1、专题专题5DNA和蛋白质技术和蛋白质技术考点一DNA的粗提取与鉴定1.1.基本原理基本原理提取原理提取原理DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度随浓度的变化溶液中的溶解度随浓度的变化而改变，而改变，DNADNA在在0.14mol0.14molL L的的NaClNaCl溶液中溶溶液中溶解度最低。解度最低。提纯原理提纯原理（对酶、高温和洗涤剂的耐受性及在酒精中的溶解度不同） 酶的专一性酶的专一性蛋白酶水解蛋白质而对蛋白酶水解蛋白质而对会对会对DNADNA不产生影响。（加柔嫩粉）不产生影响。（加柔嫩粉）蛋白质、蛋白质、DNADNA热稳定性不同。温度值为热稳定性不同。温度值为60608080，
2、因为该温度值蛋白质，因为该温度值蛋白质变性变性沉淀，而沉淀，而DNADNA不不会变性。会变性。 洗涤剂瓦解洗涤剂瓦解细胞膜细胞膜，对，对DNADNA没有影响。没有影响。 （3）DNA鉴定原理鉴定原理在在沸水浴沸水浴条件下，条件下，DNADNA遇二苯胺呈现遇二苯胺呈现蓝色蓝色 (1)材料的选取：选用DNA含量相对 的生物组织，如非哺乳动物的红细胞（鸡血）、菜花、洋葱等。 （2）材料处理：鸡血（吸水胀破法），植物细胞（洗涤剂和食盐。食盐的作用是溶解DNA，洗涤剂的作用的溶解细胞膜）要点要点 1、三次过滤、三次过滤 过滤过滤目的目的第一次第一次过滤用蒸馏水稀释过过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液的鸡血细
3、胞液获得含获得含核物质核物质的滤液的滤液第二次第二次过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2mol/L NaCl溶液溶液获得含获得含DNA的滤液的滤液第三次第三次过滤含黏稠物的过滤含黏稠物的0.14mol/L NaCl溶液溶液获得纱布上的粘稠物，获得纱布上的粘稠物，其化学本质是其化学本质是DNA 2 2、两次沉淀析出、两次沉淀析出依据的原理依据的原理第一次第一次DNA在氯化钠的物质的量浓度为在氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时溶解度最低时溶解度最低第二次第二次DNA在在冷却的冷却的95%的酒精的酒精中能沉淀析出中能沉淀析出 3 3、两次加蒸馏水、两次加蒸馏水加蒸馏水的目的加蒸馏水的目的第一次第
4、一次使血细胞破裂使血细胞破裂第二次第二次降低降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出 4.4.关于关于DNADNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是是A A充分溶解充分溶解DNADNA的盐溶液是的盐溶液是0.14mol/L0.14mol/L的的NaClNaCl溶液溶液B B实验中提取较纯净的实验中提取较纯净的DNADNA利用了利用了DNADNA不溶于酒精的不溶于酒精的特点特点C C对最后提取出对最后提取出DNADNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热灯直接加热D D实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同实验操作过程中先后两次加入蒸馏
5、水的作用相同 B 6.6.下列关于下列关于DNADNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是A A洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度B B在探究洗涤剂对植物细胞在探究洗涤剂对植物细胞DNADNA提取的影响实验提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C C常温下，常温下，DNADNA遇二苯胺被染成蓝色遇二苯胺被染成蓝色D D将滤液放在将滤液放在60607575的恒温水浴箱中保温的恒温水浴箱中保温10101515分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了
6、分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同和蛋白质对高温耐受性的不同D 7.7.下列有关下列有关“DNA“DNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定”实验原理的叙实验原理的叙述正确的是述正确的是 （ ）A ADNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，随溶液中的溶解度，随NaClNaCl溶液浓度溶液浓度的降低而减小的降低而减小B B利用利用DNADNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的于酒精的物质而得到较纯的DNADNAC CDNADNA是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有机溶剂
7、机溶剂D D在沸水中，在沸水中，DNADNA遇二苯胺会出现紫色反应遇二苯胺会出现紫色反应 B PCR技术扩增DNA片段 1原理：DNA复制。2条件：模板、原料、酶。3场所：体外PCR扩增仪。4. 过程：(1)PCR扩增技术和扩增技术和DNA复制的比较复制的比较细胞内细胞内DNA复制复制PCR不不同同点点解旋解旋解旋酶，边解旋边复制解旋酶，边解旋边复制80高温解旋，高温解旋，双链完全分开双链完全分开酶酶解旋酶，解旋酶，DNA聚合酶，聚合酶，DNA连接酶连接酶Taq DNA聚合酶聚合酶引物引物RNADNA或或RNA能量能量ATP不加不加温度温度体内温和条件体内温和条件高温高温细胞内细胞内DNA复制
8、复制PCR不不同同点点子链合成子链合成一条链连续一条链连续(先导链先导链)，另，另一条链不连续，先合成一条链不连续，先合成片段，再由片段，再由DNA连接酶连接酶连接连接(滞后链滞后链)两条子链均两条子链均连续合成连续合成相同点相同点提供提供DNA模板；模板；四种脱氧核苷酸做原料；四种脱氧核苷酸做原料；子链延伸的方向都是从子链延伸的方向都是从5端到端到3端端 PCR技术的应用 PCR技术模拟细胞内DNA的复制过程，实现对某一段DNA的扩增。PCR技术能在几小时内将极微量的DNA特异性地扩增上百万倍，从而有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分
9、析和检测能力，被广泛地应用于基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断、古生物学研究以及刑侦破案、亲子鉴定等诸多方面。考点二血红蛋白的提取和分离1.1.凝胶色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法是根据凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小相对分子质量的大小分离蛋白质的方法之一。分离蛋白质的方法之一。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，相对分子质量较大相对分子质量较大
10、的蛋白的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程程较短较短，移动速度，移动速度较快较快；相对分子质量较小相对分子质量较小的蛋白质分子比较容的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程易进入凝胶内的通道，通过的路程较长较长，移动速度，移动速度较慢较慢。因此，。因此，样品中样品中相对分子质量较大相对分子质量较大的蛋白质先流出，的蛋白质先流出，相对分子质量较小相对分子质量较小的的分子后流出。分子后流出。2.2.电泳电泳凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同
11、，在电场中受到的作用力大量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速率不同。从而达到对样品进的运动方向和运动速率不同。从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。行分离、鉴定或提纯的目的。下列有关提取和分离血红蛋白的叙述中，不正确的（）下列有关提取和分离血红蛋白的叙述中，不正确的（）A.A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B.B.通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取为样品的粗提取C.C.可以通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除可以通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即样品的纯化去，即样品的纯化D.D.可以通过可以通过SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度B解析：选B。样品处理是洗涤红细胞，使血红蛋白释放出来，通过离心法得到血红蛋白溶液。透析袋能使小分子自由进出，则大分子留在袋内，这样可以去除样品中相对分子质量较小的杂质。当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，这些蛋白质分子就可以分离开。判断纯化的蛋白质是否达到要求，通常用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法对蛋白质的纯度进行鉴定。
