1、一一 、组织学的研究内容和意义、组织学的研究内容和意义 组织学组织学: 是研究机体微细结构和是研究机体微细结构和 相关功能的科学。其研相关功能的科学。其研 究内容包括究内容包括细细 胞、组织胞、组织 和和器官系统器官系统三部分三部分, 又称又称 显微解剖学显微解剖学。细胞细胞: 是人体结构和功能的最小是人体结构和功能的最小 单位单位, 由细胞膜、细胞质和由细胞膜、细胞质和 细胞核构成。在电子显微细胞核构成。在电子显微 镜下还可以观察到细胞内镜下还可以观察到细胞内 部更细微的结构部更细微的结构, 即超微即超微 结构。结构。组织组织: 结构相同或相似的细胞群及结构相同或相似的细胞群及 细胞外基质构
2、成组织细胞外基质构成组织, 人体人体 的组织可分为四大类型的组织可分为四大类型, 即即 上皮组织上皮组织, 结缔组织结缔组织, 肌组织肌组织 和神经组织。和神经组织。器官器官: 不同的组织按一定的比例、不同的组织按一定的比例、 数量及方式组合成器官。数量及方式组合成器官。系统系统: 若干功能相关的器官构成系统。若干功能相关的器官构成系统。1. 光学显微镜光学显微镜(简称光镜简称光镜)的发明与细胞、的发明与细胞、 组织概念的提出组织概念的提出 裸眼分辨率裸眼分辨率: 0.2mm 光镜分辨率光镜分辨率: 0.2 m 即即 210-6 m2. 细胞学说的提出和组织学的建立细胞学说的提出和组织学的建立
3、 3. 电子显微镜电子显微镜(简称电镜简称电镜)的发明和超微的发明和超微 结构的发现结构的发现 电镜分辨率电镜分辨率: 0.2nm 即即 210-10 m4. 当代组织学当代组织学当代当代1. 对组织学内容的审视角度对组织学内容的审视角度2. 注意形态与功能的统一注意形态与功能的统一3. 注意培养观察与空间思维注意培养观察与空间思维 的能力的能力(一一) 光学显微镜技术光学显微镜技术 1. 石蜡切片术石蜡切片术 取材和固定取材和固定; 脱水和包埋脱水和包埋; 切片和染色切片和染色; 封片。封片。 HE染色染色: 为组织学最常用的染色为组织学最常用的染色 法法, 即即苏木精苏木精-伊红伊红染色法
4、染色法 (hematoxylin-eosin staining), 其中其中,苏木精为碱性染料主要使苏木精为碱性染料主要使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体染成体染成紫蓝色紫蓝色;伊红为酸性染料主要伊红为酸性染料主要使细胞质和细胞外基质中的成分染成使细胞质和细胞外基质中的成分染成红色红色。嗜碱性嗜碱性:组织结构对于碱性染料亲和组织结构对于碱性染料亲和力强的性质。嗜碱性结构可被苏木精力强的性质。嗜碱性结构可被苏木精染成紫蓝色。染成紫蓝色。 嗜酸性嗜酸性:组织结构对于酸性染料亲和组织结构对于酸性染料亲和力强的性质。嗜酸性结构可被伊红染力强的性质。嗜酸性结构可被伊红染
5、成红色。成红色。中性中性: 组织结构对于两种染料亲和组织结构对于两种染料亲和 力都不强的性质力都不强的性质, HE染色着染色着 色淡。色淡。其他切片技术其他切片技术: 火棉胶包埋火棉胶包埋, 冰冻冰冻 切片切片,涂片涂片,铺片铺片,磨片。磨片。其他染色法其他染色法: 硝酸银硝酸银神经细胞神经细胞(黑黑), 醛复红醛复红弹性纤维弹性纤维(紫紫), 甲苯胺蓝甲苯胺蓝肥大细胞肥大细胞(紫紫 红色红色)1. 透射电镜术透射电镜术 电子密度高电子密度高: 当电子束投射到密当电子束投射到密 度大吸附重金属多的结构时度大吸附重金属多的结构时, 电电 子被散射的多子被散射的多, 因此因此, 射落到荧射落到荧
6、光屏上的电子少而呈暗像光屏上的电子少而呈暗像, 电镜电镜 照片呈黑或深灰色照片呈黑或深灰色, 称为称为电子密电子密 度高度高。反之称为。反之称为电子密度低电子密度低。2. 扫描电镜术扫描电镜术(二二)电子显微镜技术电子显微镜技术组织化学术组织化学术: 为应用化学、物理、生为应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学原理物化学、免疫学或分子生物学原理和技术和技术, 与组织学技术相结合而产生与组织学技术相结合而产生的技术的技术, 能在组织切片定性、定位、能在组织切片定性、定位、定量地显示某种物质的存在与否以定量地显示某种物质的存在与否以及分布状态。及分布状态。细胞化学术细胞化学术:前述技术用于游
7、离细胞样前述技术用于游离细胞样品品 则称为则称为(cytochemistry)。1. 一般组织化学术一般组织化学术 基本原理是在切片上添加某种试剂基本原理是在切片上添加某种试剂, 和组织和组织 中待测反应物发生反应中待测反应物发生反应, 其终产物或为有色其终产物或为有色 沉淀沉淀, 以用光镜观察以用光镜观察, 或为重金属沉淀以用电或为重金属沉淀以用电 镜观察。镜观察。 (1) 糖类糖类:PAS反应反应, pariodic acid Schiff reaction (2) 脂类脂类: 油红、尼罗蓝及苏丹类染料油红、尼罗蓝及苏丹类染料 (3) 核酸核酸: 福而根反应福而根反应DNA; 甲基绿甲基绿
8、- 派若宁反映派若宁反映DNA绿色绿色,RNA红色。红色。 (4) 酶类酶类: 酶组织化学术。通过显示酶的酶组织化学术。通过显示酶的 催化活性以表示酶的存在。催化活性以表示酶的存在。2. 免疫组织化学术免疫组织化学术immunohistochemistry:是根据抗原与抗体特异性结合的原理是根据抗原与抗体特异性结合的原理,检检 测组织中肽和蛋白质的技术。肽和蛋白测组织中肽和蛋白质的技术。肽和蛋白质均具有抗原性质均具有抗原性, 当把人或动物的某种蛋当把人或动物的某种蛋白质作为抗原注入另一种动物白质作为抗原注入另一种动物, 其体内则其体内则会产生针对该抗原的特异性抗体。将抗会产生针对该抗原的特异性
9、抗体。将抗体从动物血清中提出后体从动物血清中提出后, 与标记物相结合与标记物相结合, 即成为标记抗体。即成为标记抗体。 用标记抗体与组织切片孵育用标记抗体与组织切片孵育, 抗体抗体 则与组织中相应抗原特异性结合在则与组织中相应抗原特异性结合在 显微镜下通过观察标记物而获知肽显微镜下通过观察标记物而获知肽 或蛋白质的分布部位。常用的标记或蛋白质的分布部位。常用的标记 物有物有荧光素荧光素, 辣根过氧化物酶、胶辣根过氧化物酶、胶 体金体金。3. 原位杂交技术即核酸分子杂交组原位杂交技术即核酸分子杂交组 织化学术。织化学术。 其原理为用带有标记物的已知碱基其原理为用带有标记物的已知碱基序列的核酸探针，与细胞内待测的序列的核酸探针，与细胞内待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性核酸按碱基配对的原则进行特异性原位结合，即杂交。然后，通过对原位结合，即杂交。然后，通过对标记物的显示和检测而获得待测核标记物的显示和检测而获得待测核酸的有无及相对量。常用的标记物酸的有无及相对量。常用的标记物有放射性核素（有放射性核素（3535S S，3232P P，3 3H H等）和等）和地高辛。地高辛。(四四) 放射自显影技术放射自显影技术(五五) 图象分析术图象分析术(六六) 细胞培养术和组织细胞培养术和组织 工程工程
