1、实验二、血涂片制备实验二、血涂片制备 WBC分类计数分类计数 要求要求 初步掌握血图片制备、瑞氏染色初步掌握血图片制备、瑞氏染色原理方法，原理方法，WBC染色后形态学染色后形态学特点及其分类计数方法特点及其分类计数方法流程图：流程图：血液标本的采集制作1-2张血涂片提取白细胞充池WBC计数瑞氏染色WBC分类计数原理：原理：血标本 形态特点/颜色差异 分类计数操作：操作： 涂片 染色 镜下观察（低倍镜、油镜） 计算涂片瑞氏染色血涂片制备 瑞氏染色机理 主要成分：碱性美兰与酸性伊红主要成分：碱性美兰与酸性伊红 物理吸附、化学亲和与电荷作用，复杂的物理吸附、化学亲和与电荷作用，复杂的机理使细胞不同部
2、位着色不同机理使细胞不同部位着色不同。瑞氏染色的原理瑞氏染色的原理l组成：酸性染料伊红伊红和碱性染料美兰美兰溶于甲醇中l酸性染料与细胞中的碱性物质，如血红蛋白，嗜酸性颗粒结合，使其染成红色l碱性染料与细胞中的酸性物质，如核染色质，嗜碱性颗，血小板等结合，使其染成蓝色。l而中性颗粒可与两者都结合，染成紫红色【操作】【操作】1 1、血涂片制备、血涂片制备 标记标记 推片推片 干燥干燥 2 2、染色、染色染液染液(I(I液液) )数滴覆盖整个血膜数滴覆盖整个血膜 滴加等量或稍多的缓冲液滴加等量或稍多的缓冲液(II(II液液) ) 流水流水冲洗冲洗 干燥干燥 5-10min血血 涂涂 片片 染色染色勿
3、冲洗勿冲洗再加再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-8滴后将滴后将液和液和液充分混匀静置液充分混匀静置10分钟分钟直接流水冲洗3-5分钟（切勿先倒掉染液）涂片经水洗干燥后用油镜分类计数100个白细胞李四李四123123涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-8滴滴覆盖整个血膜覆盖整个血膜1分钟分钟 干燥 染色 冲洗瑞氏染液盖满血涂片1min缓冲液1-2倍5-10min晾干干燥3 3、低倍镜观察、低倍镜观察 全片浏览全片浏览WBCWBC分布与染色分布与染色4 4、油镜观察、油镜观察 一定方向顺序分类一定方向顺序分类100100个个WBCWBC 5 5、计算、计算 各类细胞百分率各类细胞百分率血涂片
4、的观察血涂片的观察低倍镜观察低倍镜观察1. 1.染色情况染色情况( (满意、偏酸、偏碱）满意、偏酸、偏碱）2. 2. 细胞分布情况细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李四李四123123外周血镜下WBC 外周血中常见细胞形态外周血中常见细胞形态l中性粒细胞：中性粒细胞： 胞体呈圆形，胞质量丰富 胞质中含有大量细小均匀的紫红色中性颗粒 核分为2-5叶，叶间有核丝相连l嗜酸粒细胞嗜酸粒细胞 胞体胞体呈圆形 胞质胞质中充满粗大、均匀整齐、紧密排列的橘红色嗜酸性颗粒 胞核胞核常分两叶，形似眼镜l嗜
5、碱粒细胞嗜碱粒细胞 胞体胞体呈圆形 胞质胞质中含少量粗大、大小不均、排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒，常覆盖在核上，核分叶常不明显。l单核细胞单核细胞 胞体呈不规则性或椭圆形 胞质量丰富，常呈毛玻璃样半透明 胞核大，形状不规则，呈椭圆形，肾形，马蹄形或不规则分叶，有时折叠卷曲，染色质细致疏松如网状l淋巴细胞淋巴细胞 胞体胞体呈圆形 胞质胞质量较少，仅在和的一侧出现，染色呈天蓝色或深蓝色透明 胞浆胞浆中偶见几颗大小不等的紫红色嗜天青颗粒 胞核胞核圆形，染色质粗糙紧密，偶见凹陷大淋巴细胞大淋巴细胞 胞体胞体圆形/椭圆形胞质胞质透明、淡蓝色胞质胞质内可有少量粗大、不均匀紫红色颗粒胞核胞核 圆/椭圆/肾形染色质染色质粗紧成块，深紫红色，核外缘光滑 白细胞分类计数的临床意义 疾病的诊断与鉴别 白血病筛查 功能性/器质性疾病鉴别 病情观察及疗效判断 判断感染的性质及预后
