1、第七章甾体激素类药物的分析第七章甾体激素类药物的分析 Chapter 7Chapter 7 Analysis of SteroidAnalysis of Steroid Hormone Drugs Hormone Drugs徐新军徐新军药物分析教研室药物分析教研室 E-mail: TEL:39940341，139240617792 本章大纲本章大纲Outlinen甾体激素类药物的分类和结构特征。甾体激素类药物的分类和结构特征。n甾体激素类药物的鉴别试验。甾体激素类药物的鉴别试验。n甾体激素类药物的特殊杂质检查。甾体激素类药物的特殊杂质检查。n甾体激素类药物的含量测定。甾体激素类药物的含量测定。
2、n1.了解本类药物的了解本类药物的分类、结构特征与分析方法分类、结构特征与分析方法之间的关系之间的关系。n2掌握本类药物的掌握本类药物的鉴别方法鉴别方法。n3掌握本类药物的掌握本类药物的特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法。n4掌握本类药物的掌握本类药物的含量测定方法含量测定方法。内容内容要求要求3钟院士说，“从以往的经验来说，肺炎是不能使用激素的，因为激素会降低人体的抵抗力，但经过活检和观察，发现非典有一个纤维化过程，因此我们反其道而行之，大剂量使用皮质激素皮质激素，取得了良好的效果”。钟院士感慨地说，“这次经历让我深刻地体会了不畏上、不惟书，用事实说话不畏上、不惟书，用事实说话的巨大力量”。
3、49秒秒79夺得金牌，这是人类第一次跑进夺得金牌，这是人类第一次跑进9秒秒80 。全世界都在为新的人类极限速度兴奋不已。然而，仅过一天，约翰逊便被曝出兴奋剂检测呈阳性，医生在他的尿样中找出了违禁的兴奋剂。弗朗西斯、约翰逊和他的私人运动医生阿斯塔法都承认约翰逊曾经服用过类固醇。根据阿斯塔法披露的细节，在汉城奥运会前的26天他最后一次给约翰逊注射过一种合成物质，而这种物质本来是用来给牛增肥的。 5什么是合成代谢类固醇n合成代谢类固醇类似于合成雄性性激素合成雄性性激素。它们是一类在结构及活性上与人体雄性激素睾酮相似的化学合成衍生物化学合成衍生物。合成代谢的作用可以提提高骨骼肌的增长高骨骼肌的增长，而
4、雄性性激素的作用可以使男性性特征更加明显。所有的合成雄性激素类固醇都有与睾酮相似的化学结构。这类药物除具有增加肌肉块头和力量肌肉块头和力量，并在主动或被动减体重时保持肌肉体积的作用外，还具有雄激素的作用。此外，还可加快训练后的恢复，有助于增加训练强度和时间。但是，如果不同时进行系统的力量训练，服不同时进行系统的力量训练，服用这类药物就没有增长肌肉的作用用这类药物就没有增长肌肉的作用。n合成代谢类固醇在1930年首先用于治疗性腺机能减退（睾丸内不能产生足够的睾丸激素来满足生长和性功能的需要）。之后，它主要是用来治疗青春期晚到，阳痿等。其中最主要的一个原因是可以提高某些人在体育比赛中的水平。在竞技
5、健美运动员中，滥用类固醇的比例非常之高！在其它竞技项目中滥用类固醇也是普遍存在的。n别外一个主要原因是类固醇可以增加肌肉围度或减少体内的脂肪增加肌肉围度或减少体内的脂肪。这个主要指患有行为综合症的人。他们对自己的身体有一个非常扭曲理解。男性会认为他的的体格瘦小，即使这些男性的休格已经够发达了；女性而会认为他们的身材太胖了，即使这些女性已经足够苗条动人了。6 7定 有着天使的面孔和魔鬼的身材有着天使的面孔和魔鬼的身材,令人惊艳不已令人惊艳不已 但人妖在法律上是定为男性的。但人妖在法律上是定为男性的。 为了维持女性的皮肤和身姿形态，必须使生理机能全部打乱。这样就不得不过量为了维持女性的皮肤和身姿形
6、态，必须使生理机能全部打乱。这样就不得不过量打针，吃药，注射打针，吃药，注射雌性激素雌性激素，包括口服，包括口服避孕药避孕药等，使内分泌失调，产生男人女性等，使内分泌失调，产生男人女性化的心态，渐渐出现女性特征。化的心态，渐渐出现女性特征。 8第一节第一节 基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲SECTION 1 GERERAL STRUCTURESSECTION 1 GERERAL STRUCTURESCyclopentanoperhydrophenanthrene skeletonCyclopentanoperhydrophenanthrene skeleton C20C21AB
7、CD123456789101112131415161718199环上双键的表示方法：环上双键的表示方法：用用“ ”表示表示 ,双双键的位置写在键的位置写在 的右上角。的右上角。 双键位置双键位置45456514255101,45(10)复习复习ABBBBAAA10 构型、构型、 构型构型 构型：构型：n环上取代基构型表环上取代基构型表示方法：示方法： 与母核连接的与母核连接的取代基取代基,指向环平指向环平面的背面时面的背面时,为为 构构型型 . 用 虚 线 表 示用 虚 线 表 示“” 构型：构型：n环上取代基构型表环上取代基构型表示方法：示方法： 与母核连接的与母核连接的取代基取代基,指向环
8、平指向环平面的前面时面的前面时,为为 构构型型 . 用 实 线 表 示用 实 线 表 示“”复习复习11n变性人服用何种激素变性人服用何种激素n运动员服用的违禁药是那类激素运动员服用的违禁药是那类激素n保健饮品及运动饮料中添加的违禁药是保健饮品及运动饮料中添加的违禁药是那类激素那类激素n非典中大量使用了什么激素非典中大量使用了什么激素思考题思考题12分类分类Classification甾体激素甾体激素Steroid hormonesSteroid hormones荷尔蒙荷尔蒙肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素adrenal cortex hormones (Cortisone)性激素性激素hormo
9、nes雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素Androgen & nabolic steroids孕激素孕激素Progestogens雌激素雌激素Estrogens13肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素Adrenal cortex hormones OHOOHOCH2OHHHH氢化可的松氢化可的松:共扼体系共扼体系还原性还原性抗炎药14肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素Adrenal cortex hormones OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松醋酸地塞米松dexamethasone acetate91621143176515第一节第一节 结构与性质结构与性质Structure a
10、nd charactercharacter: : 主要活性基团主要活性基团性性 质质A环环4 3 酮酮 UV、与羰基、与羰基试剂反应试剂反应 C17 醇酮基醇酮基还还 原原 性性 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素CCH2OHOOOOH1720213416一、雄性激素一、雄性激素Female hormones丙酸睾酮丙酸睾酮OOHHHHOCH317二、蛋白同化激素二、蛋白同化激素Anabolic steroids 促进蛋白质合成促进蛋白质合成,减少氨基酸分解减少氨基酸分解,使肌肉增长使肌肉增长,体体重增加重增加 苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙OOHHHHO182. 雄性激素及蛋白同雄性激素及蛋白同 化激
11、素化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基、与羰基试剂反应试剂反应 C17 羟基羟基可成酯可成酯OOHHHHOCH3丙酸睾酮丙酸睾酮19三、孕激素三、孕激素Progestogens黄体酮黄体酮ProgesteroneCOHHHCH3O乙酸甲地孕酮乙酸甲地孕酮左炔诺孕酮左炔诺孕酮炔诺酮炔诺酮203. 孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应C17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰化纳反应化纳反应COHHHCH3O21四、雌激素四、雌激素Female hormones CHOHHHOHCH炔雌醇炔雌醇224.雌激素雌
12、激素CHOHHHOHCH主要活性基团主要活性基团性性 质质A环为苯环环为苯环C3有酚羟基有酚羟基UV、与重氮苯、与重氮苯磺酸盐反应磺酸盐反应C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3反应反应C17 羟基羟基可成酯可成酯23第二节第二节 理化特性与鉴别试验理化特性与鉴别试验Identification testIdentification test熔点熔点 衍生物测熔点衍生物测熔点比旋度比旋度吸收系数吸收系数IRHPLCTLC呈色反应呈色反应沉淀反应沉淀反应24一、性状与物理常数一、性状与物理常数1、熔点熔点 （1）毛细管法 （2） DSC法2、比旋度比旋度-检查药物的纯度 1dm 1g/ml 一定波长
13、和温度3、吸收系数吸收系数E（1）仪器校正）仪器校正（2）溶剂检查）溶剂检查（3）最大吸收波长校对）最大吸收波长校对（4）吸收池及供试溶液的要求）吸收池及供试溶液的要求252627二二 、化学鉴别法、化学鉴别法 n （一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应color-producing color-producing reaction reaction with strong acid 甾体激素类药物甾体激素类药物呈色呈色H2SO4 或或 H3PO4 HClO4 或或 HCl（母核（母核skeleton ）CCH2OHOOOOH苯甲酸雌二醇：苯甲酸雌二醇：取本品约取本品约2mg，加硫酸，加
14、硫酸2ml使溶解，溶液即显黄绿色，并有蓝色使溶解，溶液即显黄绿色，并有蓝色荧光；将此溶液倾入水荧光；将此溶液倾入水2ml，溶液显淡橙色。，溶液显淡橙色。28与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀释加水稀释泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙带橙 清清29(二二) 官能团的反应官能团的反应reaction of functional groups碱性酒石酸酮碱性酒石酸酮(裴林试剂裴林试剂)、
15、氨制硝酸银、氨制硝酸银(多伦试剂多伦试剂)、四氮唑四氮唑肾上腺皮质肾上腺皮质激素药物激素药物呈色（甲缵）呈色（甲缵）四氮唑盐四氮唑盐OH1 C17 醇酮基的还原反应醇酮基的还原反应还原性还原性A. 呈色反应呈色反应CCH2OHOOOOHTLC显色鉴别、含量测定显色鉴别、含量测定（皮质激素类药物的鉴别反应）30B. 沉淀反应沉淀反应肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物氨制硝酸银氨制硝酸银 碱性碱性 酒石酸铜酒石酸铜Ag黑色黑色Cu2O橙红色橙红色31甾酮类激素药物甾酮类激素药物呈色（黄色腙）呈色（黄色腙）羰基试剂羰基试剂2. C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-
16、二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼CCH2OHOOOOH3OOHNCONHNH2HClCONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）睾酮睾酮OOHNCONHNH2HClCONHNOHN异烟腙（异烟腙（黄色黄色）睾酮睾酮OCCH3O2NCONHNH2HCl黄体酮黄体酮CONHNCCH3NHNOCNN异烟双腙（异烟双腙（黄色黄色）34具有具有甲酮基甲酮基或活或活泼泼亚甲基亚甲基的甾体的甾体激素类药物激素类药物呈色呈色亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛3. 甲酮基甲酮基黄体酮反应显蓝紫色黄体酮反应显蓝紫色COHHHCH3O蓝紫色35黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫
17、色亚硝基铁亚硝基铁 氰化纳氰化纳其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色H2O2+-4Fe5CNNOCHCOOCOCH3O黄体酮黄体酮 NOCNFe OH37雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸4. 酚羟基酚羟基雌激素雌激素C3位上的酚羟基位上的酚羟基 CHOHHHOHCH38有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl5. 有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈色呈色 OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOH茜素氟蓝茜素氟蓝OOOHOCH2NCH2COOCeCH2COOFOHF- Ce40含炔基的含炔基的
18、甾体激素甾体激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银6. 乙炔基乙炔基RCCHAgNO3RCCAgCHOHHHOHCH417、酯的反应、酯的反应nC17或或C21位上羟基形成的酯，位上羟基形成的酯，一般先行水解，产生相应的酸，一般先行水解，产生相应的酸，再根据羧酸的性质进行鉴别。再根据羧酸的性质进行鉴别。 KOHOCOCHR醇制醇制 OCOCHCHCH SOHOHHC OOHHHHOCH3醋酸地塞米松42 戊酸戊酸戊酸雌二醇戊酸雌二醇醇制醇制NaOH H己酸己酸己酸羟孕酮己酸羟孕酮醇制醇制 OH H43 黄体酮双酮肟黄体酮双酮肟黄体酮黄体酮盐酸羟胺盐酸羟胺 .p .m 苯甲酸酯苯甲酸酯炔雌醇炔雌醇苯甲
19、酰氯苯甲酰氯KOH .p .m三、制备衍生物测定三、制备衍生物测定m.p.（一）成酯及月亏（一）成酯及月亏方法烦琐但专属性强 .p .m 睾丸素睾丸素丙酸睾酮丙酸睾酮醇制醇制KOH盐酸氨基脲盐酸氨基脲苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙分解约182.pm缩缩氨氨基基脲脲衍衍生生物物（二）缩氨基脲的形成及酯的水解（二）缩氨基脲的形成及酯的水解-3-酮酮 240nm苯环苯环 280nmOCCCCCCCCC 三三 、紫外分光光度法、紫外分光光度法 Ultra-Violet spectrometry464748CH33003000cm-1HC 30002700cm-1OC 19001650cm-1CC 1650145
20、0cm-11000650cm-1CH 四四 、IR法法Infra-red spectrometry37503300cm-1OH 49五、五、TLC法法Thinner layer chromatography 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的要求供试品溶液所显主斑点的颜色颜色和和位置位置与对照品溶液的主斑点相同。与对照品溶液的主斑点相同。50六、六、 HPLC法法High performance liquid chromatography 主要用于主要用于 甾体激素类药物制剂的甾体激素类药物制剂的鉴别（如：
21、醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）轻松软膏） 方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的中，供试品峰的tR与对照品峰的与对照品峰的tR一致。一致。51第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查 Special impurity test 一、其他甾体的检查一、其他甾体的检查1. 定义定义 药物中存在的具有甾体结构的其他物质都药物中存在的具有甾体结构的其他物质都称为称为“其他甾体其他甾体”。2.其他甾体来源其他甾体来源:可能是可能是合成的原料、中间体、副合成的原料、中间体、副产物以及降解物产物以及降解物等
22、。等。3.其他甾体的检查方法：其他甾体的检查方法：色谱法色谱法52（一）（一）TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 由于多数杂质是未知的由于多数杂质是未知的,且杂质与药物且杂质与药物结构相似结构相似,所以多采用高低浓度对比法检查所以多采用高低浓度对比法检查,即用供试品的稀溶液作为对照即用供试品的稀溶液作为对照,进行检查进行检查.判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色53炔诺酮炔诺酮TLC图图54醋酸氟轻松醋酸氟轻松 检查检查 其他甾体其他甾体 取本品加氯仿取本品加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）制成）制成3.0mg/ml作为供试液，精
23、密量取适量，加氯仿作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）稀释成）稀释成0.06mg/ml作为对照液；作为对照液；照薄层色谱法，各取照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿板上，以氯仿-甲醇（甲醇（97 : 3）为展开剂，展）为展开剂，展开后晾干，在开后晾干，在105干燥干燥10分钟，放冷，喷以分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液个，其颜色与对照液的 主 斑 点 比 较 ， 不 得 更 深 。的 主 斑 点 比 较 ， 不 得
24、更 深 。1255%.% 限量限量控制的总杂质限量是多少控制的总杂质限量是多少?56 TLC检查其他甾体特点：检查其他甾体特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器；）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品；）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量；）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近近。5758（二）（二）HPLC法法(主成分自身对照法）主成分自身对照法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积规定杂质峰面积 取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成每配制
25、成每1ml含含2mg的溶液（的溶液（1）与每）与每1ml含含0.02mg的溶液（的溶液（2），用含量测定项下的方法），用含量测定项下的方法和溶液，取和溶液，取10l注入液相色谱仪，调整仪器灵注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（别取溶液（1）和溶液（和溶液（2）各）各5l，进样。记录，进样。记录至主成分峰保留时间的至主成分峰保留时间的1.5倍。溶液（倍。溶液（1）显示）显示的杂质峰数不得超过的杂质峰数不得超过1个，溶液（个，溶液（1）显示的杂）显示的杂质峰面积不得大于溶液（质峰面积不得大于溶液（2）主峰面积的）主
26、峰面积的3/460为什么不用归一化法？为什么不用归一化法？61 特点：特点：（1）需特殊的仪器；）需特殊的仪器； （2）不需对照品；）不需对照品； （3）可以控制杂质的总量；）可以控制杂质的总量；62二、硒的检查二、硒的检查n原理：原理： 先将有机药物用氧瓶燃烧先将有机药物用氧瓶燃烧破坏后，用二氨基萘比色法破坏后，用二氨基萘比色法测定测定 来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢剧毒剧毒 原理原理nmA 环己烷环己烷苯并苯硒二唑苯并苯硒二唑二氨基萘二氨基萘 ,Se, .pH SeSe盐盐酸酸羟羟胺胺氧氧瓶瓶燃燃烧烧方法方法二、硒的检查二、硒的检查0.005
27、%0.01%64三、有机溶剂残留量的检查三、有机溶剂残留量的检查n气相色谱法气相色谱法n顶空气相色谱法顶空气相色谱法采用进样针在一定条件下一定温度下对固采用进样针在一定条件下一定温度下对固体、液体、气体等进行萃取吸附，然后在体、液体、气体等进行萃取吸附，然后在气相色谱分析仪上进行脱附注射。萃取过气相色谱分析仪上进行脱附注射。萃取过程常在固相微萃取平台上进行。程常在固相微萃取平台上进行。 651：乙醇：乙醇2：丙酮：丙酮3：二氯甲烷：二氯甲烷4：正己烷：正己烷5：乙酸乙酯：乙酸乙酯6：苯：苯7：甲苯：甲苯8：DMF 瑞舒伐他汀中间体瑞舒伐他汀中间体VI中残留溶剂的测定中残留溶剂的测定66徐新军等
28、徐新军等.气相色谱法测定隐丹参酮中溶剂残留气相色谱法测定隐丹参酮中溶剂残留.中药新药与中药新药与临床药理临床药理,2008,19(3):220-222Minutes123456789101112Millivolts-100-50050100150200Millivolts-100-50050100150200 67（二）游离磷酸（二）游离磷酸地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法对照品法C21位羟基与磷酸位羟基与磷酸形成的磷酸酯二钠形成的磷酸酯二钠盐盐68原理：原理：OnHMoOPNHPOHPOMoONH
29、H241034)(4334)(44还原钼蓝对照液供试液对样还原钼酸铵AAnm 740方法：方法：1-氨基氨基-2-萘酚萘酚-4-磺酸磺酸磷钼酸铵1-氨基氨基-2-萘酚萘酚-4-磺酸磺酸69（对照液对照液 0.0035%KH2PO4） POKHPOH%.%.L %. 70第四节第四节 含量测定含量测定Assay 根据官能团和整个分子的特征可采用比色法、根据官能团和整个分子的特征可采用比色法、UV法、荧光法、法、荧光法、GC法、法、HPLC法。法。一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法 专属性强，广泛用于甾体激素类药物原料专属性强，广泛用于甾体激素类药物原料与制剂的含量测定。与制剂的含量测定。 使用
30、使用RP-HPLC法，固定相为法，固定相为ODS柱，流动柱，流动相为：甲醇相为：甲醇-水或乙腈水或乙腈-水。水。 71HPLC法法USP、BP、JP均采用均采用RPHPLC（大多内标法）（大多内标法）X特点特点: 用样量少，灵敏度高，分离效用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快果好，测定速度快（甾体激素类药物常含有结构相似的（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）的比色法有干扰）徐新军。内标法在液相色谱应用中的局限性。中国药事，徐新军。内标法在液相色谱应用中的局限性。中国药事，1999，第四期，第四期7273二、二、
31、UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 口服避孕药口服避孕药苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素吸收系数法专属性不强，原料药中其他甾体杂质、专属性不强，原料药中其他甾体杂质、制剂中的一些辅料对制剂中的一些辅料对UV测定均有干扰，测定均有干扰，已逐渐被已逐渐被HPLC所取代。所取代。74三、比色法三、比色法Colourimetry（一）异烟肼比色法（一）异烟肼比色法肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素1. 原理原理异烟腙（黄）异烟腙（黄）酮基酮基异烟肼异烟肼
32、CHCl（缩合）（缩合）C3酮基酮基75CONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）76讨论（一）讨论（一）1、溶剂的选择：、溶剂的选择： 异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐无水甲醇、无水乙醇无水甲醇、无水乙醇2、酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度、酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度 酸与异烟肼的摩尔浓度比为酸与异烟肼的摩尔浓度比为2：1获最获最大吸收大吸收77讨论讨论3、水分、温度、光线与、水分、温度、光线与O2的影响的影响v含水量含水量腙水解腙水解A%vO2与光线无影响与光线无影响v 温度温度t 4、反应专属性、反应专属性 v C3= O C17= O 、 C20= O, C11= O 不反应不反应 C3酮
33、基专属性强酮基专属性强78 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C17 -醇酮基醇酮基强还原性强还原性1. 原理原理有有色色甲甲瓒瓒四四氮氮唑唑盐盐醇醇酮酮基基 COH -还原还原 （二）（二） 四氮唑比色法四氮唑比色法醛基醛基酮酮甾基甲酸衍生物甾基甲酸衍生物醇酮基醇酮基 eO羧酸衍生物羧酸衍生物羟基羟基 OH-分子重排分子重排OOHHOHCOHOCOHCNNNNH三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）nm490480max OHe2 TTCCl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3蓝四氮唑蓝四氮唑（BT） OHe4 H
34、CNNNNOC H3HCNNNNOC H3双甲瓒（暗蓝）双甲瓒（暗蓝）nmmax525 82 2. 方法方法ChP TTC（RT） BP TTC（RT）USP BT对照品法对照品法 氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC4045暗暗无水乙醇无水乙醇485nm83 醋酸泼尼松龙软膏醋酸泼尼松龙软膏 含量测定含量测定对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置，置100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀刻度，摇匀,即即D。供试液：精密称取本品供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松
35、龙（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置浴中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。摇匀，即得。84 测定法：精密量取上述溶液各测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别置，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与与氯化三苯四氮唑试液氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再
36、各精密，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在，摇匀，在25暗处放置暗处放置4050分钟，照分光光度法，在分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，的波长处分别测定吸收度，计算，即得。操作应避光。即得。操作应避光。85讨论讨论 本法广泛用于本法广泛用于皮质激素皮质激素的测定，但的测定，但多种因素如皮质激素的结构、溶剂、反多种因素如皮质激素的结构、溶剂、反应温度和时间、水分、碱的浓度、空气应温度和时间、水分、碱的浓度、空气中氧等对甲瓒形成的速度、呈色强度和中氧等对甲瓒形成的速度、呈色强度和稳定性都有影响稳定性都有影响。86（1） 基团对反应速度
37、的影响基团对反应速度的影响C11= O C11OHC21OH C21-酯酯C16无论何种取代基无论何种取代基 （2） 溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 A 无水乙醇无水乙醇87（3）碱的种类及加入顺序）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳氢氧化四甲基铵的结果最佳碱碱试试液液四四氮氮唑唑盐盐皮皮质质激激素素溶溶液液加入顺序：加入顺序：（4） 温度与时间温度与时间t室温或室温或30 恒稳条件下恒稳条件下,重现好重现好ChP
38、 25 4045BP 30 1h88（5） O2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O2影响颜影响颜色强度和色强度和稳定性稳定性隔绝空气、隔绝空气、 快速、充快速、充N2特点特点： 缺点缺点 影响因素太多影响因素太多 优点优点 测定结果能指示药物的稳定性测定结果能指示药物的稳定性（氧化及降解解产物无此反应）（氧化及降解解产物无此反应） 89 生物样品中的甾体激素分析生物样品中的甾体激素分析研究内容：研究内容：药物代谢、生物利用度、违药物代谢、生物利用度、违禁药物监测禁药物监测样品特点：样品特点：给药剂量小，血药浓度低给药剂量小，血药浓度低（ng级
39、），体内有内源性的甾体激素，级），体内有内源性的甾体激素，代谢产物多。代谢产物多。分析方法要求：分析方法要求：专属性强，灵敏度高专属性强，灵敏度高推荐方法：推荐方法：GC/MS，HPLC/MS n 周同惠，分析化学、药物分析和色谱学专家。他长期致力于将分析化学新技术、新方法用于药物分析，成绩显著。 1986年起负责筹建中国兴奋剂检测中心，领导建立了5大类100种违禁药物的筛选与确证方法，1989年建成了国际奥委会认可的合格的兴奋剂检测实验室，完成第十一届亚运会的兴奋剂检测任务。特别是负责筹建中国兴奋剂检测中心，通过了国际奥委会医学委员会的考试，获得了兴奋剂检测资格，为第十一届亚运会的召开做出了
40、突出贡献。中国反兴奋剂中心检测实验室资质被暂停中国反兴奋剂中心检测实验室资质被暂停4个月个月n由于北京兴奋剂检测实验室（以下简称“实验室”）在2015年10月世界反兴奋剂机构（WADA）组织的双盲考试中报告两个假阴性结果，据此WADA决定，自2016年4月21日起暂停实验室检测资格，时间不超过4个月。n实验室待整改结束并通过WADA评审后，恢复检测工作。n原因是实验室的考试没过。为了维持反兴奋剂实验室的水平，每年，WADA都会对位于各个国家或者地区的反兴奋剂实验室进行单盲或者双盲的考试。如果一年有两个样本考试出现错误，该实验室就会被要求整改，以符合WADA的要求。91 中国反兴奋剂中心技改过关
41、中国反兴奋剂中心技改过关 被通知恢复检测资格被通知恢复检测资格8月15日，中国反兴奋剂中心得到了世界反兴奋剂机构（WADA）的通知，表示：因为北京兴奋剂检测实验室已完成技术整改并达到评审要求，决定立即恢复实验室认可资格。自即日起，北京兴奋剂检测实验室全面恢复兴奋剂检测工作。中国兴奋剂检测中心实验室通过国际奥委会的考试认证是在1989年，之后的连续27年都顺利通过了各种再认证，而2016年这次是第一次出现再认证考试失败。由于科技的发展，新型的兴奋剂以及掩盖方法层出不穷。本次里约奥运会期间，国际奥委会宣布说，发明了新的基因检测法新的基因检测法，对合成EPO进行检测。体育比赛不仅仅是赛场上的较量，反
42、兴奋剂也是一条看不见的战线。92血样检测血样检测血样分析：血样检测的目的主要是补充尿样分析血样分析：血样检测的目的主要是补充尿样分析方法的不足，目前尚处于研究探索阶段，目前仅用于方法的不足，目前尚处于研究探索阶段，目前仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等的测量。激素，睾酮等的测量。尿样检测尿样检测尿样检测：尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。尿样检测：尿样检测是兴奋剂检测的理想样本。其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中的药物其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中的药物浓度高于血液中的药物浓度；尿液中的其他干扰少。浓度高
43、于血液中的药物浓度；尿液中的其他干扰少。兴奋剂检测93分析过程 分析大体分分析大体分筛选和确认筛选和确认两个过程。两个过程。筛选：筛选：即对所有的样本进行过筛，当发现某样本可即对所有的样本进行过筛，当发现某样本可疑有某种药物或其代谢产物时，再对此样本进行疑有某种药物或其代谢产物时，再对此样本进行该药物的确认分析。该药物的确认分析。确认：确认：在进行药物的确认分析时，尿样要重新提取，在进行药物的确认分析时，尿样要重新提取，此提取过程与空白尿（即肯定不含有此药物的尿此提取过程与空白尿（即肯定不含有此药物的尿液）和阳性尿样（即服用过该药物后存留的尿样）液）和阳性尿样（即服用过该药物后存留的尿样）同时
44、进行，以保证确认万无一失。同时进行，以保证确认万无一失。94分析过程分析过程按药物的按药物的化学特征和分析方法化学特征和分析方法将所有药物分成四类：将所有药物分成四类：第一类：尿中以游离形式排泄的易挥发性含氮化合物（主要是第一类：尿中以游离形式排泄的易挥发性含氮化合物（主要是 刺激剂刺激剂）；）；第二类第二类：尿中以硫酸或葡萄糖醛酸结合的难挥发性含氮化合物：尿中以硫酸或葡萄糖醛酸结合的难挥发性含氮化合物（主要是（主要是麻醉止痛剂，麻醉止痛剂，beta阻滞剂和少数刺激剂）；阻滞剂和少数刺激剂）；第三类：化学结构和特性特殊的第三类：化学结构和特性特殊的刺激剂（咖啡因，匹莫林）和刺激剂（咖啡因，匹莫
45、林）和利尿剂；利尿剂；第四类第四类：合成类固醇及睾酮。合成类固醇及睾酮。尿样进入实验室，首先进行尿样尿样进入实验室，首先进行尿样pH和尿比重测定，然和尿比重测定，然后按以上四类药物分成四组进行筛选分析，主要是化学提取后按以上四类药物分成四组进行筛选分析，主要是化学提取和仪器分析两步，最后由计算机打出检测报告。和仪器分析两步，最后由计算机打出检测报告。 95兴奋剂的种类-（一）刺激类 n刺激类（刺激类（stimulants）刺激剂，常用的有安菲他明，其次还有咖啡因、刺激剂，常用的有安菲他明，其次还有咖啡因、可卡因、麻黄素等，计有可卡因、麻黄素等，计有40多余种之多，此类多余种之多，此类药物药物能
46、通过对神经系统的作用，增强人的精神与体力，能通过对神经系统的作用，增强人的精神与体力，其严重的副作用则是掩盖疲劳导致过度的兴奋与焦其严重的副作用则是掩盖疲劳导致过度的兴奋与焦虑，影响运动员的判断能力常易造成受伤，并导致虑，影响运动员的判断能力常易造成受伤，并导致心率及血压的急速上升，此外还可能造成脱水，诱心率及血压的急速上升，此外还可能造成脱水，诱发脑溢血和心脏疾病。发脑溢血和心脏疾病。96兴奋剂的种类兴奋剂的种类-（二）麻醉镇痛（二）麻醉镇痛n麻醉镇痛剂麻醉镇痛剂，包括吗啡、其衍生物及同类合成制剂。 使用后能使人产生快感及心理亢奋，给运动员造成能超越体能的幻觉，并降低痛感使运动员感觉不到受伤
47、的真实情况，仍继续参加比赛从而造成更为严重的伤害。常用则会成瘾，故还易引起严重的生理及社会问题。97兴奋剂的种类兴奋剂的种类-（三）阻滞剂（三）阻滞剂n阻滞剂阻滞剂（beta blockers）阻滞剂，目前有阻滞剂，目前有9种，如心得安、心种，如心得安、心得宁、心得平等。这类药物具有镇静的得宁、心得平等。这类药物具有镇静的作用，使用范围主要在作用，使用范围主要在技能类难和准确技能类难和准确性高中，目的是为了减少心脏的过度兴性高中，目的是为了减少心脏的过度兴奋，降低焦虑稳定情绪奋，降低焦虑稳定情绪。98兴奋剂的种类兴奋剂的种类-（四）合成类固醇（四）合成类固醇n合成类固醇合成类固醇（anabol
48、ic steroids）合成类固醇，亦叫同化激素。最常用的有：大力合成类固醇，亦叫同化激素。最常用的有：大力补、康力龙、苯丙酸诺龙、癸酸诺龙等。这些药物作补、康力龙、苯丙酸诺龙、癸酸诺龙等。这些药物作为兴奋剂作用可以说是频率最高范围最广的一类。据为兴奋剂作用可以说是频率最高范围最广的一类。据国外报道称国外报道称：“用过的及想用的几乎占了参赛者的用过的及想用的几乎占了参赛者的8090%。此类药物通过口服或注射，可增强运动。此类药物通过口服或注射，可增强运动员的肌肉，然而它们会干扰运动员体内自然激素的平员的肌肉，然而它们会干扰运动员体内自然激素的平衡，产生一些严重的副作用。衡，产生一些严重的副作用
49、。在男性中，这些副作用在男性中，这些副作用包括性格改变，肾功能异常乳房增大及早秃；在女性包括性格改变，肾功能异常乳房增大及早秃；在女性中则会引起肌肉增生，月经失调，体毛过度生长中则会引起肌肉增生，月经失调，体毛过度生长。99兴奋剂的种类兴奋剂的种类-（四）利尿剂（四）利尿剂n利尿剂利尿剂（diuretics）顾名思义，此类药物有稀释尿液的功能。利尿剂现有15种，主要用于掩盖或“清洗”体内其它违禁药品的存在，以逃避兴奋剂检查。100兴奋剂的种类兴奋剂的种类-（五）血液回输技术（五）血液回输技术n血液回输技术血液回输技术（blood doping）系源于人体自身的血液，称为血液兴奋剂或称自血回输。
50、即从运动员本人体内抽出一定数量的血液，经处理后储备待用，赛前17天再将血细胞随生理盐水输回原抽血者体内，目的是增加循环系统中的红细胞数，籍此提高血液的携氧能力。研究表明，运动员经自血回输后，最大吸氧量和持续运动到极限的时间均有增加。101兴奋剂检测的难度兴奋剂检测的难度n（1）药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原）药物及其代谢物的种类多，变化大，禁用的百余种药物以原体或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，体或一个或多个代谢产物的形式存在与人体体液中，因此，需要检测因此，需要检测和确证的化合物多达几百种。除此以外，用药后的不同时间，这些化和确证的化合物多达几百种。除此以外，
