1、 微生物相关知识微生物相关知识培训培训了解以下内容：一、微生物基础知识二、微生物污染的相关知识三、洁净室主要微生物污染源及相关检测l什么是微生物l微生物的存在l微生物的益处l微生物的危害l它们是非常小的单细胞或多细胞生物，不借助显微镜用肉眼无法看到。l它们对营养的要求非常低。l它们是一类繁殖非常快的生物。l它们非常容易发生变异。l它们无处不在。l大多数微生物对人类有益。l有些微生物对人类有害。 微生物的种类具有细胞结构的微生物没有细胞结构的微生物：病毒原核生物：（由原核细胞构成的）真核微生物（由真核细胞构成的）真菌显微藻类原生动物细菌草履虫水绵放线菌一、细菌：一、细菌：分为杆菌、球菌和螺形菌三
2、类葡萄球菌链球菌弧状菌螺旋菌四联球菌四联球菌 细菌细菌群体形态群体形态菌落：在固体培养基上菌落：在固体培养基上, ,由单个由单个细胞繁殖形成的肉眼可见的子细细胞繁殖形成的肉眼可见的子细胞群体。胞群体。菌苔菌苔: :大量细胞密集生长大量细胞密集生长, ,结果长结果长成的各成的各“菌落菌落”连接成一片连接成一片。 2. 2. 液体培养基液体培养基3. 3. 半固体培养半固体培养 二、真菌二、真菌 效应：引起物质变质腐烂的主要原因；发酵、制药、食品工业等中具有重要作用；少数致病。真菌单细胞单细胞多细胞多细胞酵母菌类酵母菌霉菌黑曲霉菌丝状真菌1.1.酵母菌酵母菌固体培养固体培养 菌落特征：菌落特征：菌
3、落大而厚，圆形，光滑菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调。湿润，粘性，颜色单调。常见白色、土黄色、红色。常见白色、土黄色、红色。啤酒酵母菌落霉菌：为丝状真菌的统称。凡是在营养基质上能形成霉菌：为丝状真菌的统称。凡是在营养基质上能形成绒毛状、网状或絮状菌丝体的真菌（除少数外），统绒毛状、网状或絮状菌丝体的真菌（除少数外），统称为霉菌。称为霉菌。2.2.霉菌霉菌 一般情况下，霉菌在潮湿的环境下易于生长，一般情况下，霉菌在潮湿的环境下易于生长，特别是偏酸性的基质当中。特别是偏酸性的基质当中。菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，有的呈绒毛状或絮干燥、不透明，
4、有的呈绒毛状或絮状或网状等，菌体可沿培养基表面状或网状等，菌体可沿培养基表面蔓延生长，由于不同的真菌孢子含蔓延生长，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈现红、有不同的色素，所以菌落可呈现红、黄、绿、青绿、青灰、黑、白、灰黄、绿、青绿、青灰、黑、白、灰等多种颜色。等多种颜色。l水l土壤l空气l衣服l地板l海水l油膜l废水l排水口l洗手池l汽油罐l嘴l头发l皮肤l鼻子l肠道l食物l昆虫l动物l南极 (2500C)无处不在！无处不在！l啤酒，葡萄酒的生产l面包酵母的生产l奶酪的生产l醋的生产l酸奶的生产l维生素的生产l类固醇的生产l抗菌素、干扰素的生产l分解废物，循环利用l帮助肠道中的食物
5、消化l除虫1、可引起局部感染-葡萄球菌 2、胆道和尿道感染-大肠杆菌 3、化脓性感染、中耳炎、肺炎-绿脓杆菌4、 结膜炎-枯草杆菌5、 使糖分解，药液产生有机酸-酵母菌 6、 使制剂霉坏，酸败变质-霉菌 污染：在生产、取样、包装污染：在生产、取样、包装或重新包装、贮存或运输等或重新包装、贮存或运输等操作过程中，原辅料、中间操作过程中，原辅料、中间产品、待包装产品、成品受产品、待包装产品、成品受到具有化学或微生物特性的到具有化学或微生物特性的杂质或异物的不利影响。杂质或异物的不利影响。二、微生物污染的相关知识污染的形式:l 尘埃粒子l 微生物污染的载体:空气、水、表面、人。 a)自身污染：由于患
6、者和员工自身携带微生物而污染。 b)接触污染：由于和非无菌的用具、器械或人的接触而污染。 c)空气污染：由于空气中所含微生物的沉降、附着或被吸入而污染。 d)其他污染：由于其他因素（如昆虫）而污染。l 有效地阻止室外的污染侵入室内。l 迅速有效地排除室内已发生的污染。l 控制污染源，减少污染发生量。l 是能繁殖的活细胞生物。l 数量少而分布不均匀。l 多数处于受损伤状态。l 生存环境的多样性及复杂性。l有需要时要洗手及消毒；l尽量减少直接以双手接触药品；l接触产品的表面及用具 用后清洗 转换产品时清洗 l 空气l 水l 设备l 原辅料l 人员THANK YOUSUCCESS2022-4-192
7、5可编辑洁净度测定包括：l 悬浮粒子l 微生物 - 浮游菌 - 沉降菌 - 表面微生物 100级 3520 个/m3 0个/m3 10,000级 352000 个/m3 2900个/m3100,000级 3520000个/m3 29000个/m3微生物检测微生物检测菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU，通常用个数表示。1.浮游菌1.1定义：1.2浓度： 单位体积空气中含浮游菌菌落的多少，以计数浓度表示，单位是个/m3或个/L。1.3测试步骤：（参照GB/T 16293-2010）1.3.1采样器、培养皿进入被测房间消毒灭菌；1.3.2 采用仪器经消毒后先不放
8、入培养皿，开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min,并检查流量并根据采样量调整设定采用时间；1.3.3关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子；置采样口于采样点后，开启采样。 1.4 培养：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA），在30-35培养箱中培养，时间不少于2d 。1.5标准:洁净级别洁净级别微生物最大允许数微生物最大允许数浮游菌立方米100级510,000级1001OO,000级5002.沉降菌1.1定义： 用GB/T16294-2010提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。1.2菌落数： 规定时间内每个平板培养皿收集
9、到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。1.3原理： 采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，培养不少于2d的时间，让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定结净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。1.4步骤：1.4.1 测试前培养基表面必须严格消毒；1.4.2 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿；1.4.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间不大于4h；1.4.5全部采样结束后，将培养皿倒
10、置于恒温培养箱中培养；1.4.6采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA），在30-35培养箱中培养，时间不少于2d 。（每批培养基应有对照试验，检验培养基本事是否污染，每批可选定3只培养皿作对照培养。）1.4.7沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。1.5采样位置（参照GB/T16292-2010）a)工作区采样点位置离地0.8-1.5m左右（略高于工作面）；b)可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。1.6标准：洁净级别洁净级别微生物最大允许数微生物最大允许数沉降菌皿100级l10,000级31OO,000级103.3.表面
11、微生物表面微生物3.1采样位置：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。3.2测试方法：擦拭法3.3取样点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样，如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。3.4步骤：3.4.1在动态下监测；3.4.2依据测试区域的取样点数，制备适量的营养琼脂培养基;3.4.3将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分; 3.4.4将棉签按在取样物表面上，用力使其稍
12、弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面;3.4.5翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。但与前次擦拭移动方向垂直;3.4.6擦拭方法如图： 3.4.7擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固;3.4.8培养：取样结束后将平皿复倒置于培养箱内30-35培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。3.5标准： 体外诊断试剂生产实施细则第三章设体外诊断试剂生产实施细则第三章设施、设备与生产环境控制第二十六条中明确规定：施、设备与生产环境
13、控制第二十六条中明确规定：工艺用水制水设备应满足水质要求并通过验证，其工艺用水制水设备应满足水质要求并通过验证，其制备、储存、输送应能防止微生物污染和滋生，并制备、储存、输送应能防止微生物污染和滋生，并不应对产品质量和性能造成影响。制水设备应定期不应对产品质量和性能造成影响。制水设备应定期清洗、消毒、维护。应配备水质监控的仪器与设备，清洗、消毒、维护。应配备水质监控的仪器与设备，并定期记录监控结果。并定期记录监控结果。纯化水微生物检测：纯化水微生物检测：标准：细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。步骤：取本品10ml，采用薄膜过滤法处理后，取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板上，再
14、同上法操作后取出滤膜，菌面朝上贴于玫瑰红钠琼脂平板上，营养琼脂平板放入3035培养3天，玫瑰红钠琼脂平板放入2328培养5天后分别计数。l几乎没有细菌不“吃”的东西l设备和器具与药品直接接触- 设备和器具的清洗l清洁程序必须经过验证l按清洗周期清洗l清洗和存放设备、器具处应与生产区域洁净等级相同 包括厡辅料、内包装材料。 - 厡辅料微生物的限度标准？ - 内包装材料微生物的限度标准？ 符合药典或行业标准 厡辅料、内包装材料的贮存： - 包装严密，不得破损，污染。 - 清洁贮存。 NoNo洁净区生产人员要求：进入洁净室必须更换洁净服；洁净区生产人员要求：进入洁净室必须更换洁净服；并按照规定程序进
15、出洁净室；在洁净区生产操作动作并按照规定程序进出洁净室；在洁净区生产操作动作要准、稳、轻、少，减少不必要的谈话和活动；生产要准、稳、轻、少，减少不必要的谈话和活动；生产人员应定期进行微生物基础知识培训和卫生教育。人员应定期进行微生物基础知识培训和卫生教育。l每只手可携带40万个细菌；刚洗过的手，每平方厘米也可检验出3200个细菌 。l110万个细菌/ /cm2 皮肤表面!l用流水（如自来水）洗手，能使手上的致病微生物减少80%；l用皂液充分洗手，再用自来水冲洗能使致病微生物减少95%。l洗手后正确使用消毒剂能使致病微生物减少到99%。正确洗手的步骤：1. 1. 一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾
16、、颗粒及微生物。相对而一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而言，脚底是最脏的部分。言，脚底是最脏的部分。2. 2. 脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。3. 3. 一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。洗手一定要用洗手液和充足的流水。4. 4. 二更二更带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱下洁净区内不能脱下口罩口罩带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。带发套：
17、阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的保证发套完整的包裹头发。包裹头发。穿连体服：阻断体表皮肤的微生物发散。穿连体服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开连洁净区内不能解开连体服体服手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。75%75%的酒精能杀灭的酒精能杀灭99%99%的微生物。的微生物。二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。我们的更衣流程我们的更衣流程想混进去，没门想混进去，没门！ 10 50 100-250当有如下行为时将相应增加微粒的产生量:- 吸烟者的呼吸 500%l喷嚏 2000%l搓手 200%l行走 200%l跺脚 5000%谢谢大家！谢谢大家！ 结束语当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的，所以不要放弃，坚持就是正确的。When You Do Your Best, Failure Is Great, So DonT Give Up, Stick To The End谢谢大家荣幸这一路，与你同行ItS An Honor To Walk With You All The Way演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
