1、药理学实验药理学实验药学实验教学中心实验一 药理实验的基本知识一、药理实验课的目的1、了解药理学实验的特点2、了解药理实验的基本方法（行为学、形态学、生理学等学科的技术方法，整体动物、离体器官组织、细胞、分子等不同水平的实验技术）3、掌握药理学实验的基本技能(实验动物的选择、编号、捉持、给药、麻醉、处死等）4、验证药理学的基本理论5、培养动手能力二、药理实验的基本要求1、实验前：预习实验内容2、实验时：分工协作，细心操作，认真观察，详细记录。3、爱护动物，爱护器材4、实验后：擦洗实验器材，清理后归还老师。将动物放回指定的地点，搞好教室清洁卫生，书写实验报告。三、实验报告的写作1、题目2、目的3
2、、原理4、方法5、结果：应客观、准确的描述实验现象。按要求收集与处理实验结果。 量反应资料整理、质反应资料整理。6、讨论：根据已知的理论知识对实验结果进行分析和解释。7、结论：对分析讨论的总结与概括，应简明扼要，定义确切。四、常用器械的使用方法1、注射器的使用2、手术器械的使用五、实验动物的捉拿与给药方法1、小白鼠的捉拿方法2、小白鼠的给药方法3、小鼠的雌雄鉴别4、兔子的捉拿与给药方法5、动物的处死方法药物的协同作用和拮抗作用目的 观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用材料 家兔、0.5%硫酸阿托品，0.1%盐酸肾上腺素，0.2%硝酸毛果芸香碱原理 1+12 协同作用 拮抗作用 1+12 1+1=2
3、 作用于虹膜括约肌M受体 毛菓芸香碱（拟胆碱药） 滴眼 缩瞳 使虹膜括约肌收缩拮 拮抗(非竞争性)抗 作用于虹膜辐射肌的受体 肾上腺素 滴眼 扩瞳 使虹膜辐射肌收缩 协同 作用于虹膜括约肌M受体 阿托品 （抗胆碱药） 滴眼 扩瞳 使虹膜括约肌松驰 记录讨论题从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮抗作用 项 目 正 常 毛果芸香碱 肾上腺素阿托品瞳孔 左眼大小 右眼药物的局部作用与吸收作用 目的观察药物对动物机体的局部作用和吸收作用材料兔子；兔固定箱、镊子、注射器、兔用麻醉口罩；松节油、0.1硝酸士的宁、麻醉乙醚、5%水合氯醛注射液方法1、取兔一只放于兔固定箱内，对光观察兔耳血管粗细及颜色等情况
4、，然后对一只兔耳涂擦松节油，待两分钟后对比两只兔耳有何不同？2、将兔称重，先观察正常活动，用镊子轻击四肢和背部，看有何反应。（1）给兔皮下注射0.2%硝酸士的宁注射液0.2ml/kg，用药后每隔二分钟用镊子轻击四肢，观察兔有何反应。（）待兔出现典型的士的宁中毒症状（表现为全身痉挛，角弓反张，呼吸暂停等）后，立即套上有麻醉乙醚的兔口罩，再观察兔的反应。（）当兔的中毒状态消失后，除去麻醉口罩，静注水合氯醛注射液2ml/kg 讨论题记录实验结果，说明哪种作用是局部作用？哪种作用是吸收作用 不同给药途径对药物作用的影响 目的观察不同途径给药对药物效应的影响材料小白鼠只；注射器、小白鼠灌胃器、钟罩、电子
5、秤、镊子、3.5%硫酸镁溶液、5%炭末阿拉伯胶混悬液、0.3%戊巴比妥钠。方法一、灌胃和腹腔注射硫酸镁的药效比较 取禁食12h的昆明种小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药：A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g；C：腹腔注射组：腹腔注射给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g。 给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(
6、玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。 炭末推进率计算公式： 炭末的移动距离（cm） 小肠推进率 = 100% 小肠全长（cm）记录 鼠号 体重(g) 药物及剂量 给药途径 动物反应 炭末推进率（%） A B C二、灌胃、皮下注射、腹腔注射戊巴比妥钠的效应比较 取体重相近的小白鼠只，称其体重分别放入钟罩内，观察它们的正常活动及翻正反射情况，然后用0.3%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g的量以不同途径给药,甲鼠灌胃，乙鼠皮下注射，丙鼠腹腔注射。观察小
7、白鼠用药后的反应及活动情况，以翻正反射消失时作为麻醉开始指标。记录麻醉开始时间（从给药至翻正反射消失的时间），麻醉维持时间（即从翻正反射消失至翻正反射恢复的时间），麻醉深度有何不同（用镊子夹其后肢看其反应）。记录讨论 为什么会有不同的结果？鼠号 给药方法麻醉开始时间 麻醉维持时间麻醉深度肝、肾功能对药物作用的影响实验目的 观察肝功能、肾功能损伤后对药物作用的影响。实验材料 小鼠、四氯化碳、氯化汞、戊巴比妥钠、硫酸链霉素实验方法 1、肝功能对药物作用的影响 取体重近似正常的小鼠及损坏肝脏的小鼠（实验前24小时皮下注射四氯化碳0.1ml/10g），分别腹腔注0.2%戊巴比妥钠0.1ml/10g，记
8、录并比较两组小鼠麻醉持续时间有何差别？实验原理 肝脏是药物代谢的主要器官，药物的代谢主要靠酶的催化。在肝细胞内质网上有专门催化药物的酶类（药酶）。四氯化碳是一种典型的肝脏毒物，可引起中毒性肝炎，使肝脏对药物的代谢能力降低。本实验用四氯化碳损害小鼠肝脏，使肝脏药酶活性受到抑制，从而减缓对戊巴比妥的代谢，使麻醉维持时间延长。 攻击肝细胞膜上的磷脂分子， 肝脏微粒体混合 使脂质过氧化 四氯化碳 三氯甲基自由基 (Cl3 ) 与微粒体Pr发生共价结合，损伤细胞 功能氧化酶系统 (活性代谢产物） 膜的结构功能，使可溶性酶活性 直接溶解 抑制钙泵，使Ca 2+,肝细胞膜 使肝细胞内Ca堆积 死亡 戊巴比妥
9、钠属巴比妥类药物，具有镇静催眠抗惊厥的作用。随用量的增加而出现镇静、催眠、麻醉的作用。主要在肝脏代谢失活。 镇静（自发活动减少）戊巴比妥钠 催眠（共济失调） 麻醉（翻正反射消失）记录 实验结束后将小鼠拉断颈椎处死，剖取肝脏，比较二组动物肝脏外观之不同。四氯化碳中毒小鼠的肝脏较肿大，有的充血，有的呈灰黄色，触之有油腻感，其小叶比正常肝脏更清楚。讨论题为什么损坏肝组织的小白鼠在注射戊巴比妥钠后作用时间长？有何意义？ 组别 鼠 号体重（g) 药理(ml)注射时间产生作用时间醒转时间持续时间 正 常 1 2 损坏 肝功 3 4实验方法 2、肾功能对药物作用的影响 取正常小白鼠和肾功能已被破坏的小白鼠（
10、实验前24小时腹腔注射.1%氯化高氯化汞 )各2只，称其体重，分别腹腔注射3%的硫酸链霉素 0.15ml/10g，观察小鼠的活动情况，比较两只小鼠有何不同？ 原理 氯化汞 近曲小管 电解质、氨基酸重吸收 蛋白尿 少尿 无尿 由肾小球滤过排出 肾功能受损 前庭功能平衡失调 硫酸链霉素 体内 体内蓄积 对N肌肉接头的阻滞 步态不稳、四肢游泳状、瘫软、眼球突出、死亡记录 实验结束后将小鼠拉断颈椎处死，剖取肝脏，比较二组动物肝脏外观之不同。四氯化碳中毒小鼠的肝脏较肿大，有的充血，有的呈土黄色，触之有油腻感，其小叶比正常肝脏更清楚。讨论题为什么损坏肝组织的小白鼠在注射戊巴比妥钠后作用时间长？有何意义？
11、组别 鼠 号体重（g) 药理(ml)注射时间产生作用时间醒转时间持续时间 正 常 1 2 损坏 肝功 3 4实验方法2、肾功能对药物作用的影响 取正常小白鼠和肾功能已被破坏的小白鼠（实验前24小时腹腔注射.1%氯化高氯化汞 )各2只，称其体重，分别腹腔注射3%的硫酸链霉素 0.15ml/10g，观察小鼠的活动情况，比较两只小鼠有何不同？ 记录 实验结束后可将小鼠处死，比较二组动物肾脏的差别。氯化高汞中毒小鼠的肾脏常明显肿大。如用小刀纵切，可见到皮质部较为苍白，髓质部有充血现象。 讨论题为什么两组小白鼠的表现不同？有何意义？组别鼠号体重(g)药量（ml) 注射时间产生作用时间 表 现 备 注 正
12、 常 1 2 损坏 肾功 3 4药物的配伍禁忌目的了解两种或两种以上的药物配合在一起时，可能产生的配伍禁忌。材料小白鼠、乳钵、注射器、电子秤、pH广泛试纸、液体石蜡、水合氯醛、樟脑、10%磺胺嘧啶钠、维生素B1注射液、0.1%肾上腺素、5%碳酸氢钠、0.3%戊巴比妥钠、1%安钠咖、4%硫酸镁、1.25%盐酸四环素、5%氯化钙。方法物理性配伍禁忌1、樟脑醑1ml+水1ml混浊、析出樟脑2、液体石蜡3ml+水3ml分层3、水合氯醛2g+樟脑2g液化二、化学性配伍禁忌、磺胺嘧啶钠ml+维生素B1ml磺胺嘧啶（反应前后均用pH广泛试纸测定pH值）、万u青霉素钾溶液ml1.25盐酸四环素溶液ml3、盐酸
13、肾上腺素ml碳酸氢钠ml三、药理性配伍禁忌 1、取小白鼠2只称重，其中1只肌内注射安钠咖注射液0.ml/10g，待分钟后二鼠分别腹腔注射0.戊巴比妥钠液0.ml/g，观察二鼠反应有何不同？ 2、取小白鼠只，均肌内注射硫酸镁0.2ml/10g，待出现肌肉松驰现象后，一只立即腹腔注射氯化钙0.1ml/10g，观察二鼠反应有何不同？讨论题 用以上实验结果说明药物配伍禁忌的临床实用意义。药物急性LD的测定 目的和原理 通过实验了解测定LD的方法、步骤和计算过程。 LD是指一群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物优劣的重要参数。 LD的测定方法较多，常用的有改良寇氏法、序贯法、累计
14、法等。寇氏法计算简便、结果较准确，故常用。 材料 小鼠（体重g左右）；测试药物、苦味酸、注射器、小鼠饲养笼。 注意 本实验为定量药物效价测定，要求较高的准确性，在操作过程中要求做到准确无误。改良寇氏方法 改良寇氏法的设计要求改良寇氏法的设计要求： 1、剂量组应4个(一般为5-8个)； 2、组间剂量按等比级数排列； 3、最大剂量组死亡率（Pm）为100%或相近；最小剂量组死亡率(Pn)为0或接近； 4、各组动物数相等 一、预备试验： 目的：找出上下限剂量范围和确定组数。 1、探索剂量范围：探索出使全部动物死亡的最小剂量(Dm) ，Pm=100%；使一个动物也不死亡的最大剂量（Dn)， Pn=0%
15、。（至少应找出引起1090死亡率）剂量的所在范围。 按估计量（经验或文献资料）给药，每次用3只动物。如动物全部死亡则降低剂量，如动物全不死亡则加大剂量（组间剂量比为2：1） ，直到找出Dn和Dm。 2、组距、组数的确定在预备实验所获得的0%和100%的致死量范围内确定组距、组数。 组距：指相邻两组剂量对数之差。用“”表示。K-LG-1 K、L分别为最大剂量、最小剂量的对数值；为预计组数。一般组距在0.080.1之间（值过小则分组过多，各组间死亡率重叠；值过大则分组过少，使标准误增大）。 的大小取决于实验动物对被试因素的敏感性。敏感性大，组距可小，敏感性小则组距大。上、下限剂量之间的距离可作为敏
16、感性的标志。距离大，敏感性小；距离小则敏感性大。 组数的确定：根据药物效应的强弱决定组数的多少，一般为组。根据组距大小确定实验组数、组距。1nDnDm 确定各组剂量：分别以D1、D2、D3、D4、Dm代表各组剂量。1、用组距求出各组剂量：D=D1 D D2 查反对数表，得出剂量D2 D3 2、用各组剂量公比(r)求出： r= r=1.25 根据最小剂量(Dn)和剂量公比值 (r)可计算出： D1=Dn=最小剂量 D2=D1r Dm（最大剂量）=Dm-1r 二、正式实验1、动物的分组：用分层随机分组法进行分组。 首先，按性别将动物雌雄分开或各半混合编组，然后按体重分群，再随机分组，为求使各组平均
17、体重相等。 随机分组的方法很多，随机数目法为其中的一种。 查出一个随机数字（12，该数字代表小鼠），除以组数（5），余数为几，则将该动物分到第几组。125=2 2；将此鼠分到第二组。2、给药： 最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。即先给D2、D4组，再给D5、D3、D1组。如D2组全死亡，则省去D1组不做，如D4组全不死亡，则省去D5组不做。 药物的配制1、母液的总量配制：L= m：各组受试液总量；r：各组剂量公比。 各组的总量：按0.2ml/10g.w的给药量（一般为0.10.25ml/10g.w)， 每组量：30(g) 0
18、.2ml/10g 10(只）； L=30（ml) 称药量：Dm=187.5mg/kg；等容注射量：0.2ml/10g 0.2ml/10g=20ml/kg=187.5mg/kg;187.5mg20ml=9.4mg/ml 药物总量：9.4mg/ml30ml=282(mg)2、药液的稀释：连续稀释法。 D1：从母液中直接吸所需量6ml； D2：24ml+6ml(蒸馏水） 再取6ml； D3：24ml+6ml(蒸馏水） 再取6ml； rm11结果记录和处理（）结果处理实验资料按下表列出：受试物剂量 对数剂量动物数死亡率概率单位LD50（mg/kg） (X) (只) （%） (Y) 及置信限(95%)（
19、）结果计算 根据正式实验各组死亡率按下列公式求出解磷定腹腔注射的LD50和可信限(P0.95)。 用简化概率法计算LD50；LD50=log-1Xm-i( p-0.5)， 当最小剂量组的死亡率大于0而又小于30，或最大剂量组的死亡率小于100而又大于70时，可按下列校正公式计算LD50LD50lg-1Xm-i(p- )计算lgLD50的标准误（Sx50）；Sx50=iP-P2/n-1计算95%的可信限；LD504.5 Sx50 LD50（P0.95）。 讨论 什么叫LD50？测定LD50的意义和根据是什么？43PnPm肾上腺素对普鲁卡因浸润麻醉作用的影响 目的了解肾上腺素与普鲁卡因联合用药可延
20、长局部麻醉作用的特点。材料兔子只；注射器、毛剪、烧杯、酒精棉球；0.2%普鲁卡因注射液、含有/10万0.2ml肾上腺素的普鲁卡因注射液。 原理方法 、取家兔只，在脊背两侧各选择相互对称，直径cm左右的部位一块，将毛剪净装于盛水的烧杯里（以免兔毛飞扬），用酒精消毒后，用针头刺皮肤，试其痛觉反应（用手掌紧贴兔背部皮肤，感觉刺激部位肌肉抽缩为痛感指标）。刺激方式按左、中、右、上、中、下的顺序进行。全部阳性反应记6/6，全部阴性反应记为0/6，其余类推。 、于两背部分别用0.2%普鲁卡因注射液2ml和0.2%普鲁卡因肾上腺素注射液2ml作皮下注射。注射后于min、2min、5min分别刺激注射部位测其
21、痛觉，然后每5min测试一次，并比较两种药液的麻醉作用、维持时间及注射部位皮肤颜色有何不同？ 浸润麻醉：将局部麻醉药注入手术部位的皮下或手术切口部位中，使用药部位的感觉神经纤维末梢麻醉。适用于浅表小手术。 减少吸收，既使麻醉时间延长，又可减少 吸收中毒的发生。肾上腺素收缩皮肤毛血管 使局部出血减少。 注意：在手指、足趾等末梢部位用药时，应禁加肾上腺素，否则可引起局部组织坏死。. 方法： 扇 形 菱 形 直 线 记录 讨论题 以实验结果说明普鲁卡因与肾上腺素合用的临床意义？ 药 物用药前 反应 用药后反应 5min10min15min20min25min30min35min普鲁卡因普鲁卡因+Ad
22、氯丙嗪镇静作用及其强化麻醉的观察目的观察氯丙嗪的镇静作用和强化麻醉作用。材料家兔只；注射器；0.5%盐酸氯丙嗪、2%戊巴比妥钠溶液、酒精棉球。 原理方法每组取家兔只，称其体重，根据下列规定药物、剂量、用法、并记录反应。记录注：甲、乙兔各静注氯丙嗪分钟后，再给乙、丙兔分别注射戊嘏比妥钠。讨论题以上结果说明了什么问题？兔号体重氯丙嗪注射液戊巴比妥钠液麻 醉作 用 用 药 前 用 药 后发生时间维持时间痛觉瞳孔大小眼睑反射角膜反射体温痛觉瞳孔大小眼睑反射角膜反射体温甲1ml/kgiv乙1ml/kgiv1ml/kgiv丙1ml/kgiv解热镇痛药对发热家兔体温的影响 目的观察解热镇痛药的解热作用。材料
23、兔只；电子秤、体温表、注射器；复方氨基比林溶液、10蛋白胨。 原理方法取正常成年兔只，编号为甲、乙，分别检查并记录正常体温（兔体温在38.539.5者为合适）。于小时前给乙兔皮下注射10蛋白胨10mlkg，体温可比正常时升高以上，则进行试验，甲、乙两兔各腹腔注射复方氨基比林溶液mlkg，给药后分别于0.5小时、1小时、1.5小时测量体温，观察各兔体温的变化。 记录讨论实验结果说明了什么问题？临床上应用解热镇痛药应注意些什么？兔 号体 重给药前体温药 物给 药 后 体 温0.5h1h1.5h甲 兔乙 兔磺胺药物的溶解性 目的了解磺胺类药物的特性。材料ml刻度试管、试管架、滴管；磺胺嘧啶、蒸馏水、
24、氢氧化钠、盐酸、pH试纸、天平。方法 、取粉0.2克，放入10ml试管中，加入蒸馏水5ml，剧烈振摇数分钟，观察能否溶解。 、然后滴入氢氧化钠，随摇随滴，直到药物溶解为止，采用pH试纸测其pH值。 、再慢慢滴加盐酸，随摇随滴，可见溶液变混浊，有羽状小片游悬于其中，此时再测其pH值。 、最后再加入过量的盐酸，溶液能否变成澄清？此时pH值又为多少？ 记录讨论 解释本实验各阶段的结果，并讨论其临床意义。水氢氧化钠盐酸过量盐酸溶解情况溶解pH溶解情况溶解pH溶解情况溶解pH溶解情况溶解pH磺胺粉药物对家兔尿量的影响 目的 了解急性利尿实验方法，观察高渗甘露醇注射液和呋塞米对不麻醉兔的利尿作用。材料 家
25、兔1只；兔手术台、多道生物信号采集系统、烧杯、注射器 ；20%氨基甲酸乙酯、1%呋塞米（或2%依他尼酸）溶液 、 0.1%肾上腺素、20%葡萄糖注射液（20%甘露醇注射液） 、 生理盐水 、斑氏试剂方法 麻醉 保定 剪毛 剖腹 找出膀胱与输尿管 插导尿管 1、麻醉与保定：用3%戊巴比妥钠（1ml/kg）兔耳静脉注射。 麻醉后仰卧保定于兔手术台。剪去腹中、下部的毛。2、输尿管导尿法：在耻骨联合上缘，沿正中线作一长约5CM的切口，沿腹白线切开腹腔，将膀胱移出体外，暴露膀胱三角，仔细找出两侧输尿管，并将基部与周围组织轻轻分离。用线将输尿管近膀胱端结扎，在结扎之上部剪一小口，把充满生理盐水的细塑料管向
26、肾脏方向插入输尿管内，用线结扎固定，进行导尿，可看到尿液从细塑料管中慢慢的逐滴流出（注意：塑料管要插入输尿管管腔内，不要插入肌壁层与粘膜之间，插入方向应与输尿管的方向一致，勿使输尿管扭结，以免防碍尿液流出）。手术完毕后，用37左右的生理盐水纱布将腹部切口处覆盖，以保持腹腔的温度。将细塑料管连到记滴器，以记录尿液滴数。3、观察项目：（1）记录5分钟正常尿的滴数。（2）静脉快速注入生理盐水20ML，观察尿量变化，记录10分钟尿液滴数。（3）静脉注射1%呋噻咪（速尿）0.4ml/kg，记录10分钟尿液滴数。（4）静脉注射0.1%肾上腺素0.5ml，记录10分钟尿液滴数。（5）静脉注射20%甘露醇溶液
27、5ml，记录10分钟尿液滴数。（6）静脉注射0.6%酚红溶液0.2ml，用盛有10%NaOH液的培养皿接尿液，如尿中有酚红排出，遇NaOH即呈红色。记录从注入酚红起到排出酚红所需的时间。 4、尿糖定性试验：试管内加班氏试剂1ml再加尿液2滴，在酒精灯上加热煮沸。加热时应小心振荡试管，防止溶液煮沸时溢出管外。冷却后观察溶液的颜色，如颜色由绿转为黄色或砖红色，表示尿糖试验阳性。注意1、实验前应给兔多食菜叶。2、本实验需多次静脉注射，应注意保护兔耳静脉，静脉注射应从耳尖开始，逐渐移向耳根。3、手术操作应轻柔，以避免造成操作性尿闭。实验过程中注意保持输尿管的畅通。讨论题1、分析讨论上述各因素对尿量生成
28、影响的机理。2、静脉注射甘露醇后，尿量为什么会增多？为什么会出现糖尿？3、呋噻咪的利尿原理是什么？临床应用如何？药物对呼吸的影响方法 1、麻醉与保定：用3%戊巴比妥钠（1ml/kg）兔耳静脉注射。 麻醉后仰卧保定于兔手术台。剪去兔颈部、腹上部的毛。 2、剖开颈部皮肤，分离出气管，穿线待用。以“T”型切开气管，插入气管插管，将线打结。一通气口用胶管连接呼吸换能器。 剖开腹腔，将胃推置一边，用钩钩住膈肌，连接张力换能器。3、打开生理实验多用仪系统，选择实验呼吸运动的调节开始。1、描记一段正常呼吸曲线。2、用止血钳夹闭塞气管套管上的橡皮管约20秒钟，呼吸运动有何变化。3、将气管套管的一侧管连一长约5
29、0厘米的橡皮管，堵塞另一侧管，观察并记录呼吸运动的变化。注意与上一项有无区别。4、从耳静脉注射1/10N的HCl 1.5 ml，呼吸运动有何变化？5、耳静脉注射尼克刹米1ml，呼吸运动有何变化？、将每一段描记曲线复制到word文档，存盘、打印。应用管碟法测定抗菌药的抗菌浓度目的观察常用抗菌药物的抗菌作用，以及初步了解其抗菌范围和细菌对药物敏感性测定的一般方法。材料青霉素、链霉素、四环素、磺胺嘧啶钠；琼脂平皿、无菌吸管、小钢管（牛津杯）、镊子、滴管、游标卡尺等；金黄色葡萄球菌、大肠杆菌。方法、双碟的制备：肉琼脂培养基底层，将灭菌肉琼脂培养基溶化后取15ml倒入灭菌平皿内。肉琼脂培养基菌层，吸取大
30、肠杆菌或金黄色葡萄球菌液15ml（经预试决定加入量）与100ml冷至45（最好用电热恒温水溶箱保温）的肉琼脂培养基混匀，然后分别每一平皿加入ml，并均匀摊在具有底层培养基的平皿内。、待培养基凝固后，在每碟中均匀立放小钢管（即牛津杯个），用纸板盖复盖。、将下列试验药液分别加入小钢管中（如下图），置培养小时，测量抑菌圈大小，判定抗菌药物抑菌作用强弱。 、青霉素溶液100u/ml 2、链霉素溶液200u/ml 3、四环素溶液200u/ml 4、磺胺嘧啶钠200g/ml1141213111412131记录菌 种药 物 抑菌圈直径(mm)判 定金黄色葡萄球菌大肠杆菌应用试管法测定抗菌药的最小抑菌浓度目的
31、通过实验，掌握体外测定抗菌药物的的一般方法。材料试管、吸管、试管架、洗耳球、容量瓶；抗生素（如恩诺沙星）、肉汤培养液、菌液。方法、稀释药液（倍稀释法）：取原药ml，用培养液稀释为ml；对倍稀释法：取灭菌试管支，在每支试管中各加入.ml的肉汤培养液，再往第支试管中加稀释药液.5ml，混匀，然后从第管吸0.5ml到第管，从第管吸.5ml到第管，依次类推到第管，再从第管吸0.5ml抛弃，使每管内的药液都为0.5ml。、加菌液：至号管各加.5ml的菌液。、做对照管：（）绝对生长管：取只试管加入0.5ml菌液、0.5ml培养液；（）绝对不生长管：取试管只，加培养液0.5ml，药液0.5ml。、培养观察：
32、将做好的各管包扎好，写好组名，放入的恒温培养箱内培养，小时后观察结果。5、判断： 试验管以出现浑浊的前一管的浓度为最小抑菌浓度。如号管开始出现浑浊，则号管的浓度为该抗生素的最低抑菌浓度。敌百虫的急性中毒与解救目的观察有机磷酸酯类中毒的主要症状，了解阿托品、碘磷定在有机磷中毒解救中的意义和解毒原理。材料兔只、敌百虫、0.5硫酸阿托品注射液、碘磷定注射液兔胃导管、注射器、烧杯、方法、取兔只，称其重，先观察正常兔的唾液分泌，瞳孔大小，全身活动、四肢肌肉及排粪情况。、给两只兔灌服敌百虫溶液每公斤ml，记录服药的时间。、观察兔中毒的表现：唾液分泌增加、瞳孔缩小、全身肌肉颤动、四肢无力、排粪等。、待兔表现
33、明显症状后，立即一只兔子按2ml/kg的剂量静注0.5%硫酸阿托品，观察哪些中毒症状消失，尚有何种症状存在，然后再静注碘磷定1ml/kg，观察兔子的临床表现有何变化？而另一只兔子反过来先注射碘磷定后再注射阿托品，观察临床表现有何不同？记录讨论用实验结果来说明阿托品和碘磷定解救有机磷酸酯中毒的作用和解毒原理，以临床表现上如何鉴别？ 表现兔号正常中毒后注射阿托品后注射解磷定后12亚硝酸盐的中毒与解救目的观察亚硝酸中毒的临床表现及亚甲兰的解毒效果。了解中毒与解毒原理。材料兔只；亚硝酸钠、亚甲兰注射液、兔胃导管、注射器、小烧杯。方法、取兔只，称其体重，记录呼吸、体温，观察皮肤结膜及耳血管颜色。、按5m
34、l/kg给兔灌服亚硝酸钠溶液，记录并注意观察动物的呼吸、眼结膜及耳血管的颜色变化，并于出现发绀时检查体温。、出现典型的亚硝酸盐中毒症状后，立即用诊断试纸检查唾液、尿液变化，而后速用亚甲兰注射液按2ml/kg静脉注射，观察并记录解毒效果。讨论亚硝酸盐中毒的临床表现特点是什么？小剂量的亚甲兰为什么能解毒？人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。
