1、血细胞直方图血细胞直方图检验科检验科 马燕马燕血细胞计数原理一、电阻抗法 库尔特原理(亦称：电阻法、电脉冲法与电感应区技术)：悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时，取代相同体积的电解液，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。p与等渗电解质溶液相比，血细胞为不良导体，与等渗电解质溶液相比，血细胞为不良导体，血细胞电阻值血细胞电阻值 稀释液的电阻值稀释液的电阻值p血细胞通过检测器小孔管微孔的孔径感受器区时，检测器内外电极之间的恒流源电路上血细胞通过检测器小孔管微孔的孔径感受器区时，检测器内外电极之间的恒流源电路上
2、电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号。电阻值瞬间增大，产生一个电压脉冲信号。脉冲信号数脉冲信号数= =细胞数细胞数小孔管： 电阻抗法细胞计数的一个重要组成部分。 当电流接通，位于小孔两侧的电极产生恒定电流。若供给的阻抗是稳定的，则小孔的电压不变。 当有一个细胞通过小孔时，电阻会增加，瞬间引起电压变化，即“通过脉冲”细胞体积越大，脉冲振幅越高；细胞数量越多，脉冲数量越多 各种大小不同细胞产生的脉冲信号分别送入仪器内电脑的各个通道，运算各种大小不同细胞产生的脉冲信号分别送入仪器内电脑的各个通道，运算出各种细胞参数。出各种细胞参数。 细胞群体大小分布情况的图形，就成为细胞群体大小分布情况的图形，就成
3、为“细胞体积直方图细胞体积直方图”脉冲信号经过以下步骤，得出细胞计数：信号发生信号发生：各种微粒通过检测小孔时，“信号发生器”产生脉冲信号放放 大：大： 将血细胞产生的微弱脉冲信号，通过“放大器”放大阈值调节：阈值调节： “阈值调节器”在一定范围内调节参考电平的大小，能区分不同群细胞合适的信号电平，使计数结果尽可能符合实际甄甄 别：别：利用“甄别器” ，根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假信号（细胞碎片、杂质微粒）去掉整整 形：形：通过“整形器” ，将脉冲信号波形修整成一致标准的平顶波，显示为不同类群的细胞数计计 数：数：经过以上步骤偶，进入“计数系统” ，得出结果电阻抗法可精确测
4、出细胞（或类似颗粒）大小，是三分类的主要应用原理，也与光学检测原理，共同应用于五分类血细胞分析仪中。p 仪器将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并储存在相应体积通道中，每个仪器将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并储存在相应体积通道中，每个通道收集的数据被统计出：相对数，表示在通道收集的数据被统计出：相对数，表示在Y Y轴上；体积，表示在轴上；体积，表示在X X轴上。轴上。p 白细胞体积从白细胞体积从30-450fl30-450fl分为分为256256个通道，每个通道个通道，每个通道1.64fl1.64fl，依据体积大小分，依据体积大小分别放在不同通道中，得出直方图。别放在不同通道中，得出直方图。
5、第一群：小细胞群，第一群：小细胞群， 主要为淋巴，主要为淋巴， 体积体积35-90fl35-90fl第二群：中间细胞群，主要为单核，第二群：中间细胞群，主要为单核， 体积体积90-160fl90-160fl第三群：大细胞群，第三群：大细胞群， 主要为中性粒，体积可主要为中性粒，体积可160fl160flPlat和RBC共用一个孔管。u 正常人RBC体积和Plat体积有明显的界限，因此Plat计数准确容易。u 当血细胞悬液中含有异常血细胞(如小RBC）时，则划分界限不清。 为使Plat计数有较高的准确性，计算机对Plat和RBC分布图进行判断，将PlatPlat计数的上限阈值判定线放在计数的上限
6、阈值判定线放在RBCRBC和和PlatPlat分布图交叉部分的最低处计数分布图交叉部分的最低处计数。白细胞直方图白细胞直方图p 三分类血球仪一般以电阻抗原理进行三分类血球仪一般以电阻抗原理进行WBCWBC分类。分类。p 依据大多数正常形态的依据大多数正常形态的WBCWBC在溶血素作用后在溶血素作用后的大小排列，人为设置的大小排列，人为设置4 4个鉴别线，个鉴别线，将直方图分为三个区域。将直方图分为三个区域。 计数计数WBCWBC时，加入溶血素，使时，加入溶血素，使RBCRBC破坏，而破坏，而WBCWBC膜受到破坏后胞浆流失，膜受到破坏后胞浆流失，WBCWBC体体积大小发生变化。因此积大小发生变
7、化。因此，WBCWBC直方图上细胞排列顺序不是细胞的原始大小，而直方图上细胞排列顺序不是细胞的原始大小，而是经溶血液修饰后的细胞大小是经溶血液修饰后的细胞大小。电阻抗原理：血细胞非导电性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，通过检测小孔时，引起电阻的变化，从而对血细胞计数和分类加入溶血素前的细胞大小加入溶血素前的细胞大小加入溶血素后的细胞大小加入溶血素后的细胞大小一、设置鉴别线：一、设置鉴别线： 低鉴别线(LD)：自动寻找自动寻找30-60fl30-60fl之间最适位置 高鉴别线(UD)：定在定在300fl300fl，用作粒度分布异常监视 鉴别线1(T1):自动寻找自动寻找从LDUDLDUD之间
8、之间WBCWBC分布曲线的波谷分布曲线的波谷，第一波谷值设为“TROUGH”T1 鉴别线2(T2):自动寻找自动寻找从LDUDLDUD之间之间WBCWBC分布曲线的波谷分布曲线的波谷，第二波谷值设为“TROUGH”T2仪器是如何分类仪器是如何分类WBC? 报警信息列表报警信息列表WL：LD的相对度数规定值，可能 存在Plat聚集？较多巨大Plat?WU：UD的相对度数规定值，可能 溶血不充分？较多异常细胞？ T1：当第一谷值不能决定时T2：当第二谷值不能决定时F1：小WBC分布异常。T1的相对度数规定值F2：中WBC分布异常。T1或T2的相对度数规定值F3：小WBC分布异常。T2的相对度数规定
9、值2 2、监视、监视WBCWBC粒度分布的情况，提供异常分布信息粒度分布的情况，提供异常分布信息p分布正常时，直方图为三峰性分布，在LD、UD之间有两个谷值T1和T2p当各值鉴别线不能设定，或在设定的鉴别线位置的度数比规定值高时，将标有WBC粒度分布的异常报警。二、鉴别线作用：二、鉴别线作用：1 1、对正常形态的、对正常形态的WBCWBC进行粒度分类进行粒度分类 LDT1：为W-SCR%，相当于LYM% T1T2：为W-MCR%，相当于MEX%(M、E、B） T2UD：为W-LCR%，相当于NEUT%1.3. LD度数高，无度数高，无T1、T2： WBC有结果，但标有报警“WLWL”。 其余结
10、果无，报警“WLWL”。 1.1. LD度数高：度数高： 所有结果都有，但标报警“WLWL”。 常见于：存在RBC溶血不全？有核RBC？大Plat增多？Plat聚集?纤维蛋白析出？1.2. LD度数高、无度数高、无T2： WBC、L%、L#有结果，但标有报警“WLWL”。 其余结果无，报警“WLWL”。 无T2：不能设定中间细胞与中性粒细胞之间的波谷鉴别线 常见于：幼稚粒细胞？RBC溶血不全？标本放置时间过长？WL LD的相对度数规定值1.4. 黄疸病人的特征性改变：黄疸病人的特征性改变： 黄疸病人RBC膜上脂质含量增多，蛋白质含量减少，对溶血素的拮抗作用增加，RBC难于破碎WL：LD的相对度
11、数规定值2. 无无T1、无、无T2： WBC数无报警，但WBC分类结果无,且报警“T1T1” 常见于：幼稚粒细胞？RBC溶血不全？T1T1 T1相对度数规定值,第一谷值不能决定 WBC数无报警，L%、L#结果报警“F1F1”，其余结果无，且报警“T2T2” 常见于：幼稚粒细胞？M增多？E增多？B增多？RBC溶血不全？标本放置时间过长？ T2T2 T2相对度数规定值 第二谷值不能决定F1F1 T1相对度数规定值 小WBC群分布异常3.1. T1高、无高、无T2： WBC数、L%、L#无报警，其余结果无，报警“T2T2”3.2. 仅仅T1高：高： WBC数、N%、N#有结果，无报警； L%、L#结
12、果报警“F1F1”， M%、M#结果报警“F2F2”3.3. 仅仅T2高：高： WBC数、L%、L#有结果，无报警； M%、M#结果报警“F2F2”、N%、N#结果报警“F3F3” 3.4. T1、T2都高都高：WBC数报警“WUWU” ；L%、L#结果报警“F1F1”， M%、M#结果报警“F2F2” ； N%、N#报警“F3F3” 常见于：原始细胞？幼稚粒细胞？常见于：原始细胞？幼稚粒细胞？M M增多？增多？E E增多？增多？B B增多？增多？RBCRBC溶血不全？标本放置时间过长？溶血不全？标本放置时间过长？ F1F1 T1相对度数规定值 小WBC群分布异常F2F2T1或T2相对度数规定
13、值中WBC分布异常F3T2的相对度数规定值大WBC分布异常4. LD高、高、UD高：高： LD高：Plat值标有报警“AGAG” UD高：WBC报警“WUWU”,其余结果无报警 常见：溶血不充分?Plat聚集？异常细胞？WU UD的相对度数规定值小结小结一、一、“结果不输出结果不输出”原因分析：原因分析： T1负责监视淋巴区域和中间细胞区域 T2负责监视中间区域和中性粒区域 当WBC粒度分布曲线异常，仪器找不到谷底T1和/或T2时，T1、T2负责监视的细胞群结果就不输出。二、二、“WBCWBC直方图异常直方图异常”原因分析原因分析1 1、病理因素：、病理因素： 直方图的变化，可反映血液中WBC
14、群体的变化，但无特异性。引起血液学变化的病 因很多，但其直方图变化是相近的。因此，出现提示报警出现提示报警，就是给检验师命令，要求我们进行镜进行镜检复核检复核。2 2、非病理因素：、非病理因素： 1 1）仪器因素：）仪器因素：凡影响细胞脉冲信号影响细胞脉冲信号的因素，都可以使直方图发生变化血细胞自身体积、仪器的阈值、孔电压、脉冲的增益 2 2）试剂因素）试剂因素：试剂性能好坏直接影响直方图，因此，应使用配套试剂 稀释液的电导率、渗透压、离子强度 溶血剂的种类、浓度、用量、溶血时间： 抗凝剂的种类、浓度：EDTAK2 1.5-2.2mg抗凝1ml全血 3 3）样本放置时间：）样本放置时间：一般认
15、为样本采集后样本采集后2020分钟分钟2h2h内检测内检测。 过短，可能存在Plat未完全解离，抗凝剂未完全溶解等； 过长，则细胞变形，特别是免疫功能亢进的病人，其淋巴细胞容易变成异型淋巴，从而影响直方图变形。红细胞直方图红细胞直方图红细胞直方图红细胞直方图p 分析范围：36-360flp 正常正常RBCRBC主要分布在50-200fl50-200flp 直方图上可见两个细胞群： 50 - 150 fl 几乎两侧对称、较狭窄、正态分布; 125 - 200 fl 大RBC和Ret p 分类规则（按体积）： 在RLRU之间分析 RBC RLRL Plat和RBC的分界线。可反映出小小RBCRBC
16、、大、大Plat Plat 、血小板簇、血小板簇 RURU 可反映出RBCRBC聚集聚集RL与直方图交点高：与直方图交点高： 电子噪声干扰、破碎电子噪声干扰、破碎RBCRBC、大、大PlatPlat增多、增多、PlatPlat聚集聚集 MCV MCV 高高 MCHC MCHC 低低 RDW RDW 高高RU与直方图交点高与直方图交点高 DW：相对度数：相对度数20%处的鉴别线与直方图曲线交点增高处的鉴别线与直方图曲线交点增高 RURU：电子噪声干扰、冷凝集素干扰、：电子噪声干扰、冷凝集素干扰、WBCWBC极度增高极度增高DW: RBCDW: RBC明显大小不均明显大小不均 MCV MCV 高高
17、 MCHC MCHC 低低 RDWRDW无法得出无法得出RBC曲线跨度大曲线跨度大 ： 小小RBCRBC干扰干扰? ?曲线不光滑：曲线不光滑：抬尾抬尾 RDW: RDW:明显增高明显增高 Plat: Plat:报警报警PL PL PDW: PDW: 报警报警DWDW MPV: MPV: 报警报警PL PL 无法测出无法测出RBCRBC大小不均大小不均RBCRBC大小不均大小不均主峰位于主峰位于65fl: 小小RBC MCV: MCV: 低低 MCH: MCH: 低低 MCHCMCHC：低：低 RDWRDW： 轻度增高轻度增高抬尾、不与横坐标重合、浮动界标抬尾、不与横坐标重合、浮动界标PU在在2
18、0fl定位：小定位：小RBC出现出现 缺铁性贫血缺铁性贫血RBC外观无异常外观无异常双峰双峰 ： 接受贫血治疗、输血，出现多种大小的接受贫血治疗、输血，出现多种大小的RBCRBC群群 MCHC MCHC：低：低 RDW: RDW: 高高 报警报警MPMP治疗治疗2w后（输血、铁剂）：双峰后（输血、铁剂）：双峰 MCV: MCV: 低低 MCH: MCH: 低低 MCHCMCHC：低：低 RDWRDW： 高高 报警报警MPMP治疗治疗4w后：双峰，但以正常后：双峰，但以正常RBC为主为主 MCV: MCV: 低低 MCH: MCH: 低低 MCHCMCHC：低：低 RDWRDW： 高高 报警报警
19、MPMP缺铁性贫血治疗后缺铁性贫血治疗后无无T2： 出现连续体积大小的细胞出现连续体积大小的细胞 RBC : RBC : 低低 Hb: Hb: 低低 HCTHCT： 低低 MCVMCV： 高高 WBC WBC：高：高 M M: 无法得出无法得出 报警报警T2 T2 N N: 无法得出无法得出 报警报警T2 T2 曲线右移曲线右移 大细胞性贫血：大细胞性贫血： 大细胞性贫血（大细胞性贫血（CMLCML）血小板直方图血小板直方图p分析范围：2-30flp正常Plat直方图： 左偏态左偏态，主要分布在2-15fl2-15flp 3 3条鉴别线条鉴别线： 2条固定鉴别线： PL：2-6fl; PU:1
20、2-30fl 1条浮动鉴别线：12flpRBC分析范围：36-360fl p 对于和Plat大小相似的细胞大小，成为“非Plat颗粒”，包括小RBC、RBC碎片、WBC碎片、细菌、真菌、免疫复合物，误认为Plat，使得假性增高假性增高；p 对于聚集的Plat因体积增大，而不归类为Plat，使得假性减低假性减低 PU Plat和RBC的分界线。可反映出 小小RBCRBC、大、大Plat Plat 、血小板簇、血小板簇报警报警PL:LD 相对度数超过设定值相对度数超过设定值 Plat: Plat: 报警报警PLPL PDW: PDW: 报警报警PLPL MPV: MPV: 报警报警PLPL P-L
21、CR P-LCR：报警：报警PL PL 低低存在电子噪声、冷凝蛋白、破碎存在电子噪声、冷凝蛋白、破碎RBCRBC、白血病性、白血病性WBCWBC碎片等的干扰碎片等的干扰报警报警PU: UD 相对度数超过设定值相对度数超过设定值 Plat: Plat: 报警报警PUPU PDW: PDW: 报警报警DW DW 无法得出无法得出 MPV: MPV: 报警报警PU PU 无法得出无法得出 P-LCRP-LCR：报警：报警PU PU 无法得出无法得出存在电子噪声、冷凝蛋白、破碎存在电子噪声、冷凝蛋白、破碎RBCRBC、小、小RBCRBC、大、大PlatPlat、PlatPlat聚集等聚集等报警报警DW: 峰值高度峰值高度20%度数处，粒度分布宽度异常度数处，粒度分布宽度异常破碎破碎RBCRBC、PlatPlat大小不均、冷凝蛋白大小不均、冷凝蛋白报警报警MP: 2个以上峰个以上峰 PDW: PDW: 报警报警MP MP 无法得出无法得出 MPV: MPV: 报警报警MP MP 无法得出无法得出 P-LCRP-LCR：报警：报警MP MP 无法得出无法得出PlatPlat聚集、聚集、PlatPlat值过低值过低
