1、艾滋病实验室检测进展艾滋病实验室检测进展山东省疾病预防控制中心苏生利2015年10月9日日照一、检测进展1、样本：全血、血清、血浆、唾液、尿液、 滤纸干血斑2、筛查方法：酶标、快速、化学发光3、试剂：三代四代4、确证方法：WB/RIBA5、病毒载量：定性、定量6、CD4：微球法、体积定量法7、新发感染：BED 亲和力HIVHIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等 ：以以诊断为目的诊断为目的的检测是为了确定个体的检测是为了确定个体HIVHIV感染状感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。要进行
2、的体检等。以以血液筛查为目的血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播的检测是为了防止输血传播HIVHIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 以以监测为目的监测为目的的检测是为了解不同人群的检测是为了解不同人群HIVHIV感染感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。和一般人群。检测目的检测目的感染机制 吸附吸附 进入进入 转录转录 整合整合 基因表达基因表达 芽生集合芽生集合 芽生芽生 成熟成熟“柏林病人柏林病人”，世界上第一个被公，世界上第一个被公认治愈的艾滋病病人（认治愈的艾滋病病人（20092009）g
3、p120gp41Fiebig 分级分级 实验室检测指标实验室检测指标感染时间感染时间级级VL 阳性，其他检测阴性阳性，其他检测阴性5天以内天以内级级VL 阳性，阳性，P24抗原阳性，其他检测阴性抗原阳性，其他检测阴性610天天级级抗体阳性，抗体阳性，WB阴性阴性1113天天 级级抗体阳性，抗体阳性，WB不能确定不能确定1419天天级级抗体阳性，抗体阳性，WB阳性，阳性，WB检测没有检测没有P31条带条带2089天天 级级抗体阳性，抗体阳性，WB阳性，阳性，P31条带阳性条带阳性90天天作为高危人群检测点，作为高危人群检测点，pool PCRpool PCR阳性，阳性，p24p24抗原阳性，但四
4、代抗原阳性，但四代ELISAELISA、三代三代ELISAELISA均阴性，召回时感染均阴性，召回时感染2121天，三代天，三代ELISAELISA阳性，确证试验结果不阳性，确证试验结果不确定，感染确定，感染4141天检测确证试验阳性。天检测确证试验阳性。3.50.340.77 有一对MSM与网络上找到的一位MSM性伴接触之后约1周，相继出现急性期感冒症状，发烧，肌肉疼痛，乏力。高危行为后2周，到门诊检测。急性期病例急性期病例第一检测点，仅第一检测点，仅pool PCRpool PCR阳性，阳性，p24p24抗原、四代抗原、四代ELISAELISA、三、三代代ELISAELISA均阴性，召回时
5、感染均阴性，召回时感染2222天，三、四代天，三、四代ELISAELISA阳性，确阳性，确证试验结果不确定，感染证试验结果不确定，感染3030天时确证试验阳性。天时确证试验阳性。PoolPool阳性，阳性，p24p24、四代筛查试验结果、四代筛查试验结果阴性阴性0.851.610.751.42（一）样本（1）全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测。（2）抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。（3）血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。（4）全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS样品可
6、用于HIV核酸的定性检测。（5） PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于HIV-1分离培养。1、全血样本 采血管选择K2EDTA、K3EDTA抗凝管。 不建议使用肝素抗凝。临床中不使用肝素抗凝进行免疫学检测项目，可能对白细胞计数有影响。 全血用于CD4检测最好使血液达到试管的填充线处最好使血液达到试管的填充线处确保保持正确的血液确保保持正确的血液:抗凝剂比例抗凝剂比例+/- 10% 填充量的差异是可接受的填充量的差异是可接受的当血液与当血液与EDTA-Na2抗凝剂的比例为抗凝剂的比例为1 4以上时不影响以上时不影响.防凝血采集注意事项防凝血采集注意事项样本样本样本混匀 采集的静脉血注入抗凝管后
7、，立即轻轻颠倒抗凝管6-8次，使血液与抗凝剂充分混合，防止血液凝固。样本标记 血样上应标记上姓名和编号，送检表上送检编号位置注明血样编号，并按顺序排列血样和送检表。 样本标记 不建议姓名标记在外包装袋上，标记管上。正确包装送检单放置CD4送检问题-放冰块？ 在室温（18-25 ）保存和运输样品，避免极端温度（结冰或大于37 ）。 高温季节，样本需用隔热容器盛装样品，并将其置于有冰袋和吸热物质的容器中。送检单 送检表格填写应完整，不能空项。电子版表格年龄几年不更换样本送检流程 样本接收我中心卫检部，由1号楼西门进，登记后送至4楼。门铃。 CD4送检时间每周三8:30-11:30，下午1：30-2
8、:30（CD4） 其他检测项目每天8:30-11:30，下午1：30-16:30（留半小时登记时间） 请送样人员计划好自己的行程。2、血浆 采血管选择K2EDTA、K3EDTA抗凝管。 不建议使用肝素抗凝，因为肝素中阴离子能结合蛋白质，使蛋白质变性，是taq酶的强抑制剂。也就是说在PCR后续的实验中会抑制酶的作用。 分离血浆用于抗体和 VL检测。要求：离心吸取白细胞层-80度冷冻，避免反复冻融。2014年年10月收到月收到丙肝检测样本丙肝检测样本3、血清 如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清。
9、血清用于抗体检测。 4保存一周。4、唾液注意：饭后注意：饭后-食物残渣食物残渣 刷牙、漱口后刷牙、漱口后-被检测物含量低被检测物含量低5、尿液 原则上留取早晨起床后第一次尿液的中段尿（晨尿），也可留取随机尿的中段尿。 注意： 女性患者月经期； 血尿标本； 乳糜尿等。6、干血斑 干血纸片法（DBS），即将全血样品收集在卡纸上。 它需求较少的血量，创伤小，方便血样采集、存储运输方便。 用于HIV核酸的定性检测及耐药检测。干血斑样本采集在干血斑样本采集在HIV检测中的应用评估检测中的应用评估2015：凉山州确证实验室培训：凉山州确证实验室培训（二）检测技术-ELISA法初筛：高敏感性初筛：高敏感性=
10、真阳性率真阳性率=a/a+c；复核：高特异性复核：高特异性=真阴性率真阴性率=d/b+d三代试剂三代试剂 阳性阳性-Ab三、四代试剂三、四代试剂阴性阴性 阳性阳性 发报告发报告 WB四代试剂四代试剂 阳性阳性(Ab或或Ag)三代试剂三代试剂阴性阴性 阳性阳性 发报告发报告 WB检测模式检测模式四代试剂四代试剂 阳性阳性(Ab或或Ag)四代试剂四代试剂阴性阴性 阳性阳性 发报告发报告 WB2、快速法 免疫层析实验免疫层析实验 渗滤实验（双抗原夹心法）渗滤实验（双抗原夹心法） 三代四代 批批检？ 阳性阳性 阴性阴性2014年10月15日某市发现1例反应15分钟，结果阳性，颜色有点浅反应40分钟，结
11、果阴性反应2小时，结果阳性，条带已干，只留下印迹示例示例快速检测注意问题1、血清质量影响结果陈旧2、操作误差SOP3、结果判定2人判定、光线充足4、反应时间定时5、试剂保存常温、冷藏6、建议采集血清、浆检测7、记录与保存3、化学发光法同时检测抗体和抗原在二位点夹心ELISA中，在剂量反应曲线的高剂量区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀（HOOK），这种现象称之为HOOK效应。 l传统方法受技术的局限可测范围较窄;l化学发光对强阳性标本可避免出现阴性结果。 化学发光检测使窗口期由化学发光检测使窗口期由43.6天缩短为天缩短为38.3天，虽然只缩天，虽然只缩短了
12、短了12.2%，但却将残余风险降低了，但却将残余风险降低了46.4%。方法学方法学窗口期（天）窗口期（天）残余风险残余风险ELISA43.61/17501CLIA38.31/32637可以降低残余风险可以降低残余风险化学发光全自动检测 样本周转时间更快，29min 即来即做，不必等待批量标本 试剂机上保存，不需平衡试剂温度 避免手工操作中的多种干扰因素 减少低价值的重复性人工操作试剂评估（2007年） 本次评估使用随机抽样方式抽取已知血清标本本次评估使用随机抽样方式抽取已知血清标本 1556份，其中份，其中阳性标本阳性标本 501份，阴性标本为份，阴性标本为 1055 份。份。 科美东雅：灵敏
13、度科美东雅：灵敏度100%；特异度；特异度99.43%；准确度；准确度99.61%。 阿克苏：阿克苏： 灵敏度灵敏度100%；特异度；特异度99.15%；准确度；准确度99.42% 结论：科美东雅结论：科美东雅CLIA试剂试剂HIV抗体初筛结果与生物梅里埃抗体初筛结果与生物梅里埃（Ag+Ab）ELISA试剂比较有较高的灵敏度、特异性。统计试剂比较有较高的灵敏度、特异性。统计分析表明：二者准确度显著性检验无差异分析表明：二者准确度显著性检验无差异(u=0.7765，u1.96， P0.05)。 将第一次两种试剂检出的将第一次两种试剂检出的15份假阳性标本（科美东雅份假阳性标本（科美东雅6份，生份
14、，生物梅里埃物梅里埃9份），分别进行重复检测，结果均阴性。二次结果份），分别进行重复检测，结果均阴性。二次结果汇总统计：两种试剂检测结果一致，符合率为汇总统计：两种试剂检测结果一致，符合率为100%。4、确证实验示例检测时间带型结论2013.09.12gp160 gp120 p66 p51 p31 p24 p17阳性2014.03.21gp160 不确定2014.07.04gp160 p24 不确定2014.09.12gp160 不确定2014.12.11gp160 p66 p51 p31 p24 阳性HIV抗体确证检测数据抗体确证检测数据HIV快速确证试剂快速确证试剂2013年年4月，美国月
15、，美国Bio-Rad公司宣布向美国以外的市场销售一种能在公司宣布向美国以外的市场销售一种能在30分钟分钟内完成确证检测的快速试剂（内完成确证检测的快速试剂（Geenius HIV 1/2 Confirmatory System，左，左图），美国已投入使用，尚未在中国注册。此类试剂如能在中国市场使用，图），美国已投入使用，尚未在中国注册。此类试剂如能在中国市场使用，可大大缩短确证检测时间，又可降低目前快速筛查试剂的假阳性率。可大大缩短确证检测时间，又可降低目前快速筛查试剂的假阳性率。该图为目前美国使用的快速确证试剂。该图为目前美国使用的快速确证试剂。该图为美国研发的更加类似该图为美国研发的更加类
16、似于于WB的多条带快速试剂，尚的多条带快速试剂，尚未获批。目前在巴西进行验证。未获批。目前在巴西进行验证。国内尚无快速确证试剂研发的立项课题，有正在进行该项目探索研究的企业。国内尚无快速确证试剂研发的立项课题，有正在进行该项目探索研究的企业。5、尿液检测、尿液检测网络平台查 询 MSM 人群 艾滋病 实验室现场发放/药店购买邮寄/自送结 果尿液尿液HIV-EIAHIV-EIA试剂：试剂：96%-98%，特异性，特异性98%-100%。 采尿管：采集尿液后，室温可保存采尿管：采集尿液后，室温可保存4 4周。周。MSMNGO小组小组 检测人员检测人员很兴奋很兴奋很高兴很高兴影响考核指标怎麽办？影响
17、考核指标怎麽办？安全方便安全方便多了个办法多了个办法不知道是谁干嘛做？不知道是谁干嘛做？愿意接受愿意接受安全可行安全可行错了谁承担责任？错了谁承担责任？准吗？准吗？可靠吗？可靠吗？增加工作有何好处？增加工作有何好处？多少钱？多少钱？多少钱？多少钱？可靠吗？可靠吗？哪里可以做？哪里可以做？可带去干预场所吗？价格是多少？可带去干预场所吗？价格是多少？看结果方便吗？看结果方便吗？担心采别人尿担心采别人尿不可能每天检测不可能每天检测什麽时候能用？什麽时候能用？何时可以用？何时可以用？质控如何做？质控如何做？示范区示范区UCT项目面对面调查项目面对面调查6、可区分抗原抗体检测（快速检测试剂快速检测试剂-
18、四代）四代） 该试剂可同时检测人血清、血浆、静脉或手指针刺全血中HIV-1 p24抗原及HIV-1和HIV-2抗体，可区分急性HIV-1感染和已确诊HIV-1感染，但不能区分HIV-1抗体与HIV-2抗体，也不可用于献血者的筛选。四代HIV快检试剂酶联荧光分析法(ELFA) 人类免疫缺陷病毒抗原及抗体检测试剂(VLDAS HIV DUO Ultra)是在HIV-1 p24抗原和抗HIV-1和抗HIV-2 总免疫球蛋白的联合检测基础上，进行的一个自动检验，可以缩短血清转化时的窗口期。 VIDAS系统对每个抗体和抗原结果都进行计算得出检验值7、 HIV-1新近感染检测方法：方法： BED-EIA
19、HIV-1捕获捕获EIA方法（方法（BED-CEIA）；）；原理：根据原理：根据HIV特异性特异性IgG占总占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而抗体的比例随着感染时间的延长而逐渐增高；逐渐增高；目的：用于识别近期感染与既往感染；目的：用于识别近期感染与既往感染；应用：美国应用：美国FDA将将BED-CEIA归为归为“只应用于监测目的，不能用于个只应用于监测目的，不能用于个体诊断和临床体诊断和临床”的实验方法；的实验方法；不足：由于个体间抗体生成的变异性，对个体而言，不足：由于个体间抗体生成的变异性，对个体而言，BED结果的预测结果的预测值偏低，而且在个体水平上，值偏低，而且在个体水平上，B
20、ED检测可能产生一定的假阳性和假阴检测可能产生一定的假阳性和假阴性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目相近，因此可以性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。相互抵消彼此的作用。性病艾滋病预防控制中心于性病艾滋病预防控制中心于2004年将该方法引进国内，建立了适合年将该方法引进国内，建立了适合于我国的于我国的BED方法的窗口期（方法的窗口期（168天）和天）和4个关键校正系数个关键校正系数（=0.8098，=0.7571，=0.9315，=0.0685）A gp160gp120p66p55/p51gp41p31p24p17B 新发感染的快速检测新发
21、感染的快速检测质控带新发感染检测带包被低浓度的rIDR-M蛋白检测带长期感染新近感染8、CD4+T淋巴细胞检测 CD4+T淋巴细胞数量可评价HIV感染者免疫状况，辅助临床进行疾病分期。 CD4+T淋巴细胞百分数可以作为儿童免疫抑制分级指标， 可以作为儿童临床治疗分期和辅助条件。 评估疾病进展，判断预后状况。 是否开始抗病毒治疗的重要实验室指标 判断免疫系统恢复情况 当其数量减少至200/l时，即进入艾滋病期。 当其数量少于350/l时，应结合病毒载量的测定情况确定开始治疗的时机。 抗病毒治疗8周后，CD4 T淋巴细胞数量升高50/l以上提示治疗有效，反之则视为无效。 当其数量减少至500/l左
22、右时，即可开始出现机会感染或其它与免疫缺陷相关的症状；艾滋病CD4细胞绝对计数微球法及体积法Positive CellAbsolute Count BeadsNegative CellCD4 PE通过微球数目获取进样体积信息微球法体积法高精度注射器精准控制样本体积量FACSCalibur 1995FC500FACSCantoFACSCountACEA NovoCyteTMPOCT技术应用：CD4细胞检测质控品现状和希望质控品现状和希望 57BDBD公司：公司： 中值和底值 （ 到货效期 1月左右，2MLX1）BCBC公司公司： 中值和底值 （ 到货效期 3月左右， 3MLX2）南非南非 syn
23、exasynexa公司公司：中值和底值（ 到货效期 1.5月左右， 1.1ML，1.5ML 2.5ML X1）PartecPartec公司：公司： 片剂质控品 研制质控品：研制质控品：使用BECKMAN质控品，其保存周期相对较长，可达3个月。流式细胞仪检测质控图流式细胞仪检测质控图CD3+4+ Absolute Count IMMUNOTROL 624cells/ul (+/- 165) 30040050060070080090010005.11.0308.12.0308.12.0312.12.0311.02.0420.02.0425.02.0403.03.0408.03.0410.03.04
24、04.04.03dates runcells/ultest controlhigh+165high+83low -83low -165正常值 正常人的CD4+T淋巴细胞计数约占总T淋巴细胞的65%，CD8+T淋巴细胞计数约占35%。人体CD4+ T淋巴细胞计数值因种族、生活条件、生存环境不同而有所差别。 湖北成人CD4+T为681/u1； 上海成人CD4为726/u1； 山东成人CD4为709/u1； 亚洲人600-800/u1； 欧美人800-1000/u1。 项目项目百分数百分数绝对数绝对数CD350-84770-2041CD4+CD3+34-70414-1123CD8+CD3+25-54
25、238-874CD3+CD4+CD8+0.54.06-56Th/Ts0.682.47CALIBUR项目项目百分数百分数绝对数绝对数CD3355-1298CD4+CD3+355-1298CD8+CD3+144-796CD3+CD4+CD8+Th/Ts0.836.10FACSCOUNT项目项目百分数百分数绝对数绝对数CD369.7 77.067.061543358358CD4+CD3+388.08.0849288 288 （561-1137561-1137）CD8+CD3+26.47.237.23579175175CD3+CD4+CD8+Th/Ts1.5360.5890.589Epics-XLPI
26、MACapillary (n=168): 298-1615Venous (n=217): 263-1587FC-500CD4 绝对计数 （ 单平台） 614-1222CD4 绝对计数 （ 双平台） 650-1248CD4% 38%-57.2%参考值范围参考值范围不同仪器、试剂与靶值间的偏差不同仪器、试剂与靶值间的偏差组别组别标本标本样本样本cd3+ cd3+ 百分比百分比cd3+ cd3+ 绝对计数绝对计数cd3+cd4+ cd3+cd4+ 百分比百分比cd3+cd4+ cd3+cd4+ 绝对计数绝对计数BDBD试剂试剂+ NovoCyte+ NovoCyte正常质控正常质控血血5 5次均值次
27、均值72.06%72.06%1206.21206.247.54%47.54%795.2795.2偏差偏差1%1%5%5%2%2%3%3%ACEAACEA试剂试剂+ NovoCyte+ NovoCyte正常质控正常质控血血5 5次均值次均值71.49%71.49%1252125246.67%46.67%817817偏差偏差1%1%2%2%0%0%1%1%BDBD试剂试剂 +Calibur+Calibur正常质控正常质控血血5 5次均值次均值71.96%71.96%1123.41123.446.68%46.68%729.4729.4偏差偏差1%1%12%12%0%0%11%11%ACEAACEA试
28、剂试剂+Calibur+Calibur正常质控正常质控血血5 5次均值次均值73.14%73.14%1249.41249.447.88%47.88%817.6817.6偏差偏差2%2%2%2%3%3%1%1%质控品靶值质控品靶值72.2%72.2%1267.81267.846.7%46.7%820.1820.1*BD Accuri C6、FACSort2014年国家疾控CD4+T淋巴细胞计数检测能力验证成绩单位仪器型号能力验证成绩1山东省疾病预防控制中心BD FACS CANTO优秀2济南市疾病预防控制中心BD FACS Calibur优秀3青岛市疾病预防控制中心BD FACS Calibur
29、优秀4烟台市疾病预防控制中心BD FACS Calibur优秀5济宁市疾病预防控制中心BD FACS Calibur优秀6菏泽市疾病预防控制中心BD FACS Calibur优秀7泰安市疾病预防控制中心BD FACS Calibur优秀8临沂市疾病预防控制中心BD FACS Count优秀9、病毒载量测定方法 病毒载量实验是对感染者体内游离病毒的核酸RNA含量的定量测定。通常使用血浆作为检测样品，根据不同要求改进的RNA提取技术使该实验也可使用多种体液及组织。目前使用的病毒载量技术主要有三种：1、逆转录多聚酶链反应系统（RT-PCR）2、分枝DNA信号扩大系统（bDNA）3、核酸序列扩增系统（
30、NASBA）。三种技术都由核酸提取、扩增或信号放大、定量检测三部分组成。 NASBAEasy QCobas AmplicorbDNA 340病毒载量测定仪器病毒载量测定仪器 Alere q 分子诊断平台分子诊断平台POCT技术应用：NAT Roche Cobas Liat systemNWGHF Savanna viral load platform我国内我国内VQAVQA设备分布情况设备分布情况 共共126126台仪器台仪器 EasyQ 65EasyQ 65 Taqman 30 Taqman 30 bDNA 24 bDNA 24 M2000 4 M2000 4 国产国产 3 3EasyQEa
31、syQEASYMAG送检单 送检表格填写应完整，不能空项HIV-1HIV-1病毒载量主要检测技术病毒载量主要检测技术生物梅里埃生物梅里埃: Easy Q(mini-Mag,Easy-Mag): Easy Q(mini-Mag,Easy-Mag)罗氏罗氏: CAP CTM: CAP CTM（Taqman48,Taqman96Taqman48,Taqman96） High-pureHigh-pure西门子西门子: bDNA340,bDNA440(: bDNA340,bDNA440(今年停产今年停产) )雅培雅培: M2000 : M2000 国产试剂国产试剂 : : 达安达安 东北制药东北制药 万
32、泰万泰 艾森艾森 凯杰凯杰( (原匹基原匹基) )第二代第二代正在研制的国产试剂正在研制的国产试剂: : 科华科华 丽珠丽珠POCTPOCT： AlereAlere70在HIV/AIDS中进行病毒载量检测的意义1、早期诊断和辅助诊断2、病程监控、预测疾病进程3、开始进行抗病毒治疗的指针4、评价药物的疗效（无效、耐药）规范拟修改模式补充试验补充试验WB/RIBANATRT1+RT2+RT3筛查阳性样本筛查阳性样本海力特科技，服务精准医疗HIV-1 DNA 定量检测试剂盒HIV 超敏PCR试剂盒 【最低检出限】 1 copy/PCR1010、检测外包服务的探索、检测外包服务的探索1.1.市级探索实
33、践，省级加强技术指导。市级探索实践，省级加强技术指导。2.2.当地卫生行政部门同意，申请专项经费支持。当地卫生行政部门同意，申请专项经费支持。3.3.通过公开招标通过公开招标方式方式确定检测机构。确定检测机构。4.4.艾迪康，迪安，金域和美康。艾迪康，迪安，金域和美康。1.样本传递样本传递2.减负减负3.报告及时，报告及时，LIMS系统系统优点优点存在问题存在问题1.1.独立卫生检验机构良莠不分，差别很大独立卫生检验机构良莠不分，差别很大. .个别机构合同履行存在偷工减料。个别机构合同履行存在偷工减料。3.3.检测过程没有开展室内质控，没有参加检测过程没有开展室内质控，没有参加上级单位的能力验
34、证活动。上级单位的能力验证活动。3.3.个别机构在样本运输过程存在生物安全个别机构在样本运输过程存在生物安全隐患。隐患。4.4.疾控中心监督不到位，存在盲区。疾控中心监督不到位，存在盲区。5.5.保密保密实验室在艾滋病防治中的作用实验室在艾滋病防治中的作用我感染艾滋了吗？ 问实验室（抗体检测等）我需要开始治疗吗？ 问实验室（CD4细胞检测）我的治疗有效吗？ 问实验室（CD4细胞和病毒载量检测）我需要更换治疗药物吗？ 问实验室（耐药检测等）新发感染减少了吗？ 问实验室（新发感染检测，测量新发感染）76目标目标1：确证实验室：确证实验室 目前全部建在疾控系统目前全部建在疾控系统 目标：目标：201
35、5年底，年底，17市疾控全部建立，鼓市疾控全部建立，鼓励医疗卫生系统建立艾滋病确证实验室。励医疗卫生系统建立艾滋病确证实验室。 山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通知病检测工作的通知 鲁卫疾控字鲁卫疾控字201328号（号（2013年年5月月9日下发）日下发）77目标目标2：艾滋病筛查实验室建设：艾滋病筛查实验室建设 2013年底，皮肤病性病防治机构、妇幼保健机构、采供血机构（单采浆站）及各类二级以上（含二级）医疗机构要建立艾滋病筛查实验室。山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通知知 鲁卫疾
36、控字鲁卫疾控字201328号（号（2013年年5月月9日下发）日下发）78目标目标3：艾滋病检测点建设：艾滋病检测点建设1、目前全省尚未建立2、目标：2015年底，所有的乡镇卫生院、社区卫生服务中心和一级医疗机构都建立艾滋病检测点，鼓励具备条件的乡镇卫生院、社区卫生服务中心和一级医疗机构建立艾滋病筛查实验室。山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通知山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通知 鲁卫疾控字鲁卫疾控字201328号（号（2013年年5月月9日下发）日下发）三、质量控制 质量控制（简称QC）也称品质控制，是质量管理的一部分，致力于满足质量要求。 定义为：为使人们确信某
37、一物项或服务的质量满足规定要求而必须进行的有计划的系统化的活动。 -中国全国科学技术名词审定委员会一个有效运行的质量管理体系，通常可以用两个标志两个标志来加以衡量：（1）凡影响检测报告质量的各种因素都能使其处于受控状态，以减少和消除质量问题的产生；（2）一旦出现质量问题，应能迅速反馈、及时研究，得出纠正和预防措施，防止问题的再度发生。 质量管理体系有效运行的标志质量管理体系有效运行的标志能力验证一、能力验证:利用实验室间的比对确定实验室的检测能力。 二、能力验证活动:所有与能力验证有关的活动称为能力验证活动，它包含了能力验证计划、实验室间比对计划和测量审核. 三、目的：1.认可机构为确保实验室
38、维持较高的校准/检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动。2.为确定实验室进行特定测量能力而进行的室间比对，实现对实验室持续监控的能力。3.主要用于认可活动。实验室间比对一、实验室间比对：按照预先规定的条件，由两个或多个实验室对相同或类似检测物品进行检测的组织、实施和评价。二、目的：1.确定实验室进行特定的测量能力，以及对实验室进行持续监控的能力。2.识别存在问题，制定不就措施。3.确定新测量方法的有效性、可比性，并持续监控。4.识别实验室间的差异。能力验证与实验室比对的区别 运作主体不同运作主体不同-任何实验室和某个领域的群体可以任何实验室和某个领域的群体可以根据各自的需要组织实
39、验室间比对活动，而能力根据各自的需要组织实验室间比对活动，而能力验证活动需由认可机构或其授权验证活动需由认可机构或其授权/认可的机构组织认可的机构组织运作。运作。 评价内容不同评价内容不同-能力验证活动必须对参加对象进行能力验证活动必须对参加对象进行能力评价，而室间比对往往只需要得到某个特定能力评价，而室间比对往往只需要得到某个特定结论。结论。 保密保密-能力验证活动对参加者的身份保密，室间比能力验证活动对参加者的身份保密，室间比对不考虑。对不考虑。 能力验证属于实验室间间比对的范畴，但实验室能力验证属于实验室间间比对的范畴，但实验室比对不一定就是能力验证。比对不一定就是能力验证。实验室质量控
40、制的目的实验室质量控制的目的 质量控制方法是用来监测检验方法的分析性能，警告检验人员存在的问题。 质量控制一般通过检测质控品来实行。根据统计量来判断检验结果的质量，是否需要做系统的纠正，患者检验结果是否可接受。实验室质量控制步骤（1）在试验质量要求的基础上进行质）在试验质量要求的基础上进行质量控制的计划；量控制的计划；（2）选择适当的质控规则；）选择适当的质控规则；（3）选择适当的质控物；）选择适当的质控物；（4）应用统计质量控制；）应用统计质量控制；（5）失控情况的处理。）失控情况的处理。质控品浓度的选择 现主张选用高、中、低值三个浓度，至少用两个浓度。 如用一个质控品，浓度应在临界值附近，
41、这样可监控其敏感度的改变，如仅用高浓度的质控品，则很难达到这个目的。 问题 为什么选择浓度应在临界值附近的质控品？ELISA和PA对强阳性样品的滴度测定稀释度稀释度252627282929210211212ELISA (O.D.)OverOverOverOver2.8962.5612.4972.3852.372PA+ + + + + + + + + +稀释度稀释度213214215216217218219220221ELISA (O.D.)1.9941.5481.2781.1650.9320.9430.7900.6880.474PA+ + + + + + + + + +稀释度稀释度222223
42、224225226227228229230ELISA (O.D.)0.3680.3450.2680.2420.2470.2350.1520.1170.105PA+ +所用所用ELISA试剂为生物梅里埃试剂为生物梅里埃HIV 试剂盒试剂盒, 其其Cut off值为值为0.150统计质量控制方法 Levey-Jennings控制图方法 Westgard多规则控制方法 累计和方法 平均数和极差方法 趋势分析方法 利用病人数据分析方法 “即刻法”质控方法（Grubbs） 通常有六个质控规则，即12s，13s，22s，R4s，41s，10X质控规则。 启动信号：12s规则作为警告规则，启动其他质控规则以
43、助于数据的快速判断。 在控：只有当所有质控规则均判断分析批在控时。 失控：只要其中之一的质控规则判断为失控就被认定为失控。 Westgard多规则质控 质控图 最常用的质控图是最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，质控图，该图使用累计和技术或趋势分析技术的图该图使用累计和技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。形提供系统偏移和漂移的状况。 一般采用在不同批次检测取得至少一般采用在不同批次检测取得至少20个数个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少于个批次的检测，每个批次中不少于4个质控个质控血清测定结果，
44、以建立一个临时性的均值血清测定结果，以建立一个临时性的均值和标准差，当达到和标准差，当达到20批次数据后，替代临批次数据后，替代临时性的均值和标准差。时性的均值和标准差。即刻法质控 质控图都必须检测质控图都必须检测20次，方可绘制质次，方可绘制质控图，其周期较长，一些不是每天都控图，其周期较长，一些不是每天都检测的项目或试剂效期较短的检测项检测的项目或试剂效期较短的检测项目都会遇到困难。目都会遇到困难。 1984年将异常值取舍法原理用于质控，年将异常值取舍法原理用于质控，测定三次后即可判断，故称之为测定三次后即可判断，故称之为“即即刻法质控刻法质控”，凡是定量检测的项目都，凡是定量检测的项目都
45、可用这一方法。可用这一方法。 即刻法 位移：连续几次（35次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。 位移的原因：使用新批号的试剂、实验员的更换、位移的原因：使用新批号的试剂、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器孵育温度的改变、仪器 ( ( 移液器移液器 ) ) 故障等。故障等。1SD2SD2SD1SD3SD3SDMean96趋势3SD2SD1SD1SD3SDMean2SD 当几个连续质控对照值当几个连续质控对照值(5-7(5-7个个) )几乎按一个方向分几乎按一个方向分布时称之为趋势布时称之为趋势( (失控失控) )，通常由参数的缓慢改变引，通常由参数的缓
46、慢改变引起。起。 如移液器不准；试剂、酶标记物和对照的失效。如移液器不准；试剂、酶标记物和对照的失效。信息量少信息量少不足不足20次次连续10个测量点出现在中心线两侧的C区中n1011121314151617概率概率p0.02200.01500.01030.00700.00480.00330.00220.0015失控原因的分析实验室有无新的变化如仪器和试剂有无针对性检查这些变化对检测的影响重测同一质控样品开一瓶新的质控重测重测原因找到了没找到检查仪器状态和试剂是否过期四、存在问题及建议存在的问题及建议存在的问题及建议（规章制度）（规章制度） 实验室规章制度不全面。有的实验室虽然建立了各项规章制
47、度，但实际运行中未完全按照制度去执行，规章制度形同虚设。 建议：建议：各级各类艾滋病检测实验室在加强各项规章制度建设的同时，还应加强对从业人员的宣传教育和培训；各级领导也要给予高度重视，并且不断地督促工作人员，认真落实各项规章制度和相关要求并严格执行。存在的问题及建议存在的问题及建议（实验室建筑）（实验室建筑）1、私自变更艾滋病检测实验室操作区域；2、试验操作地点变更且未经重新验收；3、实验室布局问题，人员流向不符合生物安全规定，如由半污染区到清洁区再到污染区的现象。 建议：建议：各筛查中心实验室应加强辖区内实验室的督导检查，规范管理，合理布局，实验室改造或地点变更的应及时上报，重新进行验收。
48、存在的问题及建议存在的问题及建议（人员配备及培训）（人员配备及培训） 多数实验室人员配备不足；特别是医疗机构其人员流动性较大，缺乏相应的培训。 建议：建议：各单位应严格按照省卫计委颁布的山东省艾滋病检测实验室建设管理规范要求加强人员的配备。各市艾滋病筛查中心实验室要加强实验室工作人员的技术培训。 资质证书存在的问题及建议存在的问题及建议（仪器设备）（仪器设备）1、全自动酶免仪和化学发光仪进行未进行鉴定与校准；2、多数实验室无条码机，对样本的标示和管理造成了一定难度。3、洗眼器存在水压不足，无法使用或者没有安装在污染区等问题。4、实验室特别是使用全自动酶免仪的未配备生物安全柜。 建议：建议：由仪
49、器制造（供应）商对全自动酶免法仪和化学发光仪等进行保养和校准，确保检测数据的准确性。加强对生物安全柜、洗眼器、条码机等仪器设备的配备。物品凌乱、试剂未收回物品凌乱、试剂未收回玻璃物品玻璃物品影响排气影响排气存在的问题及建议存在的问题及建议（检测方法）（检测方法） 1、以快速检测法代替酶标或化学发光法，抗体筛查工作全部由快速法完成，且没有任何原始记录； 2、酶标法检测只是为了应付考核，工作人员甚至不会使用酶标仪和洗板机。 建议：建议：加强培训、督导、检测工作，督促各实验室人员积极开展酶标法检测，做好试验记录及质量控制；对于常年不开展工作的实验室，上报省卫计委注销其艾滋病筛查实验室资格。存在的问题
50、及建议存在的问题及建议（原始记录原始记录） 1、使用化学发光仪没有打印原始值，原始记录不做或极不规范。 2、实验室使用酶标法或化学发光法进行艾滋病抗体筛查，阳性反应样本再使用快速法进行复核，但是缺少快速检测的原始记录。 建议：建议：严格按照全国艾滋病检测技术规范的要求，做好试验原始记录，消除不安全隐患。 记录是指“阐明所取得的结果或提供所完成活动的证据的文件 ” 。可用于把溯源性形成文件，并提供验证、预防措施和纠正措施的证据，但通常不需要控制版本。 （-ISO9000：2000） 报告的依据，溯源的证据。 原则：确保该写的都必须写，写的都必须做到，做到的要有记录，无记录视为无效。原始记录问题：
