1、临床微生物质量控制 广州达安临床检验中心内容提要 概述概述 涉及内容涉及内容室内质控室内质控室间质评室间质评质量控制概述质量控制概述l质量控制（Quality control）是临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系l包括室内质量控制和室间质量控制评价 室内质量控制是质量保证的核心和基础 室间质量控制评价是由实验室外部的组织或机 构对实验室进行的质量评价微生物室内质控微生物室内质控 微生物检验人员及其培养教育微生物检验人员及其培养教育 微生物检验过程的基本要求微生物检验过程的基本要求 仪器设备的质量控制仪器设备的质量控制 培养基的质量控制培养基的质量控制
2、试剂质量控制试剂质量控制 抗微生物药物质量控制抗微生物药物质量控制 纠控纠控细菌检验人员及其培养教育细菌检验人员及其培养教育（1）培养临床细菌室工作人员树立质量控制概念）培养临床细菌室工作人员树立质量控制概念 什么是细菌检验中的质量：结果真实显示标本中存在什么是细菌检验中的质量：结果真实显示标本中存在的病原菌及其生化特征和抗药性的病原菌及其生化特征和抗药性 什么是细菌检验中的质量控制：制定细菌检验的质量什么是细菌检验中的质量控制：制定细菌检验的质量水平，并采取监测手段，这一过程称为质量控制。水平，并采取监测手段，这一过程称为质量控制。 质量保证：为达到应有的质量水平而采纳的措施质量保证：为达到
3、应有的质量水平而采纳的措施 质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个实验质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个实验室或实验室中某项试验是否达到标准的过程室或实验室中某项试验是否达到标准的过程细菌检验人员及其培养教育细菌检验人员及其培养教育（2）操作手册的建立）操作手册的建立 规章制度规章制度 检验项目检验项目 细菌鉴定的最低要求及药敏试验细菌鉴定的最低要求及药敏试验 培养基及其制备培养基及其制备 试剂、染色剂的制备试剂、染色剂的制备 生物安全防护生物安全防护 参考数据及书籍参考数据及书籍 室内及室间质量控制室内及室间质量控制微生物检验过程的基本要求 标本的采集和运送 实验室收到临床标本后
4、，应做好标本的验收工作，严格执行标本的拒收标准（如：直接涂片除血标本外的临床标本特别是痰标本应做直接涂片） 根据培养目的的不同，合理选择培养基，及时接种微生物检验过程的基本要求 对阳性培养要分离纯化，然后进行分群、种属鉴定和药敏试验 如实记录检验过程中所见现象和发现的问题，以便于系统分析实验结果，得出正确的结论和发出可信的报告 对于疑难菌株，要查阅文献，组织会诊，不能轻易作出诊断微生物检验过程的基本要求 痰及下呼吸道分泌物 肉眼观察培养前处理涂片检查血琼脂平板巧克力平板伊红美兰琼/中国蓝或麦康凯必要时可增加一个作厌氧培养CO2培养需氧培养35；18-24h观察菌落和涂片染色镜检各种鉴定试验药敏
5、试验报告仪器设备的质量控制 随着检验医学的不断发展，临床微生物检验已经进入微量化和自动化的时代,使微生物的培养、鉴定及药敏结果更加快速准确。对于这些仪器的质量控制可根据厂家推荐的方法做，确保测试系统的准确度和精密度 仪器设备的质量控制仪器设备的质量控制临床微生物室常见仪器设备质量控制临床微生物室常见仪器设备质量控制仪器设备名称仪器设备名称允许范围允许范围监控方法和频率监控方法和频率光学显微镜每年4次或需要时做清洁与调试恒温培养箱35 1 每天观察记录温度CO2培养箱35 1 ；5% CO2每天观察记录温度和CO2浓度冰箱冷藏室 2-8冷冻室-15- -25每天观察记录温度生物安全柜定期年检,滤
6、器3个月校正一次，合格后使用压力蒸汽灭菌器 每周用嗜热芽孢杆菌或每次用化学方法测试灭菌效果BacT/Alert120全自动培养仪定期校准、年检 VITEK 2 COMPACT细菌鉴定仪周质控、定期校准、年检培养基的质量控制(1)一般性状 液体培养基透明清亮，颜色符合要求 固体培养基表面湿润但无水汽、平整光滑、厚度均匀，一般厚度为3cm（M-H平板厚度为4cm） 斜面培养基的斜面长度不得超过斜面2/3，基底层至少有1cm的直立段 PH值应在规定值0.20.2的范围内的范围内培养基的质量控制(2)无菌试验 每批培养基在高压或过滤除菌后均要进行抽样培养，以证实无细菌污染培养基的质量控制 对于分装后进
7、行灭菌的培养基，一般随机抽取5%10%的量，置35孵箱培养24h，证明无菌生长为合格 无菌手续分装的培养基则应对全部培养基置35孵箱培养24h，无菌生长为合格 选择性培养基应取部分培养基加入1020倍无抑制性肉汤培养基稀释后，置35孵箱培养24h，证明无菌生长为合格培养基的质量控制(3)生长抑制试验生长抑制试验 非选择性培养基配好后，要求抽 样接种标准质控菌株，常规培养后生长良好 选择性培养基应至少分别选1株可生长、1株被抑制的标准菌株进行接种培养，可生长菌应生长良好，被抑制菌应不能生长或部分生长培养基的质量控制 (4)演变试验演变试验 实验室应保存一整套质控菌株，用来观察培养基各种性能的演变
8、特征(如肠杆菌科、非发酵菌微量生化鉴定管)。生化反应培养基至少应分别选阳性和阴性反应菌株各1株，以证实应有的生化反应试剂质量控制（1）染色液质量控制 染液在使用过程中，应该适时用质控菌株进行阴、阳性质控。微生物室最常见的染色液是革兰染液和抗酸染液。 自制的染液应严格按照SOP规定配制，要求将整个配制过程的操作步骤形成记录并保存，瓶签上应注明染色液名称、配制日期、配制人、有效期试剂质量控制 商品化的染色液应对厂家、试剂名称、批号存放条件加以说明并要求厂家提供质量保证书 超过保质期的或已经混浊、沉淀、变色的染液应该及时处理和废弃 试剂质量控制(2) 试纸和试剂 无论是外购的还是自制的，在使用时一定
9、要注明开启时间和失效日期 测定代谢产物的试纸或试剂，要用已知阳性和阴性的质控菌株进行测试，并作好测试记录，防止细菌的污染 试剂质量控制常用生化试剂的质量鉴定试剂名称试剂名称阳性对照菌株阳性对照菌株 阴性对照菌株阴性对照菌株 质控频率质控频率3%过氧化氢金黄色葡萄球菌A群链球菌每天凝固酶血浆金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌 每天氧化酶铜绿假单胞菌 大肠埃希氏菌 每天杆菌肽A群链球菌B群链球菌每批；每周optochin纸片肺炎链球菌 每批；每周vp试剂产气肠杆菌大肠埃希菌每批；每周 试剂质量控制(3)抗血清的质量控制 来源必须可靠，应从有资质的单位购买 抗血清的使用与保存 抗血清的效价必须用阳性反应质控
10、菌株进行质量控制，合格者方可使用抗微生物药物质量控制 药敏试验质量控制的主要目的是监测试验步骤的精密度和准确度，监测试验所用试剂的质量和工作人员对试验操作和结果判读的熟练程度抗微生物药物质量控制 为达到这些目的，实验室通常选用遗传性能稳定的标准质控菌株，对药敏试验过程中培养基的质量、抗微生物药物及纸片的效价以及工作人员的试验操作进行监测，及时发现影响药敏结果的因素抗微生物药物质量控制1.药敏试验的标准质控菌株 美国临床实验室标准化协会（CLSI）从美国菌种收集中心（ATCC）选择推荐了一些菌株作为质控标准株抗微生物药物质量控制常见标准常见标准菌株的种类和应用菌株的种类和应用细菌名称菌号 用途金
11、黄色葡萄球菌 ATCC 25923 纸片扩散质控金黄色葡萄球菌 ATCC 29213 MIC测定质控大肠杆菌ATCC 25922 纸片和MIC绿脓假单胞菌ATCC 27853 纸片和MIC粪肠球菌ATCC 29212 胸腺嘧啶测定淋病奈瑟菌ATCC 49226 淋球菌药敏流感嗜血杆菌ATCC 49247 嗜血杆菌药敏肺炎克雷伯菌ATCC 700603 ESBL阳性菌抗微生物药物质量控制 菌株的保存方法冷冻干燥 为防止变异，必须将标准菌株冻干保存冷冻 如无冻干条件，可于肉汤、脱纤维羊血或脱脂牛奶中加入10%-15%的甘油，或使用含50%小牛血清的肉汤，然后接种标准菌株，存于-20以下环境中抗微生
12、物药物质量控制冷藏 每月复苏1次，种入大豆酪蛋白消化肉汤中（厌氧菌可用GAM肉汤等）作为工作株。工作株宜4-8 保存，并每周转种1次。通常工作株转种45次后即须弃去。在质控过程中，如发现工作株结果有疑问，应予以更换抗微生物药物质量控制 2. 药敏试验方法学及影响因素药敏试验方法学及影响因素 方法学简介（纸片扩散法、肉汤和琼脂稀释法、Etest法、仪器法）抗微生物药物质量控制 影响因素影响因素操作步骤的规范性步骤的规范性 操作人员的素质操作人员的素质 质控菌株的污染或变异质控菌株的污染或变异 0.5麦氏标准管的不均或变质麦氏标准管的不均或变质 细菌悬液的浓度细菌悬液的浓度 试验用的培养基、药敏纸
13、片及药敏板条的质量问题试验用的培养基、药敏纸片及药敏板条的质量问题 错误的孵育时间、温度或孵育气体错误的孵育时间、温度或孵育气体 结果判读错误结果判读错误 数据录入时抄写错误数据录入时抄写错误抗微生物药物质量控制3.质控方法 建立药敏质控系统 每种药物/细菌组合的30个数据中，允许3个以下数据超出规定范围 满足以上数据可将质控改为每周一次 每周质控时，如果有一个数据超出允许范围，要查找原因 5日数据在控表明找到原因 5次结果只要有一次失控，应恢复每日质控 在恢复每周质控之前，应再有30日连续质控数据抗微生物药物质量控制3.质控方法(续) 使用新批号的药敏纸片、M-H培养基、药敏板条时应做质控试
14、验 参加能力比对试验时，应做质控 检测时应开展质控 一旦发现药敏试验数据失控时，不应对外发放报告 纠 控鉴定从以下几个方面进行（操作程序） 标本的采集和运送 培养鉴定培养基的选择 鉴定方法流程（包括涂片染色） 培养条件 仪器法的注意事项纠 控药物敏感性试验从以下几个方面进行： 质控菌株 培养基的制备（配方、厚度） 抗生素的选择（效期、剂量） 接种及贴纸片的过程 培养条件 判读纠 控仪器 硬件设备的维护与检修 软件程序的更新升级微生物室间质控 历史历史起源于美国，起源于美国，1966年开始，国内于年开始，国内于1985年卫生部年卫生部临检中心正式组织了全国性的细菌学质控工作，临检中心正式组织了全
15、国性的细菌学质控工作，质控工作使我国临床细菌室在鉴定和药敏试验的质控工作使我国临床细菌室在鉴定和药敏试验的正确性和标准化方面有了长足的进步，并且逐渐正确性和标准化方面有了长足的进步，并且逐渐与国际标准接轨。与国际标准接轨。微生物室间质控 必要性必要性发现系统误差促进和提高参控试验室的理论水平发现系统误差促进和提高参控试验室的理论水平和技术水平和技术水平室间质控是对室内质控的一种评价室间质控是对室内质控的一种评价促进各临床细菌室间的交流促进各临床细菌室间的交流有利于操作程序、方法的标准化和诊断有利于操作程序、方法的标准化和诊断试剂试剂的统一及商品化的统一及商品化微生物室间质控卫生部行业标准对临床细菌室室间质评要求： 50质控物为混合样本 要求操作者根据人口统计资料确定需报告的病原菌 标本中含有细菌范围广，包括正常菌群、条件致病菌和致病菌 谢谢！
