1、【天津大学】医学院-名师讲解全国特级教师 江新欢 博士教授 教学目的教学目的疱疹病毒疱疹病毒(Herpesvirus)(Herpesvirus)是一类中等大小、结构相似、有包膜的是一类中等大小、结构相似、有包膜的DNADNA病病毒。现已发现毒。现已发现114114种，种，分分3 3个亚科个亚科 已知的人类已知的人类疱疹病毒疱疹病毒有：有：单纯单纯疱疹病毒疱疹病毒 1 1 型和型和 2 2 型型 （HSV 1&2HSV 1&2）水痘水痘带状带状疱疹病毒疱疹病毒（VZVVZV）巨细胞病毒巨细胞病毒 （CMVCMV）EBEB病毒病毒（EBVEBV）人类人类疱疹病毒疱疹病毒 6 6型、型、7 7型、型
2、、8 8型型 （HHV 6,7,8HHV 6,7,8）正式命名正式命名常用名常用名病毒亚科病毒亚科重要生物学性状重要生物学性状所致疾病所致疾病人类疱疹病毒1型（HHV-1）单纯疱疹病毒1型（HSV-1）繁殖快、杀细胞性感染感觉神经节中潜伏唇疱疹、龈口炎、角膜结膜炎、脑炎等人类疱疹病毒2型（HHV-2）单纯疱疹病毒2型（HSV-2）同上生殖器疱疹、新生儿疱疹人类疱疹病毒3型（HHV-3）水痘-带状疱疹病毒（VZV）同上水痘、带状疱疹、脑炎人类疱疹病毒4型（HHV-4）Epstein-Barr病毒（EBV）淋巴细胞中繁殖与潜伏传染性单核细胞增多症、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌（?）等人类疱疹病毒5
3、型（HHV-5）人类巨细胞病毒常在淋巴细胞、肾脏及分泌腺体中潜伏先天性巨细胞包涵体病、单核细胞增多症、间质性肺炎、先天性畸形、肝炎人类疱疹病毒6型（HHV-6）人类疱疹病毒6型同人巨细胞病毒婴儿急疹、间质性肺炎、骨髓抑制人类疱疹病毒7型（HHV-7）人类疱疹病毒7型同人巨细胞病毒未明确人类疱疹病毒8型（HHV-8）人类疱疹病毒8型同EB病毒Kaposi肉瘤弥猴疱疹病毒1猿猴B病毒同HSV脊髓炎、出血性脑炎疱疹病毒的共同特征疱疹病毒的共同特征 病毒颗粒呈球形，病毒颗粒呈球形，120120300nm300nm。核衣壳核衣壳约约100nm100nm。2020面体立体对称，面体立体对称，有有包膜包膜
4、双链线形双链线形DNADNA 除除EBEB病毒及病毒及HHV-6HHV-6、HHV-7HHV-7和和HHV8HHV8外，均能外，均能在人二倍体细胞内复制，产生明显在人二倍体细胞内复制，产生明显CPECPE，并并有核内嗜酸性包涵体，形成多核巨细胞有核内嗜酸性包涵体，形成多核巨细胞 多种感染类型多种感染类型:显性感染显性感染潜伏感染潜伏感染整合感染整合感染先天性感染先天性感染单纯疱疹病毒案例单纯疱疹病毒案例 患者，女，患者，女，2020岁。因经常出现口唇黏岁。因经常出现口唇黏膜处水疱而就诊，患者发热时口唇周膜处水疱而就诊，患者发热时口唇周围常起针头大小的小疱，常为一群，围常起针头大小的小疱，常为一
5、群，也有两三群，自觉有轻度烧灼感，历也有两三群，自觉有轻度烧灼感，历时时1 1周左右可自愈，反复发作多次，周左右可自愈，反复发作多次，并伴有口腔溃疡、咽炎、舌炎等现象。并伴有口腔溃疡、咽炎、舌炎等现象。思考题：思考题：1 1该患为何种病原体感染？病原体该患为何种病原体感染？病原体存在于何处？存在于何处？2 2潜伏感染的定义是什么？潜伏感染的定义是什么？单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒 单纯疱疹病毒，由于在感染急性期发生单纯疱疹病毒，由于在感染急性期发生水疱性皮疹即所谓单纯疱疹而得名水疱性皮疹即所谓单纯疱疹而得名 包括两个血清型包括两个血清型HSV-1HSV-1HSV-2HSV-2生物学性状生物学性状
6、典型的疱疹病毒科病毒特征典型的疱疹病毒科病毒特征 HSVHSV有两个血清型，有两个血清型，即即HSV-1HSV-1和和HSV-2HSV-2。两者两者DNADNA的同源性约为的同源性约为50%50%病毒体有六个包膜相关糖蛋白：病毒体有六个包膜相关糖蛋白：gpBgpB、gpCgpC、gpDgpD、gpEgpE、gpGgpG和和gpHgpH。gpCgpC是型特是型特异抗原，只有异抗原，只有HSV-1HSV-1有。有。gpDgpD是病毒中和是病毒中和抗原，是亚单位疫苗的备选蛋白抗原，是亚单位疫苗的备选蛋白 在多种细胞增殖，病毒复制快（在多种细胞增殖，病毒复制快（48h48h），），出现细胞肿胀变圆和核
7、内嗜酸性包涵体出现细胞肿胀变圆和核内嗜酸性包涵体CPECPE性接触性接触垂直传播垂直传播密切接触传播密切接触传播：唾液、阴道分泌唾液、阴道分泌物、疱疹液，接吻，共用杯子，物、疱疹液，接吻，共用杯子，牙刷等。牙刷等。HSVHSV感染较普遍感染较普遍 密切接触和性接触密切接触和性接触 经粘膜和破损皮肤经粘膜和破损皮肤上皮细胞内复制，水疱上皮细胞内复制，水疱浆液充满病毒颗粒，浆液充满病毒颗粒，细胞碎片，基底部多细胞碎片，基底部多核巨细胞；神经细胞核巨细胞；神经细胞则为潜伏感染。则为潜伏感染。唇疱疹唇疱疹龈口炎龈口炎角膜结膜炎角膜结膜炎等等lHSV-2HSV-2：腰以下及生殖器感染为主：腰以下及生殖器
8、感染为主 生殖系统疱疹、新生儿疱疹等生殖系统疱疹、新生儿疱疹等 原发感染后原发感染后,HSV,HSV由感觉神经由感觉神经 感觉神经节感觉神经节 HSV-1:HSV-1:三叉神经节和颈上神经节三叉神经节和颈上神经节 HSV-2:HSV-2:骶神经节骶神经节 潜伏的潜伏的HSVHSV不复制，对抗病毒药物不敏感不复制，对抗病毒药物不敏感非特异性刺激：发热、月经、感染等非特异性刺激：发热、月经、感染等 激活潜伏病毒激活潜伏病毒 沿感觉神经纤维沿感觉神经纤维 下行到末梢下行到末梢 感染粘膜或皮肤上皮细胞感染粘膜或皮肤上皮细胞 免疫记忆反应免疫记忆反应 病程短病程短,组织损伤轻组织损伤轻,感染更局限感染更
9、局限 先天性感染先天性感染及新生儿感染及新生儿感染：妊娠期妇女（妊娠期妇女（HSV-1HSV-1）影响胚胎细胞的影响胚胎细胞的有丝分裂有丝分裂 胎儿畸形、智力低下、流胎儿畸形、智力低下、流产产 。分娩。分娩 -新生儿疱疹新生儿疱疹HSV-2HSV-2可能引起可能引起宫颈癌宫颈癌 患过生殖器疱疹的妇女，宫颈癌发病率高患过生殖器疱疹的妇女，宫颈癌发病率高 用免疫荧光检查癌组织用免疫荧光检查癌组织HSV-2HSV-2抗原抗原 患者患者HSV-2HSV-2抗体效价高抗体效价高 宫颈疱疹与宫颈癌好发部位相似宫颈疱疹与宫颈癌好发部位相似 分子杂交试验发现分子杂交试验发现HSV-2HSV-2基因片段基因片段
10、 尚尚不能作出结论。不能作出结论。HSV-2HSV-2可能是一种辅助可能是一种辅助致癌因子，或是一种与之无关的致癌因子，或是一种与之无关的“过客过客”病毒病毒lIFNIFN和和NKNK细胞：限制原发感染发展细胞：限制原发感染发展l中和抗体：阻断病毒扩散及潜伏中和抗体：阻断病毒扩散及潜伏感染感染l细胞免疫：控制和消除细胞免疫：控制和消除HSVHSV感染感染PCRPCR或原位杂交或原位杂交荧光素或酶标记抗体染荧光素或酶标记抗体染色色标本：水疱液、唾液标本：水疱液、唾液 细胞：细胞：BHK-21BHK-21，VeroVero CPECPE：细胞肿胀；融合细：细胞肿胀；融合细胞；包涵体胞；包涵体防治原
11、则防治原则 预防预防 避免同患者接触避免同患者接触 防止医院内感染防止医院内感染 剖腹产预防新生儿感染剖腹产预防新生儿感染 HSVHSV有致癌可能性，减毒活疫苗和死疫苗有致癌可能性，减毒活疫苗和死疫苗不宜用于人体不宜用于人体 包膜蛋白（提纯的包膜蛋白（提纯的gGgG、gDgD）亚单位疫苗）亚单位疫苗 基因重组疫苗、多肽疫苗治疗正研制基因重组疫苗、多肽疫苗治疗正研制 国内用国内用HSV gC gDHSV gC gD单克隆抗体制成滴眼液，单克隆抗体制成滴眼液，用于治疗疱疹性角膜炎，取得显著疗效用于治疗疱疹性角膜炎，取得显著疗效 无环鸟苷（无环鸟苷（ACVACV）对疱疹病毒选择性很强）对疱疹病毒选择
12、性很强的药物的药物单纯疱疹病毒案例单纯疱疹病毒案例 患者，女，患者，女，2020岁。因经常出现口唇黏岁。因经常出现口唇黏膜处水疱而就诊，患者发热时口唇周膜处水疱而就诊，患者发热时口唇周围常起针头大小的小疱，常为一群，围常起针头大小的小疱，常为一群，也有两三群，自觉有轻度烧灼感，历也有两三群，自觉有轻度烧灼感，历时时1 1周左右可自愈，反复发作多次，周左右可自愈，反复发作多次，并伴有口腔溃疡、咽炎、舌炎等现象。并伴有口腔溃疡、咽炎、舌炎等现象。思考题：思考题：1 1该患为何种病原体感染？病原体该患为何种病原体感染？病原体存在于何处？存在于何处？2 2潜伏感染的定义是什么？潜伏感染的定义是什么？案
13、例提示案例提示 根据临床表现为单纯疱疹病毒根据临床表现为单纯疱疹病毒1型感染。不同的疱疹病毒其体内潜型感染。不同的疱疹病毒其体内潜伏部位不同，伏部位不同，1主要潜主要潜伏于三叉神经节或颈上神经节，伏于三叉神经节或颈上神经节，2潜伏于骶神经节，潜伏于骶神经节，主要潜伏于淋巴细胞内。主要潜伏于淋巴细胞内。原发感染后少数病毒不被清除，以原发感染后少数病毒不被清除，以非活化状态存留于机体内。病毒不非活化状态存留于机体内。病毒不增殖，也不破坏细胞，与宿主细胞增殖，也不破坏细胞，与宿主细胞处于暂时平衡状态。一旦病毒被再处于暂时平衡状态。一旦病毒被再激活，可转为显性感染，疾病复发。激活，可转为显性感染，疾病
14、复发。水痘带状疱疹病毒案例水痘带状疱疹病毒案例 患者，男，患者，男，58岁。因感冒发热岁。因感冒发热2天后胸天后胸部皮肤产生水疱疹，水疱逐渐增多并显部皮肤产生水疱疹，水疱逐渐增多并显著疼痛就诊。查体见患者胸部皮肤有片著疼痛就诊。查体见患者胸部皮肤有片状水疱，沿肋缘分布形成带状。状水疱，沿肋缘分布形成带状。思考题：思考题：1该患为何种病原体感染？该患为何种病原体感染？2该病怎样进行预防和治疗？该病怎样进行预防和治疗？水痘带状疱疹病毒（水痘带状疱疹病毒（VZVVZV）在儿童初次感染时引起在儿童初次感染时引起水痘水痘（VaricellaVaricella），恢复后病毒潜伏在），恢复后病毒潜伏在体内，
15、青春期或成年以后少数人复发体内，青春期或成年以后少数人复发可引起可引起带状疱疹带状疱疹（ZosterZoster），），故称为故称为水痘带状疱疹病毒水痘带状疱疹病毒（Varicella-Zoster VirusVaricella-Zoster Virus）与与HSVHSV相似：相似：潜伏神经细胞，引起复发感染潜伏神经细胞，引起复发感染 细胞免疫限制和防止重症水痘细胞免疫限制和防止重症水痘 皮肤损伤以水疱为特征皮肤损伤以水疱为特征 与与HSVHSV不同：不同：呼吸道感染呼吸道感染 通过病毒血症播散至皮肤通过病毒血症播散至皮肤致病性致病性 传染源主要是患者，水痘患者急性期传染源主要是患者，水痘患者
16、急性期水疱内容物及上呼吸道分泌物、或带水疱内容物及上呼吸道分泌物、或带状疱疹患者水疱内容物都含有病毒状疱疹患者水疱内容物都含有病毒 病毒借飞沫经呼吸道或接触传播病毒借飞沫经呼吸道或接触传播 好发年龄为好发年龄为3 39 9岁，多在冬季春季流岁，多在冬季春季流行行 原发感染：原发感染：水痘，一般病情较轻水痘，一般病情较轻 潜伏感染：潜伏感染：原发感染后，原发感染后，病毒潜伏于病毒潜伏于脊髓后根神经脊髓后根神经节或颅神经的感觉神经节节或颅神经的感觉神经节。以后以后如如机体机体免疫力下降，病毒被激活，病毒沿免疫力下降，病毒被激活，病毒沿神经神经轴突轴突下行下行到所支配的皮肤细胞内增殖，到所支配的皮肤
17、细胞内增殖，发生疱疹，排列呈带状，称带状疱疹发生疱疹，排列呈带状，称带状疱疹发生于身体的一侧，以躯干中线为界，发生于身体的一侧，以躯干中线为界，好发部位为胸、腹和面部好发部位为胸、腹和面部多见于成年人，特别是多见于成年人，特别是4040岁以上成年人岁以上成年人水痘水痘(Chicken Pox)(Chicken Pox)病毒病毒经呼吸道、结经呼吸道、结膜、皮肤等处膜、皮肤等处侵入人体侵入人体先在局部先在局部淋巴结增淋巴结增殖殖进入血液散布到进入血液散布到各个内脏继续大各个内脏继续大量增殖量增殖2 23 3周潜伏周潜伏期期皮肤广泛发生丘皮肤广泛发生丘疹，水疱疹和脓疹，水疱疹和脓疱疹疱疹带状疱疹（带
18、状疱疹（ShinglesShingles）儿童时期儿童时期患过水痘患过水痘愈合愈合病毒潜伏在病毒潜伏在脊髓后根神脊髓后根神经节或脑感经节或脑感染神经节中染神经节中机体免疫力机体免疫力下降等条件下降等条件刺激刺激病毒沿感觉病毒沿感觉神经轴索下神经轴索下行行该神经所支该神经所支配的皮肤细配的皮肤细胞内增殖胞内增殖在皮肤上沿着感觉神在皮肤上沿着感觉神经的通路发生串联的经的通路发生串联的水疱疹，形似带状水疱疹，形似带状免疫性免疫性 儿儿童患水痘后，机体产生持久的特异性童患水痘后，机体产生持久的特异性细胞免疫和体液免疫，极少再患水痘细胞免疫和体液免疫，极少再患水痘 病毒中和抗体病毒中和抗体和细胞免疫和细
19、胞免疫不能有效地清不能有效地清除潜伏于神经节中的病毒，故不能阻止除潜伏于神经节中的病毒，故不能阻止病毒被病毒被激激活而发生带状疱疹活而发生带状疱疹诊断：似诊断：似HSVHSV治疗：治疗：无环鸟苷无环鸟苷 IFNIFN：限制疾病：限制疾病预防：减毒活疫苗预防：减毒活疫苗防治原则防治原则 VZVVZV减毒活疫苗预防水痘感染和传播有良减毒活疫苗预防水痘感染和传播有良好效果好效果 治疗可用治疗可用无环鸟苷、阿糖腺苷和高剂量无环鸟苷、阿糖腺苷和高剂量干扰素干扰素水痘带状疱疹病毒案例水痘带状疱疹病毒案例 患者，男，患者，男，58岁。因感冒发热岁。因感冒发热2天后胸天后胸部皮肤产生水疱疹，水疱逐渐增多并显部
20、皮肤产生水疱疹，水疱逐渐增多并显著疼痛就诊。查体见患者胸部皮肤有片著疼痛就诊。查体见患者胸部皮肤有片状水疱，沿肋缘分布形成带状。状水疱，沿肋缘分布形成带状。思考题：思考题：1该患为何种病原体感染？该患为何种病原体感染？2该病怎样进行预防和治疗？该病怎样进行预防和治疗？提示提示 根据临床表现为单纯疱疹病毒根据临床表现为单纯疱疹病毒2型感染。型感染。提示提示 VZVVZV减毒活疫苗预防水痘感染和传播有良减毒活疫苗预防水痘感染和传播有良好效果，接种对象为好效果，接种对象为1 1岁以上末患过水痘岁以上末患过水痘的儿童和成人。对免疫功能低下者可用的儿童和成人。对免疫功能低下者可用高效价人免疫球蛋白进行紧
21、急预防。高效价人免疫球蛋白进行紧急预防。治疗可用治疗可用无环鸟苷、阿糖腺苷和高剂量无环鸟苷、阿糖腺苷和高剂量干扰素干扰素人类人类巨细胞病毒（巨细胞病毒（HCMVHCMV）19561956年年SmithSmith等首先用组织培养方法从患等首先用组织培养方法从患者者腺体组织培养中腺体组织培养中分离出病毒。由于感分离出病毒。由于感染的细胞肿大并具有巨大的核内包涵体染的细胞肿大并具有巨大的核内包涵体故故得得名名 是巨细胞包涵体病的病原体是巨细胞包涵体病的病原体 CMVCMV多为潜伏感染，常可由怀孕多为潜伏感染，常可由怀孕、器官移、器官移植、免疫抑制、艾滋病植、免疫抑制、艾滋病等因素被激活等因素被激活形
22、态结构：与形态结构：与HSVHSV极极相似相似宿主范围：宿主范围：较窄，不感染其较窄，不感染其它动物；仅成纤维它动物；仅成纤维细胞中增殖。细胞中增殖。生物学性状生物学性状 典型疱疹病毒结构典型疱疹病毒结构 对宿主或培养的组织细胞对宿主或培养的组织细胞感染感染有高度有高度的种属特异性：即的种属特异性：即HCMVHCMV只能感染人。只能感染人。只能在人成纤维细胞增殖只能在人成纤维细胞增殖 复制周期为复制周期为363648h48h（增殖缓慢），其增殖缓慢），其特点是细胞变圆、膨胀、核变大、形特点是细胞变圆、膨胀、核变大、形成巨大细胞，核内出现周围绕有一轮成巨大细胞，核内出现周围绕有一轮鹰眼状鹰眼状大
23、型嗜酸性包涵体（大型嗜酸性包涵体（Owls Owls eye inclusion bodyeye inclusion body）致病性致病性 潜伏部位潜伏部位唾液腺、乳腺、肾脏、白细胞及唾液腺、乳腺、肾脏、白细胞及其他腺体其他腺体 长期或间歇地从尿长期或间歇地从尿液液、唾液、泪液、唾液、泪液、乳汁、精液、宫颈及阴道分泌物排乳汁、精液、宫颈及阴道分泌物排出病毒出病毒传播环节传播环节 传染源传染源患者及无症状隐性感染者患者及无症状隐性感染者 传染方式传染方式胎盘产道胎盘产道密切接触，通过口口或手口传播密切接触，通过口口或手口传播输血输血器官移植器官移植先天性感染（先天性感染（宫内感染宫内感染）通过
24、胎盘感染胎儿。发生率为通过胎盘感染胎儿。发生率为0.5%2.5%0.5%2.5%，CMVCMV是能引起先天性感染的主要病毒之一是能引起先天性感染的主要病毒之一 只有少部分（只有少部分（10%10%）感染者表现症状，主）感染者表现症状，主要临床要临床表现表现是是巨细胞包涵体病（巨细胞包涵体病（黄疸、肝黄疸、肝脾肿大、溶血性贫血、紫癜等脾肿大、溶血性贫血、紫癜等），），极极少数少数患儿表患儿表现现为为先天性畸形（小头智力先天性畸形（小头智力低下、神经肌肉运动障碍、耳聋、脉络膜低下、神经肌肉运动障碍、耳聋、脉络膜视网膜炎等）视网膜炎等）经产道感染，或出生后数周由母体经产道感染，或出生后数周由母体的病
25、毒（尿或乳汁中的病毒），或的病毒（尿或乳汁中的病毒），或护理人员排出的病毒所引起的感染护理人员排出的病毒所引起的感染 多数无症状或症状轻微，表现为轻多数无症状或症状轻微，表现为轻声度或明显呼吸障碍、肝功损害声度或明显呼吸障碍、肝功损害 通常不表现神经损伤，预后良好通常不表现神经损伤，预后良好围生期围生期感染感染免疫功能低下的病人感染免疫功能低下的病人感染 发生于发生于长期免疫抑制剂治疗、器官移长期免疫抑制剂治疗、器官移植、植、AIDSAIDS、白血病、淋巴瘤等患者白血病、淋巴瘤等患者 是由于体内原有的潜伏是由于体内原有的潜伏HCMVHCMV被激活被激活 症状主要是肺炎、视网膜炎、脑炎、症状主要
26、是肺炎、视网膜炎、脑炎、脑膜炎等，预后不好脑膜炎等，预后不好输血感染输血感染 输入大量含有输入大量含有CMVCMV的新鲜血液，可发生输的新鲜血液，可发生输血后的单核细胞增多症和肝炎等血后的单核细胞增多症和肝炎等 HCMVHCMV导致的单核细胞增多症检测不到嗜导致的单核细胞增多症检测不到嗜异性抗体和异性抗体和EBVEBV相关抗体，可籍此区别与相关抗体，可籍此区别与EBVEBV所致的单核细胞增多症所致的单核细胞增多症 预后良好预后良好接触感染接触感染 唾液、乳汁、尿、精液、宫颈分泌唾液、乳汁、尿、精液、宫颈分泌物存在物存在HCMVHCMV，通过接吻、性接触、，通过接吻、性接触、哺乳等方式传染。哺乳
27、等方式传染。细胞转化与致癌潜能细胞转化与致癌潜能 HCMVHCMV基因组的基因组的DNA DNA 片段，体外可转化片段，体外可转化地鼠胚和人胚成纤维细胞。接种乳鼠地鼠胚和人胚成纤维细胞。接种乳鼠可形成肿瘤。可形成肿瘤。宫颈癌、前列腺癌、结肠癌和宫颈癌、前列腺癌、结肠癌和Kaposi Kaposi 肉瘤组织检出肉瘤组织检出HCMVHCMV的的DNA DNA 序列。序列。l细胞培养：成纤维细胞中增殖，生长细胞培养：成纤维细胞中增殖，生长慢，慢，CPECPE需需2 26 6周。周。lELISAELISA：HCMV-IgMHCMV-IgM；近期感染；胎儿感染；近期感染；胎儿感染防治原则防治原则 丙氧鸟
28、苷（丙氧鸟苷（ganciclovir DHPGganciclovir DHPG）有防止）有防止CMVCMV扩散作用扩散作用 耐丙氧鸟苷的耐丙氧鸟苷的CMVCMV感染可选用磷甲酸钠，感染可选用磷甲酸钠，但效果比前者差但效果比前者差 CMVCMV病毒活疫苗致癌潜能的问题有待解决病毒活疫苗致癌潜能的问题有待解决 CMVCMV包膜糖蛋白的亚单位疫苗是研究的方包膜糖蛋白的亚单位疫苗是研究的方向向EBEB病毒（病毒（Epetein-Barr virusEpetein-Barr virus）BurkkitBurkkit先生在研究非洲中部的一种先生在研究非洲中部的一种发生于儿童的恶性淋巴瘤时曾预测发生于儿童的
29、恶性淋巴瘤时曾预测该病是一种病毒感染性疾病。该病是一种病毒感染性疾病。19641964年年加拿大学者加拿大学者EpsteinEpstein和和BarrBarr从从这种这种恶性淋巴瘤体外培养的淋巴瘤细系恶性淋巴瘤体外培养的淋巴瘤细系中，用电镜中，用电镜观察到观察到一种新的人类疱一种新的人类疱疹病毒，疹病毒，后被后被命名为命名为EBEB病毒病毒生物学性状生物学性状 典型疱疹病毒，但抗原结构与其他疱疹病典型疱疹病毒，但抗原结构与其他疱疹病毒不同毒不同 常规方法不能培养。常规方法不能培养。仅能在仅能在CD21+CD21+的的B B淋巴淋巴细胞中增殖细胞中增殖，转化为可长期传代的类淋巴，转化为可长期传代
30、的类淋巴母细胞株。母细胞株。是一种嗜是一种嗜B B细胞的疱疹病毒细胞的疱疹病毒 CD21CD21分子是该病毒的受体，故含分子是该病毒的受体，故含CD21CD21的粘的粘膜上皮细胞和膜上皮细胞和B B淋巴细胞是该病毒的宿主淋巴细胞是该病毒的宿主l早期抗原（早期抗原（early antigenearly antigen，EAEA）：）：DNADNA聚合酶活性聚合酶活性,表示表示EBVEBV增殖增殖 EAEA抗体：抗体：早期抗体早期抗体,持续几个持续几个月，表示近期感染。月，表示近期感染。l衣衣壳抗原（壳抗原（VCAVCA）：）：结构蛋白，存在细胞质和细胞核结构蛋白，存在细胞质和细胞核 VCA-Ig
31、M VCA-IgM出现早，消失快出现早，消失快 VCA-IgGVCA-IgG出现晚，持续几年出现晚，持续几年lEBVEBV膜抗原（膜抗原（MAMA）：）：在细胞表面，属包膜糖蛋白在细胞表面，属包膜糖蛋白 MA-IgMMA-IgM表示近期感染表示近期感染 MA-IgGMA-IgG可持续存在可持续存在 EBVEBV感染感染B B细胞或上皮细胞细胞或上皮细胞 潜伏感染潜伏感染l细胞含细胞含EBVEBV基因组基因组 (游离或整合游离或整合)l选择性表达潜伏期抗原，刺激选择性表达潜伏期抗原，刺激B B细细胞增生或永生化胞增生或永生化核抗原（核抗原（EBNAEBNA）B B细胞核内，为细胞核内，为DNAD
32、NA结合蛋白结合蛋白 感染细胞逃避感染细胞逃避CTLCTL杀伤杀伤 与细胞永生化有关与细胞永生化有关 EBNA EBNA抗体：感染晚期持续存在抗体：感染晚期持续存在潜伏膜蛋白（潜伏膜蛋白（LMPLMP）在在B B细胞表面细胞表面,致癌蛋白致癌蛋白 改变细胞功能改变细胞功能,抑制细胞凋亡抑制细胞凋亡 阻止潜伏病毒激活功能阻止潜伏病毒激活功能 EBEB病毒在人群中广泛感染病毒在人群中广泛感染 我国我国3 35 5岁儿童感染率达岁儿童感染率达90%90%以上以上 主要通过唾液传播，也可经输血传染主要通过唾液传播，也可经输血传染 EBEB病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然
33、后感染染B B淋巴细胞淋巴细胞 感染感染B B细胞进入血循环可造成全身性感染细胞进入血循环可造成全身性感染 病毒可长期潜伏病毒可长期潜伏 传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症初次感染大剂量病毒，多见青少年，初次感染大剂量病毒，多见青少年，是一种急性全身淋巴细胞增生性疾病是一种急性全身淋巴细胞增生性疾病症状为发热、咽炎、颈淋巴腺炎、肝症状为发热、咽炎、颈淋巴腺炎、肝脾肿大、血液中大量异形淋巴细胞脾肿大、血液中大量异形淋巴细胞持续数月后自愈，预后良好持续数月后自愈，预后良好非洲儿童淋巴瘤（即非洲儿童淋巴瘤（即BurkittBurkitt淋巴瘤）淋巴瘤）于中非、新几内亚和美洲温热带地区呈于中非、
34、新几内亚和美洲温热带地区呈地方性流行地方性流行 多见于多见于5 51212岁儿童岁儿童 好发部位为颜面、腭部好发部位为颜面、腭部 所有所有BLBL病人血清均含病人血清均含EBVEBV抗体，其中抗体，其中80%80%以上滴度高于正常人以上滴度高于正常人 在肿瘤组织中发现在肿瘤组织中发现EBVEBV基因组基因组100%100%死亡率死亡率 鼻咽癌（鼻咽癌（Nasopharyngeal CarcinomaNasopharyngeal Carcinoma，NPCNPC）地区性分部，主要东南亚和华南广东省地区性分部，主要东南亚和华南广东省4040岁以上的中老年人岁以上的中老年人从鼻咽癌活检组织中找到从鼻
35、咽癌活检组织中找到EBVEBV鼻咽癌患者血清鼻咽癌患者血清EBVEBV相关抗原的抗体效价高相关抗原的抗体效价高于正常人于正常人NPCNPC患者患者EBVEBV潜伏感染时间通常很长，在潜伏感染时间通常很长，在3030年年左右左右还不能认为还不能认为EBVEBV是鼻咽癌唯一致病因素，可是鼻咽癌唯一致病因素，可能是多种综合因素中的一种能是多种综合因素中的一种免疫性免疫性 EBVEBV在人群中广泛存在，成人抗体的阳在人群中广泛存在，成人抗体的阳性率达性率达90%90%以上以上 出现中和抗体，能阻止外源性病毒再出现中和抗体，能阻止外源性病毒再感染感染 细胞和体液免疫细胞和体液免疫不能清除体内不能清除体内
36、已经潜已经潜伏的伏的EBVEBV微生物学检查微生物学检查 EBVEBV分离培养困难分离培养困难 可用核酸杂交和可用核酸杂交和PCRPCR等方法检测细胞内等方法检测细胞内EBVEBV基因基因组及其表达产物组及其表达产物 血清学诊断血清学诊断 EBVEBV特异性抗体的检测特异性抗体的检测 检测病毒检测病毒VCAVCAIgAIgA或或EAEAIgAIgA抗体，滴度抗体，滴度1 1：5 51 1：1010有诊断意义有诊断意义 异嗜性抗体凝集试验异嗜性抗体凝集试验 用于传染性单核白细胞用于传染性单核白细胞增多症的辅助诊断增多症的辅助诊断防治原则防治原则 我国用基因工程方法构建的同时表达我国用基因工程方法
37、构建的同时表达EBV EBV gp320gp320和和HBsAgHBsAg的疫苗，重点使用在鼻咽的疫苗，重点使用在鼻咽癌高发区癌高发区 gp320gp320膜蛋白疫苗，正在英国大学生患者膜蛋白疫苗，正在英国大学生患者中作小规模接种，以期观察该疫苗是否中作小规模接种，以期观察该疫苗是否能降低传染性单核细胞增多症的发病率能降低传染性单核细胞增多症的发病率临床病原教研室：孙艳临床病原教研室：孙艳EB病毒感染与多发性硬病毒感染与多发性硬化症的关系研究化症的关系研究 课题来源 该课题分别列为黑龙江省教该课题分别列为黑龙江省教育厅一般科研项目和齐齐哈尔育厅一般科研项目和齐齐哈尔市科技局指令项目，获项目经市
38、科技局指令项目，获项目经费费1.51.5万元，学院配备万元，学院配备1.51.5万元。万元。研究工作概述 该课题于该课题于20062006年年9 9月启月启动动20082008年年1212月完成全部月完成全部实验实验研究工作概述1.MS1.MS患者患者CSFCSF中中EBEB病毒（病毒（EBVEBV）相关抗）相关抗体的检测及体的检测及EBVEBV核酸的核酸的PCRPCR检测检测2.2.小鼠小鼠MSMS动物模型制备及动物模型制备及EBEB病毒感染病毒感染导致的神经系统病理变化的研究导致的神经系统病理变化的研究 研究背景 多发性硬化症（多发性硬化症（Multiple SclerosisMultip
39、le Sclerosis，MSMS）是一种中枢神经系统的脱髓鞘性疾病，病变累及是一种中枢神经系统的脱髓鞘性疾病，病变累及的部位为脑和脊髓。特点为病灶多发，常有缓解的部位为脑和脊髓。特点为病灶多发，常有缓解和复发，病残性大。表现为多种神经系统的症状和复发，病残性大。表现为多种神经系统的症状和体征。有复发缓解型、继发进展型、原发进展和体征。有复发缓解型、继发进展型、原发进展型、复发进展型和良性型、复发进展型和良性MSMS等数种类型，多见于欧等数种类型，多见于欧洲及北美国家，在西方社会洲及北美国家，在西方社会MSMS是造成青壮年神经是造成青壮年神经性残疾中仅次于外伤的第二大因素。性残疾中仅次于外伤的
40、第二大因素。过去认为此病在我国较罕见，但近年来随过去认为此病在我国较罕见，但近年来随着诊断手段和医疗水平的不断提高，陆续有此着诊断手段和医疗水平的不断提高，陆续有此类病例报道，并且发病率呈上升趋势，尤其是类病例报道，并且发病率呈上升趋势，尤其是在我国高纬度地区，如黑龙江发病率较高。尽在我国高纬度地区，如黑龙江发病率较高。尽管目前对管目前对MSMS的病因及病理机制尚未完全明了，的病因及病理机制尚未完全明了，但认为但认为MS MS 的发病与遗传、病毒、免疫、环境的发病与遗传、病毒、免疫、环境地理等因素有关，是多因素共同作用的结果。地理等因素有关，是多因素共同作用的结果。关于关于EBEB病毒感染与多
41、发性硬化症的关系病毒感染与多发性硬化症的关系研究，国外研究只证明，研究，国外研究只证明，EBVEBV感染与感染与MSMS发病发病高度相关，而国内目前尚属空白，至今没高度相关，而国内目前尚属空白，至今没有直接的实验证据证明有直接的实验证据证明EBVEBV感染可以导致感染可以导致MSMS二者研究的报道，如果我们能开展此项研二者研究的报道，如果我们能开展此项研究将能填补国内研究领域的空白。究将能填补国内研究领域的空白。EBVEBV与人类许多疾病密切相关，如：传染与人类许多疾病密切相关，如：传染性单核细胞增多症，性单核细胞增多症，EBVEBV相关嗜血细胞综合症，相关嗜血细胞综合症，鼻咽癌，淋巴瘤等。目
42、前国外研究只证明鼻咽癌，淋巴瘤等。目前国外研究只证明EBVEBV感染与感染与MSMS发病高度相关，国内目前尚属空白，发病高度相关，国内目前尚属空白，至今没有直接的实验证据证明至今没有直接的实验证据证明EBVEBV感染可以导感染可以导致致MSMS的研究。的研究。本课题将从临床抗体检测、病毒核酸本课题将从临床抗体检测、病毒核酸检测、检测、MSMS小鼠神经系统病理变化等方面小鼠神经系统病理变化等方面研究研究EBVEBV感染与感染与MSMS发病间的关系，将为探发病间的关系，将为探讨讨MSMS致病机制和治疗提供理论基础。致病机制和治疗提供理论基础。ELISAELISA法法EBV IgGEBV IgG检测
43、试剂盒（上海生物制检测试剂盒（上海生物制品研究所）、多功能酶标仪（奥地利迪肯品研究所）、多功能酶标仪（奥地利迪肯公司产品）、公司产品）、EBV-DNA-PCREBV-DNA-PCR试剂盒试剂盒(EBV-DNA(EBV-DNA：269bp,269bp,华美生物工程公司华美生物工程公司)、PCRPCR仪仪(美国美国MJMJ公司产品公司产品)、凝胶成像系统、垂直电泳仪、凝胶成像系统、垂直电泳仪 豚鼠由哈尔滨兽医研究所提供。豚鼠由哈尔滨兽医研究所提供。主要试剂和主要仪器主要试剂和主要仪器1.1.通过酶免疫法检测对临床通过酶免疫法检测对临床MSMS患者的患者的CSFCSF中中EBVEBV特异的特异的Ig
44、GIgG水平，对水平，对MSMS患者患者CSFCSF中中EBVEBV核酸的核酸的检测。检测。2.2.构建动物模型，将灭活构建动物模型，将灭活EBVEBV和和EBVEBV提取蛋白提取蛋白接种小鼠足垫，观查神经系统病理变化。接种小鼠足垫，观查神经系统病理变化。实实 验验 方方 法法实实 验验 方方 法法实实 验验 方方 法法 实实 验验 方方 法法实实 验验 方方 法法 实实 验验 方方 法法实实 验验 方方 法法 实实 验验 方方 法法 实验结果实验结果实验结果实验结果PCRPCR法检测脑脊液（法检测脑脊液（CSFCSF）中）中EBV-DNAEBV-DNA图图1 MS1 MS组组EBV-DNA
45、PCREBV-DNA PCR扩增结果扩增结果Fig1 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA Fig1 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA P.positive control;N.negative controlP.positive control;N.negative control；Line1-9.PCR Line1-9.PCR products of MS group(9,negative)products of MS group(9,negati
46、ve)P N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 图图2 MS2 MS组组EBV-DNA PCREBV-DNA PCR扩增结果扩增结果Fig2 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA Fig2 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA 10-15.PCR products of MS group;M.DNA MarkerX174 10-15.PCR products of MS group;M.DNA MarkerX174 10 11 12 13 14 15 M
47、PCRPCR法检测脑脊液（法检测脑脊液（CSFCSF）中）中EBV-DNAEBV-DNA图图3 MS3 MS组组EBV-DNA PCREBV-DNA PCR扩增结果扩增结果Fig3 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA Fig3 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA 16-21.PCR products of MS group;M.DNA MarkerX174 16-21.PCR products of MS group;M.DNA MarkerX174
48、16 17 18 19 20 21 MPCRPCR法检测脑脊液（法检测脑脊液（CSFCSF）中）中EBV-DNAEBV-DNA图图4 MS4 MS组组EBV-DNA PCREBV-DNA PCR扩增结果扩增结果Fig4 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA Fig4 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA 22-26.PCR products of MS group;M.DNA MarkerX174 22-26.PCR products of MS grou
49、p;M.DNA MarkerX174（2525：negativenegative）22 23 24 25 26 MPCRPCR法检测脑脊液（法检测脑脊液（CSFCSF）中）中EBV-DNAEBV-DNA图图1 MS1 MS组组EBV-DNA PCREBV-DNA PCR扩增结果扩增结果Fig1 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA Fig1 Agarose gel electrophoresis of PCR product of EBV-DNA P.positive control;N.negative controlP.
50、positive control;N.negative control；Line1-9.PCR Line1-9.PCR products of MS group(9,negative)products of MS group(9,negative)P N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 PCRPCR法检测脑脊液（法检测脑脊液（CSFCSF）中）中EBV-DNAEBV-DNA实验结果实验结果 图图1 1血管周围炎性浸润血管周围炎性浸润Fig 1 Fig 1 Inflammatory infiltration around Inflammatory infiltration around bl
