3、病灶多局限、多见于肺尖。4、干酪样坏死组织被纤维囊壁 包围,可钙化而痊愈。5、若干酪样坏死发生液化,细 菌在液化灶中大量繁殖,形 成空洞,释放大量细菌于支 气管、气管随痰排出体外,形成开发性肺结核。巨噬细胞 被破坏 裂解 未裂解、转变为释放蛋白酶、但溶解组织不完全 上
15、皮样细胞 融合 干酪样坏死 多核巨细胞 以此为中心 外围淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞 结核结节 原发感染的典型病理特征 95%5%95%5%形成纤维化、钙化,不治而愈 活动性肺结核潜伏-成为今后内源性感染 少数人:的来源。其他部位结核病 甚至全身粟粒性感染 肺外感染部分患者结核分枝杆菌可进入血液循环引起肺内、外播散,如脑、肾结核,痰菌被咽入消化道或食入了消毒不严格的牛奶也可引起肠结核、结核性腹膜炎等大多与结核分枝杆菌L L型有关四、微生物学检查法痰液等标本处理:浓缩集菌(氢氧化钠处理)直截了当镜检:抗酸染色 分离培养:培养基、时间(2(24 4周后见结果)动物试验:豚鼠等 快速诊断:PCRP
16、CR等 标本采集 依照感染部位,采集不同标本。肺结核:痰液、支气管灌洗液。结核性胸膜炎:胸水。其它:脑脊液、尿液。直截了当涂片镜检标本直截了当涂片或集菌后涂片,用抗酸染色若找到抗酸阳性菌即可初步诊断 浓缩集菌 先集菌后检查,可提高检出率脑脊液与胸、腹水可直截了当离心沉淀集菌痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4%4%NaOHNaOH处理后离心沉淀分离培养结核分枝杆菌生长缓慢,一般需2 24 4周长成肉眼可见的落菌动物试验将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下,3,34 4周后若局部淋巴结肿大,结核菌素试验阳转,即可进行解剖,观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变,并作形态、培养等检查快速诊断多聚酶
17、链反应(PCR)PCR)扩增技术应用于结核分枝杆菌DNADNA鉴定,每mlml中只需含几个细菌即可获得阳性,且1 1 2 2d d得出结果操作中需注意实验器材的污染问题,以免出现假阳性三、螺旋体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物;基本结构与细菌相似,如有细胞壁、原始核质;以二分裂方式繁殖;对抗生素等药物敏感;运动有赖于菌体内轴丝的屈曲与收缩。第一节 钩端螺旋体属(Leptospira)问号状钩端螺旋体(L、interrogans)一、生物学性状l细密而规则的螺旋,形似细小珍珠排列的细链,一端或两端呈钩状;l在外膜与肽聚糖层之间有2根周浆鞭毛,运动活泼;lFontana镀银染色
18、法染成棕褐色。l营养要求复杂,需加10%兔血清,常用Korthof培养基,适宜生长温度为2830,最适pH7、27、6,需氧或微需氧;生长缓慢。l抵抗力较弱,但夏季在湿土或中性水中可存活数月;对青霉素敏感。二、抵抗力l对热、干燥、阳光等都特别敏感,加热5510min即可杀死。l但低温湿润的环境利于它保存l对一般消毒剂、青霉素、金霉素、四环素较敏感三、致病性与免疫性(一)致病物质1、内毒素样物质(ELS)细胞壁中含类似脂多糖物质,引起的病理变化与典型的内毒素相似,只是毒性较低。2、溶血素 破坏红细胞膜而溶血,导致贫血、出血、肝肿大、黄疸与血尿。3、细胞毒性因子(CTF)注射小鼠,可出现肌肉痉挛、呼吸困难而死亡。4、致细胞病变作用(CPE)物质 引起细胞退行性病变。(二)所致疾病-钩端螺旋体病 人畜共患传染病,多宿主(鼠与猪为主),),传播途径有:n 人与污染水或土壤接触n 消化道黏膜(污染食物/饮水)n 胎盘垂直传播n 吸血昆虫储存宿主(肾脏)随尿排出污染 水源、土壤人 类 l流行特点n 季节性(夏秋)n 地区性:三多鼠、猪、水n 职业性:农民、矿工、饲养员感谢您的聆听！感谢您的聆听！
