1、课题1 微生物的实验室培养一、基础知识一、基础知识（一）培养基（一）培养基1 1、概念、概念人们按照人们按照微生物对微生物对营养物质营养物质的不同需求的不同需求，配制出供其生长，配制出供其生长繁殖的繁殖的营养基质营养基质。2 2、培养基的类型和用途、培养基的类型和用途（1 1）按物理性质划分：）按物理性质划分：液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基注：（固体、半固体培养基需注：（固体、半固体培养基需添加凝固剂添加凝固剂，如琼脂如琼脂；两者；两者的差别是添加量的的差别是添加量的多、少多、少；液体培养基；液体培养基不加凝固剂不加凝固剂。）。）（工业生产工业生产）（微生物保
2、存、微生物保存、分离、鉴定分离、鉴定、活菌计数、活菌计数）（观察微生物的运动、分类观察微生物的运动、分类、鉴定、鉴定）液体培养基与固体培养基液体培养基与固体培养基（2 2）按化学成分划分：）按化学成分划分：合成培养基合成培养基培养基成分明确（用化学成分已知的化合物配制）培养基成分明确（用化学成分已知的化合物配制）（微生物的分类、鉴定微生物的分类、鉴定）天然培养基天然培养基含化学成分不明的天然物质含化学成分不明的天然物质（工业生产工业生产）（3 3）按用途划分：）按用途划分：选择培养基选择培养基加入加入某种化学物质某种化学物质，以，以抑制抑制不需要的微生物的生长，不需要的微生物的生长，促进促进所
3、需要微生物的生长。所需要微生物的生长。（分离微生物、进行选择培养。分离微生物、进行选择培养。）鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化指示剂或化学药品学药品配制而成的，用以配制而成的，用以鉴别鉴别不同种类的微生物。不同种类的微生物。（微生物的鉴定微生物的鉴定）青霉素青霉素抗青霉素基因抗青霉素基因基因工程，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选基因工程，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选选择培养基选择培养基不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: :分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵
4、母菌、霉菌等分离酵母菌、霉菌等真菌真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: :分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌伊红美蓝伊红美蓝大肠杆菌大肠杆菌在伊红美蓝培养基上在伊红美蓝培养基上菌落呈现黑色菌落呈现黑色 注：注：病毒专性活细胞寄生病毒专性活细胞寄生，目前不能利用人工培养基来培，目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动植物组织中才能增值。养，需接种在动植物组织中才能增值。常用于培养动物病常用于培养动物病毒的是活鸡胚毒的是活鸡胚。鉴别培养基鉴别培养基3 3、培养基的成分培养基的成分不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培
5、养基，一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源和和无机盐无机盐。（1 1）碳源）碳源为微生物提供所需为微生物提供所需碳元素碳元素的营养物质，的营养物质，需要量最大需要量最大。概念：概念：来源来源： 无机碳源：无机碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3等（等（自养型微生物自养型微生物）有机碳源：有机碳源：糖类糖类（异养型微生物异养型微生物） 、脂肪酸、花、脂肪酸、花生粉饼、石油等生粉饼、石油等作用作用：构成微生物的细胞物质和一些代谢产物构成微生物的细胞物质和一些代谢产物；思考：大肠杆菌，硝化细菌，蓝藻，乳酸菌分别选用哪种思考：大肠杆菌，硝化细菌，蓝藻，乳酸菌分别选用哪种碳源？碳源？糖类，二氧
6、化碳，二氧化碳，糖类糖类，二氧化碳，二氧化碳，糖类 牛肉膏（Beef Extract）又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。现在，市场上出现了一些熟食店、面馆为牟利而用牛肉膏将猪肉“变”牛肉的现象 蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨动物性来源的蛋白胨还有：蚕
7、蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。等。蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋血胶、大豆蛋白、丝蛋血纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量介于月市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量介于月示和肽之间，约示和肽之间，约2000左右。不同来源的蛋白质和不左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝往往是一个复杂的多肽混合物
8、。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。剂。鲜骨蛋白胨鲜骨蛋白胨 采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而成。广泛用于采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而成。广泛用于黄原胶、食品添加剂、医黄原胶、食品添加剂、医（2 2）氮源）氮源概念：概念：为微生物提供所需为微生物提供所需氮元素氮元素的营养物质。的营养物质。来源来源：无机氮源：无机氮源：N N2
9、 2、NHNH3 3 、 NHNH4+4+、NONO3-3-等。等。（固氮微生物，硝化细菌固氮微生物，硝化细菌）有机氮源：有机氮源：尿素、尿素、牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等、氨基酸等（异养型微生物异养型微生物）作用作用：主要用于主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。注：注：“含含C C、N”N”的有机物常是异养微生物的氮源的有机物常是异养微生物的氮源，也是碳也是碳源源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是单一方面的，即有些化合物作为营养要素成分时并不是单一方面的作用。作用。思考：培养根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分别需要哪一思考：培养根瘤菌、大肠
10、杆菌、硝化细菌时分别需要哪一类氮源？类氮源？N N2 2，铵盐或硝酸盐，铵盐或硝酸盐，NHNH3 3（3 3）水）水（4 4）无机盐）无机盐（5 5）培养基内所需的其他条件培养基内所需的其他条件概念：概念：微生物生长不可缺少的微生物生长不可缺少的微量有机物微量有机物。注：并不是所有微生物都需要添加特殊营养物质，有些需注：并不是所有微生物都需要添加特殊营养物质，有些需要添加，原因是它们自身要添加，原因是它们自身缺乏合成这些物质的酶缺乏合成这些物质的酶或或合成能合成能力有限力有限。如：如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素。维生素。来源：来源：维生素维生素、氨基酸氨
11、基酸、碱基碱基等。等。作用：作用：酶酶、核酸核酸的组成成分。的组成成分。、特殊营养物质特殊营养物质（生长因子生长因子）、pHpH值值如如: :培养培养霉菌需酸性霉菌需酸性、培养、培养细菌需中性或微碱性细菌需中性或微碱性。、氧气的含量氧气的含量如如: :培养培养厌氧微生物厌氧微生物时需要提供时需要提供无氧无氧的条件。的条件。4 4、培养基的配制原则、培养基的配制原则（1 1）目的要明确（）目的要明确（根据微生物的种类、培养目的根据微生物的种类、培养目的）（2 2）营养协调）营养协调 （注意营养物质的（注意营养物质的浓度浓度和和比例比例）（3 3）pHpH适宜适宜（4 4）温度适宜）温度适宜（二）
12、无菌技术（二）无菌技术1 1、概念、概念泛指在培养微生物的操作中，所有泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染防止杂菌污染的方法。的方法。获得纯净培养物的关键（目的）获得纯净培养物的关键（目的）: :防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵。2 2、无菌技术包括的四个方面（、无菌技术包括的四个方面（措施措施）（1 1）对实验操作的）对实验操作的空间、操作者的衣着和手空间、操作者的衣着和手进行进行清洁和清洁和消毒消毒；（2 2）将）将培养的器皿、接种用具和培养基培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行等器具进行灭菌灭菌；（3 3）为避免周围微生物污染，）为避免周围微生物污染，实验操作实验操作应在应在
13、酒精灯火焰酒精灯火焰附近附近进行；进行；（4 4）避免避免已灭菌处理的材料用具已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触与周围物品相接触。3 3、消毒与灭菌、消毒与灭菌（1 1）消毒）消毒概念：概念：使用使用较为温和较为温和的物理或化学方法的物理或化学方法仅杀死物体表面仅杀死物体表面或或内部一内部一部分部分对人体有害的微生物（对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）。）。在在细菌、原生动物、真菌和植物等细菌、原生动物、真菌和植物等生物体的一定部位产生生物体的一定部位产生一种一种特殊的生殖细胞特殊的生殖细胞叫孢子。孢子的特点是能叫孢子。孢子的特点是能直接长成新直接长成新个体。个体。有些细
14、菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌常用常用方法方法: :a a、煮沸消毒法、煮沸消毒法100100煮沸煮沸5-6min
15、5-6min，用于，用于一般物品一般物品的消毒。的消毒。b b、巴氏消毒法、巴氏消毒法70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min，对一些，对一些不耐高温的不耐高温的液体液体，如，如牛奶的消毒牛奶的消毒。c c、化学药剂消毒、化学药剂消毒酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等，如酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等，如酒精擦拭双手酒精擦拭双手、氯气消毒水源氯气消毒水源等。等。d d、紫外线消毒、紫外线消毒对对接种室、接种箱或超净工作接种室、接种箱或超净工作台台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使溶液以增强消毒效果，然后使
16、用紫外线进行物理消毒。只适用紫外线进行物理消毒。只适用于物体用于物体表面灭菌和空气灭菌表面灭菌和空气灭菌。（2 2）灭菌）灭菌使用使用强烈强烈的理化因素的理化因素杀死物体内外所有杀死物体内外所有的的微生物，微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子。常用常用方法方法: :a a、灼烧灭菌、灼烧灭菌用于用于金属用具金属用具（接种环、接种针接种环、接种针）、）、或接种过程中或接种过程中试管口和瓶口试管口和瓶口的灭菌；的灭菌；b b、干热灭菌、干热灭菌160160170 170 ，1 12h2h。能耐高温的需要能耐高温的需要保持干燥的物品保持干燥的物品，用于，用于玻璃器皿、金属玻璃器皿、金属用具用具的灭菌
17、的灭菌 ，所用设备是，所用设备是干热灭菌箱干热灭菌箱 ；c c、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌121121，100kPa100kPa，15-3015-30分钟。用于分钟。用于培养基、无菌水培养基、无菌水等的灭菌等的灭菌 ，所用设，所用设备是备是高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅。 为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗伯特伯特科赫此试着用明胶作培养基的凝固剂。科赫此试着用明胶作培养基的凝固
18、剂。 但是，但是，人们很快发现，明胶在人们很快发现，明胶在20 以上就变软了，很难进以上就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温度都不低于度都不低于25 。科赫的同事。科赫的同事Walter Hesse发现琼发现琼脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。法很快就被大家采纳。 琼脂(琼胶)、冻粉，通称洋粉或洋菜。用海产的石花菜、江蓠等制成。为无色、无固定形状的固体，溶于热水。可作冷食和细菌的培养皿菌落:单个或少数细菌单个或少数细菌在固体培养基上在固体培养基上大量繁殖
19、时，就大量繁殖时，就会形成一个肉眼会形成一个肉眼可见的，具有一可见的，具有一定形态结构的子定形态结构的子细胞群体，叫细胞群体，叫菌菌落落。菌落是鉴定菌种菌落是鉴定菌种的重要依据。的重要依据。例例1：为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制的培养基的配方如下表：为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制的培养基的配方如下表： (1)该培养基所含的碳源有该培养基所含的碳源有_ _，其功，其功能是能是_。(2)该培养基所含的氮源是该培养基所含的氮源是_，其功能是，其功能是_。(3)该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质是物质是_。(4)该细菌在同化
20、作用上的代谢类型是该细菌在同化作用上的代谢类型是_。(5)该培养基可用来鉴别哪种细菌该培养基可用来鉴别哪种细菌( ) A霉菌霉菌B大肠杆菌大肠杆菌 C酵母菌酵母菌 D乳酸菌乳酸菌乳糖、蔗糖、蛋白胨乳糖、蔗糖、蛋白胨构成微生物的细胞物质和一些代谢产物构成微生物的细胞物质和一些代谢产物蛋白胨蛋白胨合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物水、无机盐水、无机盐异养型异养型B B二、实验操作二、实验操作( (以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例) )（一）制备（一）制备牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固体培养基固体培养基1 1、计算、计算2 2、称量、称量注意：牛肉膏比较注意：牛肉膏
21、比较黏稠黏稠，天平称量时，放等大的，天平称量时，放等大的称量纸称量纸，防止牛肉膏防止牛肉膏粘在托盘上粘在托盘上；牛肉膏和蛋白胨都；牛肉膏和蛋白胨都易吸潮易吸潮，称，称取时取时动作迅速动作迅速，称后要，称后要及时盖上瓶盖及时盖上瓶盖。（通用培养基通用培养基）3 3、溶化、溶化牛肉膏和称量纸牛肉膏和称量纸+ +水水取出称量纸取出称量纸加热加热加蛋白胨和氯化钠加蛋白胨和氯化钠搅拌搅拌加琼脂加琼脂（不断搅拌，防止糊不断搅拌，防止糊底而导致烧杯破裂底而导致烧杯破裂）补加蒸馏水至补加蒸馏水至100ml100ml思考思考1.1.溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热
22、? ?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中, ,减少误差。减少误差。2.2.加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么? ?作为凝固剂作为凝固剂4 4、灭菌、灭菌培养基：培养基：高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养皿：培养皿：干热灭菌干热灭菌思考思考1.1.在灭菌前在灭菌前, , 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？的目的是什么？灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞；取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用。取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用。2.培养皿能
23、否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？不能不能, ,因为培养皿要保持干燥因为培养皿要保持干燥, ,应该用干热灭菌。应该用干热灭菌。3.3.在培养微生物时，由于不同微生物适应的在培养微生物时，由于不同微生物适应的PHPH不同，因此不同，因此在熔化后必须调节在熔化后必须调节PHPH，那么是先调，那么是先调PHPH还是先灭菌还是先灭菌? ?先调先调PHPH，后灭菌。，后灭菌。5 5、倒平板、倒平板用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。板。灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。思考思考1.1.
24、培养基灭菌后要冷却到培养基灭菌后要冷却到5050时倒平板。用什么办法来估时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染, ,又可以避免培养又可以避免培养基中的水分过快地挥发。基中的水分过快地挥发。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。因此最好不要用这个平
25、板培养微生物。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌1 1、纯化培养技术：纯化培养技术：自然环境中，微生物混在一起生长，要想纯培养，首先要自然环境中，微生物混在一起生长，要想纯培养，首先要将单个细胞与其他细胞分离开，进而培养成可见的群体将单个细胞与其他细胞分离开，进而培养成可见的群体（即菌落）。（即菌落）。2 2、细菌的菌落、细
26、菌的菌落定义定义：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。特征：特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。等。功能功能：菌种鉴定的重要依据菌种鉴定的重要依据。形态各异的菌落形态各异的菌落3、常用接种方法、常用接种方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法（主要用于纯化培养主要用于纯化培养）（主要用于分离菌种并计数主要用于分离菌种并计数）(1)(1)平板划线法：平板划线法：通过接种环在琼脂通过接种环在
27、琼脂固体固体培养基培养基表面表面连续划线的连续划线的操作，将聚集的菌种逐操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的步稀释分散到培养基的表面。在表面。在数次划线数次划线后培后培养，可以分离到由养，可以分离到由一个一个细胞细胞繁殖而来的繁殖而来的菌落菌落。接种环接种环平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作结束后灼烧：操作结束后灼烧：杀死接种环
28、上残留的菌种，避免细菌污杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境及感染操作者。染环境及感染操作者。思考思考第一步灼烧：第一步灼烧：消灭接种环上的微生物避免污染培养物；消灭接种环上的微生物避免污染培养物；每次划线前灼烧：每次划线前灼烧：为了杀死上一次划线结束后接种环上残留的为了杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到由单个细菌繁殖的菌落以便得到由单个细菌繁殖的菌
29、落。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。增加而逐步减少，最终能得到由单个
30、细菌繁殖而来的菌落。(2)(2)稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：将将菌液菌液进行进行一系列的一系列的梯度稀释梯度稀释后，分别涂后，分别涂布到布到固体培养基固体培养基表面。表面。稀释度足够高时，能稀释度足够高时，能培养出培养出单个菌落单个菌落。稀稀释涂布平板法操作过释涂布平板法操作过程程分两个步骤分两个步骤，即，即系系列稀释操作列稀释操作和和涂布平涂布平板操作板操作。涂布器涂布器系列稀释操作系列稀释操作101102103104105106注意：注意：1.移液管需要经过灭菌移液管需要经过灭菌2.操作时，试管口和移液管应在离火焰操作时，试管口和移液管应在离火焰12CM处处涂布平板操作涂布平板操作思考
31、思考 将将接种后接种后和和未接种未接种（作为对照组作为对照组）的培养基均放到）的培养基均放到37370 0C C的恒温箱中，的恒温箱中，培养培养121224h24h后后进行观察并记录结果。进行观察并记录结果。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应步应如何进行无菌操作？如何进行无菌操作？答：答：应从操作的各个环节保证应从操作的各个环节保证“无菌无菌”。1.1.酒精灯与培养皿的距离要合适；酒精灯与培养皿的距离要合适；2.2.吸管头不要接触任何其他物体；吸管
32、头不要接触任何其他物体；3.3.要要在火焰周围迅速操作。在火焰周围迅速操作。未接种的培养基在恒温箱中保温未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，说后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。颜色相似的菌落。三、结果分析与评价三、结果分析与评价1 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？长，说明了什么？2 2、在接种大肠杆菌的培养
33、基上，能否观察到独立的菌落？、在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？它们的大小、形状、颜色相似吗？培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。无菌操作未达到要求：无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。3 3、培养、培养12h12h和和24h24h
34、后，观察到的实验结果相同吗？如果不后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？同，请分析产生差异的原因？4 4、如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可、如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。能的原因。将菌种接种到将菌种接种到试管的固试管的固体斜面培养基体斜面培养基，放入，放入44冰箱冰箱中保存。以后每中保存。以后每3636个月，要将菌种转移到个月，要将菌种转移到新的培养基。新的培养基。四、课题延伸四、课题延伸3ml3ml甘油瓶中装入甘油瓶中装入1ml1ml甘油甘油后灭菌，再加入后灭菌，再加入1ml1ml菌液菌液，混匀，混匀后放入后放入-20-20冷冻箱
35、保存。冷冻箱保存。1.对于对于频繁使用频繁使用的菌种的菌种2.对于对于需要长期保存需要长期保存的菌种的菌种临时保藏：临时保藏：甘油管藏：甘油管藏：例例2 2：下列有关细菌培养的叙述，正确的是：下列有关细菌培养的叙述，正确的是（ ）A A在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌细菌B B在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长生长C C向液体培养基中通人氧气能促进破伤风杆菌的向液体培养基中通人氧气能促进破伤风杆菌的生长生长D D在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运
36、动运动D D例例3 3：某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行：某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。观察计数。请回答与此实验相关的问题。(1)(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和和_。除此之外，培养基还必须含。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是有的基本成分是_和和_。(2)(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。(3)(3)为了尽快观察到细菌培
37、养的实验结果，应将接种了湖为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在中培养，培养的温度设定在3737。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种上接种_作为对照实验。作为对照实验。氮源氮源碳源碳源 无机盐无机盐水水高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌恒温培养箱恒温培养箱无菌水无菌水(4)(4)培养培养2020小时后，观察到平板上有形态和颜色不小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有同的菌落，这说明湖水样品中有_种细种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污菌。一般说
38、来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越染的程度越_。(5)(5)如果提高培养基中如果提高培养基中NaClNaCl的浓度，可以用于筛选的浓度，可以用于筛选耐耐_细菌，这种培养基被称为细菌，这种培养基被称为_。多多高高盐盐( (或或NaCl)NaCl) 选择培养基选择培养基例例4 4：氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究：氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案小组依照下列实验方案( (如图如图1)1)筛选出能高效降解氯苯的微生物筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1SP1菌。培养基配菌。培养基配方如下表。方如下表。(1)(1
39、)配制配制号固体培养基时，除添加号固体培养基时，除添加号液体培养基成分号液体培养基成分外，还应添加外，还应添加_。(2)(2)培养基配制时，灭菌与调培养基配制时，灭菌与调pHpH的先后顺序是的先后顺序是_。琼脂琼脂先调先调pHpH、后灭菌、后灭菌(3)(3)从用途上来说，从用途上来说，号培养基和号培养基和号培养基分别属于号培养基分别属于_培养基和培养基和_培养基。在培养基。在号培养基号培养基中，为中，为SP1SP1菌提供氮源的成分是菌提供氮源的成分是_。通用通用选择选择硝酸铵硝酸铵(4)(4)在营养缺乏或环境恶劣时，在营养缺乏或环境恶劣时，SP1SP1的菌体会变成一个圆形的菌体会变成一个圆形的
40、休眠体，这种休眠体被称为的休眠体，这种休眠体被称为_。(5)(5)将将SP1SP1菌接种在含不同浓度氯苯的菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养，号培养液中培养，得到生长曲线得到生长曲线( (如图如图2)2)。从图。从图2 2可知，可知，SP1SP1菌在菌在_ _ _培养条件下最早停止生长，其原因是培养条件下最早停止生长，其原因是_。芽孢芽孢20mg/L20mg/L氯苯氯苯 碳源最早耗尽碳源最早耗尽p 经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量p Study Constantly, And You Will Know Everything. The More You Know, The More Powerful You Will Be写在最后Thank You在别人的演说中思考，在自己的故事里成长Thinking In Other PeopleS Speeches，Growing Up In Your Own Story讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
