1、项目六 无菌和无菌操作技术1PPT课件无菌:没有活的微生物存在的状态。无菌操作技术:用于防止微生物进入无菌范围造成污染的操作技术。2PPT课件一、无菌的环境二、无菌的器具、培养基三、无菌操作技术四、基本规则3PPT课件一、无菌的环境1、无菌室2、超净工作台3、生物安全柜4、火焰周围4PPT课件1、无菌室标准无菌室的要求:房间设置(外面有缓冲室)、空气过滤、墙面、墙角、微生物操作相关设备、紫外灯等。无菌室布局5PPT课件如条件有限,可在微生物实验室内专辟一个小房间作为无菌室。可以用板材和玻璃建造,面积4-5 平方米即可。板材和玻璃隔出的无菌室6PPT课件2、超净工作台超净工作台是一种提供局部无尘
2、无菌工作环境的垂直单向流型空气净化设备。 超净工作台7PPT课件3、生物安全柜生物安全柜外形与超净台类似,也提供局部无尘无菌工作环境。但它设置了风槽,气流不会吹向使用者,可以有效保护使用者。生物安全柜8PPT课件4、火焰周围通常使用酒精灯、煤气灯,其火焰周围是无菌区域(直径10cm左右)。这并不是利用高温杀死细菌,而是利用向上的单向气流形成一个无菌区域。火焰周围是无菌区域9PPT课件二、无菌的器具、培养基1、玻璃、金属等器具 干热灭菌法2、玻璃、金属、含水物品 高压蒸汽灭菌法3、金属、玻璃器具 火焰灭菌法4、液体或水溶性物质 过滤除菌法10PPT课件1、玻璃、金属等器具-干热灭菌法设备:电烘箱
3、用途:用于玻璃器皿、金属器具等耐热物品的烤干和灭菌。条件:160-165,灭菌 1-2小时。11PPT课件2、玻璃、金属、含水物品等-高压蒸汽灭菌法设备:高压蒸汽灭菌锅用途:培养基、生理盐水、废弃物、采样器、纱布、衣物的灭菌。条件:121 水蒸气 15分钟培养基一般使用高压蒸汽灭菌法12PPT课件3、一些金属、玻璃器具-火焰灭菌法即在火焰外焰上灼烧进行灭菌。用途:接种环、接种针;涂布器;试管管口、锥形瓶瓶口等的灭菌。13PPT课件4、液体或水溶性物质-过滤除菌法器具:细菌过滤器用途:不耐高温的液体、水溶性物质的除菌。细菌过滤器14PPT课件三、无菌操作技术我们通过一定的技术来保证目的微生物、培
4、养基不被环境微生物污染,这些技术就是无菌操作技术。包括手部清洁消毒,用接种针、接种环、吸量管、涂布棒等工具进行各种操作等等。15PPT课件1、手部清洁消毒洗手:手部有可见灰尘时、饭前、便后,用水和肥皂洗手;Handrub(揉手):手部较清洁时,75%乙醇或者醇基消毒剂揉手。16PPT课件动作:手掌-手背-指缝-手指-拇指-指尖-手腕17PPT课件2、培养皿操作培养皿开合:单手打开和盖上皿盖,包括持皿法和皿加法两种。此操作用于制作培养基平板、接种等。持皿法18PPT课件皿加法19PPT课件3、接种环操作包括灼烧接种环、接种、划线等。20PPT课件灼烧接种环先斜放外焰灼烧接种环,然后垂直放置后继续
5、灼烧,再斜烧金属杆。现在红外接种环灭菌器使用也比较广泛。红外接种环灭菌器21PPT课件用接种环进行接种22PPT课件用接种环进行划线23PPT课件4、涂布棒操作灼烧灭菌:可以沾酒精然后灼烧,灼烧范围要包括其杆部。24PPT课件涂布:将菌液滴在培养基表面中央。右手拿涂布棒将菌液沿一条直线来回推动,然后沿一垂直线来回推动,平板边缘处可改变方向再涂几次。涂布25PPT课件5、试管操作单试管操作(注意左右手的使用)26PPT课件双试管操作27PPT课件四、基本规则不得留长指甲,头发需扎好;无菌操作中不要大声笑、说话、打喷嚏、打闹。28PPT课件手不要在无菌物上方越过;要了解拿无菌物的位置,不触碰其之外的位置;不要将无菌物移出无菌范围。29PPT课件