1、流感 Influenza 与 禽流感Avian Influenza,流感侵入人体的魔鬼,“Influenza”“被魔鬼侵入” 据WHO提供的材料，目前得到确证的第1次流感大流行是在1918年的欧洲大陆。 1915年春，英格兰就发现了零星的流感病人。到1917年，欧洲大陆也发现少量流感患者。1918年美国被卷入战争。大批运输船将美国士兵从大西洋彼岸运到欧洲。在1个多月的海上航行期间，流感病毒在美军士兵中肆虐。幸存的士兵又将流感病毒带到欧洲战场，引发了欧洲乃至世界的流感大流行。 全世界在这次流感大流行中死亡人数高达2000万（4-5千万）西班牙流感。,流感病毒属正粘病毒科，病毒颗粒呈球形，直径为8
2、0-120nm。病毒基因组是分节段的（甲，乙型毒株含8个节段，而丙型仅含7个节段，少一个编码神经氨酸酶蛋白的节段），-ssRNA。 根据病毒粒核蛋白（NP）和膜蛋白（MP）抗原特性及其基因特性不同，流感病毒分为甲、乙、丙三型。 乙、丙型只感染人类。 甲型流感病毒可感染人及其他物种。又可以分成H1-15 N1-9亚型。理论上甲型流感可分为135种之多。,流感病毒 Influenza virus,流感 Influenza,此后，流感又有2次世界性大流行: 1957年 1958年 香港 亚洲流感 200万 1968年 1969年 香港 香港流感 100万 此外，在不同国家和地区，流感还有较小的流行。
3、 1977俄罗斯流感 急性呼吸道传染病:骤发高热、头痛、全身酸痛、乏力及轻微呼吸道症状。 流感病毒尤其是甲型流感病毒，易发生变异，而且传染性强，传播迅速，易引起流行epidemic及大流行pandemic。 流感病毒经空气飞沫传播，人群普遍易感。,The envelope contains two species of glycoprotein (haemagglutinin and neuraminidase) and a non-glycosylated protein (M2). Underlying the envelope is a layer of M1 (membrane or
4、matrix) protein, which encloses the helical nucleocapsid (eight segments of ssRNA coated with nucleoprotein) and several other proteins.,Inuenza A virus,1918年 西班牙流感 H1N1 1957年 香港流感 H2N2 1968年 香港流感 H3N2,侵入人体的魔鬼流感,流感病毒不耐热,在56以上的环境中数min即失去致病力,酸、乙醚、甲醛、紫外线和各种消毒剂如酒精、石炭酸和漂白粉等均可使病毒灭活。 甲型流感病毒命名法： 型别/宿主/分离地点/
5、毒株序号（指采样时标本号）/分离年代（血凝素和神经氨酸酶亚型），如: A/马/黑龙江/1/98（H3N8）,致病机制,感染鼻黏膜的纤毛上皮细胞侵犯气管、支气管遇到以往抗体； 若不同，V进入细胞进行性感染，12 d内引起呼吸道炎症细胞病变坏死、崩解； 炎症反应有助于血液成分外渗（免疫细胞、抗体等）灭活V或破坏感染的细胞缩短病程； 发病初期13 d鼻咽分泌物中含大量病毒传染性最强，病程数天； 少数患者病毒向下呼吸道扩散间质性肺炎； 流感引起的死亡多为继发性细菌感染或体质弱并患其它慢性疾病。 特异性免疫 体液免疫HA抗体结合并覆盖病毒吸附位点；（NA抗体抑制V释放） 细胞免疫CTL,在流感病毒包膜上
6、，有2种糖蛋白突起，血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA) 流感病毒的吸附只与HA有关，而与NA无关 （病毒的感染性只能被抗血凝素的抗血清所中和，不能被抗神经氨酸酶的抗血清中和）,流感病毒包膜上血凝素(HA)三聚体结构（三亚基）,流感病毒包膜上血凝素(HA)分4个区,1. 细胞受体结合区：流感病毒的VAP与宿主细胞表面糖蛋白受体的唾液酸结合，这是HA的主要功能。其受体结合位点位于三聚体的顶端，形似一个裂缝或小口袋。它是病毒包膜糖蛋白HA与细胞受体相互作用的分子基础。 2. 融合区： HA蛋白具有促膜融合的活性，但HA只有经蛋白酶切割产生HA1和HA2后才具有融合活性。 3. 跨膜区： 在靠近HA分
7、子的羧基端大约有25个AA残基组成非极性区即HA的跨膜区。 4. 膜内区： HA分子羧基端最后10个AA在病毒包膜内表面。,流感病毒的变异,Error rates of DNA polymerases and RNA polymerases,RNA聚合酶无校正功能,流感病毒的变异,Recombination between the DNAs of two virus strains,Template switching mechanism of recombination in ssRNA viruses.,流感病毒的变异,Inuenza virus reassortment,流感病毒的变异,
8、流感病毒的抗原变异,抗原漂移 antigenic drift 编码表面抗原（HA、NA）基因点突变累积导致抗原位点的改变，属量变，变异幅度小。,epidemic,抗原转变 antigenic shift 由于基因组重排导致新的亚型出现，属质变，变异幅度大。,流感病毒的抗原变异,pandemic,禽流感(Avian Influenza) Avian Influenza Virus (AIV),禽类的病毒性流行性感冒 由A型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症狀的传染病，禽类在感染后死亡率很高 禽流感的病症及发病初期，都与一般流感类似，但发烧可高至41度，且较一般流感容易影响肝
9、功能，也较易引致淋巴細胞減少及呼吸衰竭，甚至多器官功能衰竭而死亡,兽医焚烧已感染禽流感鸡鸭的尸体,法国让泽农民在一家农场检查鸡,美国疾病控制和预防中心公布的一张未标明日期的彩色电子显微照片。它显示出H5N1型禽流感病毒（金黄色）在MDCK细胞（绿色）培养液中的活动状态,放大15万倍的H5N1型禽流感病毒电镜照片,国际疫情,全球 387人感染 死245人 （从20032008/9）,禽流感 2008/9/10,中国大陆 25人 17人,禽流感病毒于环境中存活情形,WHO研究指出禽流感病毒能长期存活在受感染的禽类粪便、水和纸巾中，且在低温环境中存活时间更久，如在水中于22可生存4d，0以下生存30
10、d；在冰冻物品中更可无限期生存。,NATURE| 2003 (6 MAR):422,传染途径,消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等途径，主要经由呼吸道粘液或粪便直接接触传染或间接由污染的水及饲料等传播。 有专家认为主要是通过粪便中大量的病毒粒子污染空气而传播，人员和车辆往來是传播禽流感的重要因素，另外吸血昆虫可传播病毒，带毒的种蛋可進行垂直传播。 水棲候鸟在自然界中携帶H5N1病毒最多。,禽流感潜伏期,感染禽流感临床症状潜伏期从几小時到几天不等 一般发病率高、死亡率低 但高致病力毒株感染时，发病率和死亡率可达100%,禽流感症状,人类患上禽流感后，潜伏期一般为7 (1-4)d以內，早期症状与其它
11、流感非常相似，主要表现为发热、流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛、全身不适时，部分患者可有结膜炎、恶心、腹痛、腹泻、稀水样便等消化道症狀，通常27d內会自然痊愈 年龄较大、治疗过迟的患者病情会迅速发展成进行性肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔积液、全血細胞減少、肾衰竭、败血症休克及Reye综合征等多种并发症而死亡,禽流感的治疗,以下抗病毒药剂可抑制流感病毒，使症狀减轻病程缩短，应在发病初期24-48h服用，方能有效控制病情 金刚胺(amantadine):仅对A型流感有效，会产生神经及肠胃系統副作用，抗药性高，使用需注意 Rimantadine:仅对A型流感有效，抗药性高 克流感(tamiflu
12、):副作用较低,食品安全,一般只要以56加热3h、60加热30min或100加热1min均可杀灭病毒; 只要将鸡肉、鸡蛋等食品确实煮熟食用，且充分加热就可以减少被感染的几率。,预防措施,减少与禽类接触 养成良好个人卫生习惯 切勿食用未烹煮的肉类 减少出入公共场所 均衡饮食，适当运动，提升自身免疫力 出现疑似症狀，依指示戴口罩就医,2008年11月2-3日在北京召开,H5N1 pandemic flu,世卫组织被指夸大甲流威胁 建专家组进行调查 中新网2010年4月13日电： 大约1年前，世界卫生组织因甲型H1N1流感出现而发出21世纪首个流感大流行警告，但此后一直有舆论批评世卫受到商业利益影响
13、，夸大甲流威胁。世卫12日组成专家调查小组，针对有关争议展开调查。 世卫特别从组织以外请来29位专家，组成国际卫生条例检讨委员会，从12日起，在瑞士日内瓦举行3天的成立会议。世卫总干事陈冯富珍强调，专家小组应是“独立、可信和透明”。,甲型 H1N1流感,A H1N1,2010/06/08国际在线专稿：据克罗地亚国家报6月7日报道，日前，英国相关部门的一项调查显示，WHO 的3名专家从生产达菲的药厂收受贿赂，有意制造了甲型流感病毒的恐慌。,禽流感病毒致病力的变化范围很大。流感病毒感染引发的疾病可能是不明显的或是温和的一过性的综合征，甚至是100%发病率和/或死亡率的疾病。 疾病的症状可能表现在呼
14、吸道、肠道或生殖系统，并随病毒种类、动物种别、龄期、并发感染、周围环境及宿主免疫状态的不同而不同。 禽流感病毒的毒力主要决定于病毒粒子的复制速率和血凝素蛋白裂解位点附近的氨基酸组成。,Avian Influenza Virus,(AIV)检测,临床诊断： （1）高致病性禽流感：爆发时家禽大批急性死亡，产蛋停止，呼吸道症状，头部、颜面部和颈部浮肿，无毛部皮肤（冠肉髯、脚部）发绀、肿、出血、坏死，白绿色下痢。 （2）低致病性禽流感：无症状急性感染，死亡率为5%15%，产蛋率下降5%50%，呼吸道病变、气管水肿、干酪样渗出物、气囊炎，肾脏肿大、尿酸盐沉着。,禽流感病毒检测,实验室诊断 仅根据临诊症状
15、及剖检病变，很难确诊，必须进行实验室诊断。 （1）病毒分离 （2）血清学检测 （3）病毒定型及定性 （4）致病性（毒力）的测定 （5）基因诊断,禽流感病毒检测,生物安全实验室,P1实验室研究的病毒危险性较低，试验人员连口罩都不用带，穿上白大褂就可以了，试验人员在这里很放松； P2实验室研究的是中度危险的病源，像肝炎、流感冒等等，要求戴防护性较好的口罩； P3实验室研究的是高度危险病毒，传染性很强，而且无疫苗，试验人员的保护措施要比P1/P2实验室严密得多； P4实验室全球级别最高的生物安全实验室，研究的是极度危险的病毒，例如令人谈之色变的Ebola病毒，进入这种实验室的工作人员，处于防护服的严
16、密保护之下，连空气都不能在实验室内呼吸，红色螺旋状管子，是专门用来向室内输送新鲜空气的，试验人员一进入实验室，要先屏住呼吸，马上接上这种管子，然后才能呼吸。,实验室诊断 （1）病毒分离 取样：喉头、气管、肺、气囊、肝、脾、脑及直肠内容物等。（置于加有青霉素10000 U/ml，链霉素10000 U/ml组织培养液或50%葡萄糖磷酸盐缓冲液中4保存或运输，不超过48h。） 接种：用上述溶液将病料制成10%乳剂-70保存或3000 r/m离心5min，取上清液用0.2-0.45um的滤膜过滤除菌，取滤液0.3ml，尿囊腔接种9-11日龄SPF鸡胚，每份样品至少接种5个鸡胚。,禽流感病毒检测,实验室
17、诊断 （1）病毒分离 孵化: 374d(剔除接种后24h内死亡鸡胚)，置于4 612h杀死鸡胚，吸取尿囊液，同时采取绒毛尿囊膜。尿囊液中若含有AIV时，HA试验呈阳性。 判断：若初代尿囊液HA试验呈阴性，需再传一代，取尿囊液1:10稀释接种0.3ml/胚，再呈阴性则判断为阴性反应；若呈阳性，用ND抗血清进行HI试验，若呈阴性反应时再结合以下血清学诊断可初步判定为AIV感染。,禽流感病毒检测,（2）血清学检测 利用AGP(琼脂凝胶扩散试验)、ELISA方法可检测A型流感病毒共有的特异性抗体或抗原，已鉴定的标准AIV制备的抗原可用检测可疑鸡群的血清抗体（此步骤可在病毒分离前进行）。 将上述病毒分离
18、时采用的鸡胚尿囊膜用PBS（pH= 7.2）洗净，排尽囊中液体，研磨乳剂，反复冻融3次，3000r/m离心10min，取上清液，用终浓度0.1%的福尔马林经3736h灭活，即可用作AGP抗原（3个膜可制做约1ml抗原）。用已知的标准抗血清与其进行AGP试验，鉴定分离病毒。,禽流感病毒检测,（3）病毒定型及定性 H和N亚型：确定亚型需用已定型（H1H5，N1 N9）的一系列单特异性抗血清做HI (血凝抑制 )试验，因此应交专门机构进行。 （4）致病性（毒力）的测定 HPAIV的判定标准（美国家畜卫生协会） （5）基因诊断 利用PCR方法直接检出病毒的基因，较常规的病毒分离法速度快，特异性高，而且可克服因野外取料混有其他病毒造成的误诊。,禽流感病毒检测,某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集红细胞凝集反应（HA）。这种凝集反应克被加入的特异性血清所抑制红细胞凝集抑制试验（HI）。,
