1、QQ2(R1) 分析方法的验证Q目录1.概述为什么要进行分析方法的验证？为什么要进行分析方法的验证？保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原 则，其中，对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。为 达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说 要对药品进行多个项目测试，来全面考察药品质量。一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证， 以充分表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对 方法进行验证。1.概述为什么要进行分析方法的验证？为什么要进行分析方法的验证？
2、方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有 效控制药品的内在质量。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要 求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的 分析方法能否符合检测项目的要求。方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质 量，因此方法验证是制订质量标准的基础。2. 分析方法验证：正文2.1 引言引言本指导原则讨论了在欧盟、日本和美国提交的新药注册申请资料 中分析方法验证这一部分需要考虑的特性。本指导原则不一定涵盖在世界其他地区的药品的注册或出口所要 求的验证。分析方法验证的目
3、的是为了证明该分析方法与其预期目的相适应。2.2 需要验证的分析方法类型需要验证的分析方法类型鉴别试验 杂质定量试验 杂质限度试验原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分的含量测定2. 分析方法验证：正文2.3 典型的验证参数典型的验证参数 准确性（Accuracy） 精密度（Precision）重复性（Repeatability）中间精密度（Intermediate Precision）专属性（Specificity）2. 分析方法验证：正文检测限（Detection Limit） 定量限（Quantitaion Limit） 线性（Linearity） 范围（Range）注意：- 表示该项
4、目通常不 需要评价；+ 表示 该项目需要评价；(1) 假如已评价重现 性，可不需要再评 价中间精密度；(2) 缺乏专属性的分析方法，应由其他 分析方法来作补充; (3) 某些情况下可能 需要；2.4 下列情况需要重新验证：下列情况需要重新验证：原料药合成方法的改变 制剂组分的改变 分析方法的改变需要重新验证的程度应根据改变的情况而定，某些其他的改变可能也要求验证。2. 分析方法验证：正文2.5 术语表术语表分析方法（Analytical procedure） 分析方法指的是进行分析的方式，应详细描述进行每个分析试验所必需的步骤。它包括（但不限于）：样品、参比物、试剂的制备、仪器的 使用、标准曲
5、线的绘制、计算公式的运用等。准确性（Accuracy）准确性指的是真实值或认可的参考值与测量值之间的相近程度。 准确性有时也称为真实度。2. 分析方法验证：正文2.5 术语表术语表专属性（Specificity）专属性是指在一些可能存在的组分如杂质、降解产物、基质等的存在下，对被分析物质的准确可靠的测定。 一种分析方法缺乏专属性时，应由其他分析方法作补充。 专属性有以下含义：（1）定性鉴别（2）纯度检查（3）含量测定（含量或效价）2. 分析方法验证：正文2.5 术语表术语表精密度（Precision）精密度指的是规定条件下对同一均质样品多次取样进行一系列检测结果的一致程度（离散程度）。精密度可
6、以从三方面考虑：重复性、中间精密度、 重现性。精密度考察应使用均质的、可信的样品。如果得不到，可用人为配制的样品或样品溶液进行研究。分析方法的精密度通常以多次测量结果的 方差、 标 准 偏 差 或 变 异 系 数 表示。2. 分析方法验证：正文2.5 术语表术语表精密度（Precision）重复性（Repeatability） 是 指在相同的操作条件下，在较短时间间隔内 的精密度。重复性也叫批内分析精密度。中间精密度（IntermediatePrecision）是指实验室内部条件改变，如不同日、不同操作人、不同仪器等情况下的精密度。重现性（Reproducibility）是指不同实验室之间的精
7、密度（合作研究， 通常用于方法学的标准化）。2. 分析方法验证：正文2.5 术语表术语表检测限（Detection Limit） 某一分析方法的检测限是指样品中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。定量限（Quantitation Limit）某一分析方法的定量限是指在合适的准确度和精密度下，能够定量测定样 品中被分析物的最低量。它是样品中含量低的化合物定量测定的参数，特别 适用于杂质和/或降解产物的测定。2. 分析方法验证：正文2.5 术语表术语表线性（Linearity）分析方法的线性是指在给定的范围内检测结果与样品中被分析物的浓度（量）成比例关系的能力。 范围（Range）
8、分析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度和较低浓度之间的一个区间，并已证实在此区间内，该方法具有合适的准确性、精密度和线性。 耐用性（Robustness） 分析方法的耐用性是指在故意对分析方法的参数进行微小变化后，方法仍能保持不受影响的能力，用于说明方法在正常使用时的可靠性。2. 分析方法验证：正文3. 分析方法验证：方法学3.1 引言引言目的：对每一种分析方法中参数的验证提供指导和建议。 申报中建立数据的表示方式。注意：在整个方法学验证中，必须采用经过完全确认的、纯度已知的参比物质来验证。参比物质的纯度要求与使用目的应一致。3. 分析方法验证：方法学3.2 专属性专属性鉴别通过与参比物
9、（结构相同）比较得到阳性/阴性结果。 通过与被测物结构相似或相关物质比较得不到阳性结果。含量测定和杂质检查色谱方法 使用具有代表性的色谱图来证明专属性（标出每一成分）分离度专属性的标准非专属性方法 使用其他支持性分析方法来辅助证明专属性3. 分析方法验证：方法学3.2 专属性专属性非专属性方法 含量测定和杂质试验的方法是类似的：1）可得到杂质 用加入法；2）得不到杂质 可以通过比较包含杂质或降解产物的样品的测试结 果和另一个性能良好的分析方法，如药典方法或其他有效的分析方法（单 独的方法）对于含量测定，应该比较这两种结果；对于杂质试验，应该比较杂质的图形；3. 分析方法验证：方法学3.3 线性
10、线性应该在分析方法的范围内评价线性关系。可以用指定的方法，直接证 明原料药（通过标准溶液的稀释液）的线性和/或混匀的制剂组分各自所 占的比例来证明其线性。线性应该可通过被测物浓度或含量的信号图作出直观评价。如果存在线性关系，测试结果应该通过合适的统计方法来评价。原料药（标准储备液）/混匀的制剂组方至少5个浓度系列测定采集信号统计（线性关系或函数关系）3. 分析方法验证：方法学3.4 范围范围范围通常是从线性研究得出的，并取决于分析方法预定的应用。 通过验证分析方法提供的线性、准确度和精密度的可接受度建立范围。最小的规定范围对原料药或制剂的含量测定 通常是测试浓度的80%120%对于含量均匀度
11、70%130%对于溶出度 规定值的20%3. 分析方法验证：方法学3.4 范围范围最小的规定范围 对于杂质检查 为报告的杂质水平至所订限度的120%对于产生毒性或无预期药理作用的杂质 制的水平相当检测/定量限应该与杂质控如果含量和纯度测试作为一个试验进行，且只有用到一个100%的标准品，线性应该覆盖从杂质报告水平到含量分析规格的120%3. 分析方法验证：方法学3.5 准确度准确度在含量测定中原料药用分析方法测定已知纯度的被测物将该法与另一成熟方法比较，得到的准确度进行统计和/或定义 从已经建立的精密度、线性和专属性项中推导准确度制剂用分析方法测定已加入已知量的 待分析物的药物制剂组分的混合物
12、 在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较，得到的准确度进行统计和/或定义 从已经建立的精密度、线性和专属性项中推导准确度3. 分析方法验证：方法学3.5 准确度准确度在杂质的定量测定中 用已知量的杂质加入样品中（原料药/制剂）来评价准确度。 在不能获得某种杂质/降解产物的情况下，与采用其他方法测得的结果比较，可以使用原料的响应值申报数据准确度的评价需在指定范围内至少3个浓度水平上进行至少9次测 定，例如用总分析方法测定3个浓度，每个浓度3个重复样品3. 分析方法验证：方法学3.6 精密度精密度重复性在指定范围内测9次（3种浓度/每种重复3次） 在100%的测定浓度时测6次中间精密度 确定随
13、机事件（日期、分析者、仪器等）对分析方法的精密度的影响重现性通过实验室之间试验的方式来评价申报数据应该给出所考察的精密度的标准偏差、相对标准偏差（变异系数）和置信区间3. 分析方法验证：方法学3.7 检测限检测限根据目测评价（用于仪器/非仪器） 通过分析加入已知浓度的分析物的样品并通过检测分析物的最小水平来确定检测限。根据信噪比（只适用于表现出基线噪音的分析方法）信噪比的测定，是通过比较测得的已知低浓度的样品信号与空白样品 的信号，建立能够监测到被测物的最低浓度所得到的。 已知低浓度被测物的信 号 3 或 2空白样品的信号113. 分析方法验证：方法学3.7 检测限检测限根据响应值的标准偏差或
14、斜率 检测限（LoD）可以表达成：LoD = 3.3/S为响应值的标准偏差（通过空白样品测背景响应值或Y轴截距）S为标准曲线的斜率（通过被测物的校正曲线求得）申报数据 应提供检测限和用于确定检测限的方法。3. 分析方法验证：方法学3.8 定量限定量限根据目测评价（用于仪器/非仪器）通过分析加入已知浓度的分析物的样品并通过检测分析物的最小水平来确定定量限。 根据信噪比（只适用于表现出基线噪音的分析方法）信噪比的测定，是通过比较测得的已知低浓度的样品信号与空白样品 的信号，建立能够监测到被测物的最低浓度所得到的。 已 知 低 浓 度 被 测 物 的 信号 10空白样品的信号 13. 分析方法验证：
15、方法学3.8 定量限定量限根据响应值的标准偏差或斜率 定量限（LoQ）可以表达成：LoQ = 10/S为响应值的标准偏差（通过一组空白样品的分析或根据校正曲线）S为标准曲线的斜率（通过被测物的校正曲线求得）申报数据 应提供定量限和用于确定定量限的方法3. 分析方法验证：方法学3.9 耐用性耐用性对于方法参数的有意变动，分析方法应该表现为可靠稳定。 典型例子供试液的稳定性提取时间 在HPLC中的典型例子流动相pH的变化 流动相组分的变化柱温 流速不同色谱柱（不同批号/或不同生产厂家）3. 分析方法验证：方法学3.9 耐用性耐用性在GC中的典型例子不同色谱柱（不同批号/或不同生产厂家） 柱温流速如
16、分析方法对分析参数的变化是敏感的，则该分析参数就应适当控制或在方法中注明。耐用性的结果应该是建立一系列系统适应性参数（例 如，分辨率测试），以确保分析方法的有效性在任何时候得到维持。3. 分析方法验证：方法学3.10 系统适用性试验系统适用性试验是许多分析方法必不可少的一部分。 其概念是对分析方法和参数进行验证以保证系统（仪器、数据工作站和分析操作要点和分析的控制点）能在使用时作为一个整体正确运 行。建立的用于特定分析方法的系统适用性参数取决于要验证的方法类型，请查阅药典以获取更多信息。4. 国内有关指导原则化学药物质量控制分析方法验证化学药物质量控制分析方法验证技技术指术指导导原则原则200
17、7年CDE颁布 由于生物制品和中药的特殊性，本原则主要适用于化学药品。 本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析方法验证的要求与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐述，重点阐述如何科学合理地进行 论证方案的设计。本指导原则主要包括方法验证的一般原则、方法验证涉及的三个主要方 面、方法验证的具体内容、方法再验证、对方法验证的评价等内容。4. 国内有关指导原则4.1 方法验证的一般原则方法验证的一般原则 原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。 方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。 同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。例如，采用高效液
18、相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前 者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限。4. 国内有关指导原则4.2 方法验证涉及的三个主要方面方法验证涉及的三个主要方面需要验证的检测项目鉴别杂质检查（限度试验、定量试验）定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）：由于此类项目对准确性要求 较高，故所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性。其他特定检测项目：包括粒径分布、旋光度、分子量分布等4. 国内有关指导原则4.2 方法验证涉及的三个主要方面方法验证涉及的三个主要方面分析方法本指导原则所指分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建立的测试方 法
19、，一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、系统适用性试验、供 试品溶液制备、对照品溶液制备、测定、计算及测试结果的报告等。测试方法可采用化学分析方法和仪器分析方法。这些方法各有特点，同一测试方法可用于不同的检测项目，但验证内容可不相同。 验证内容：包括方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性和系统适用性等。4. 国内有关指导原则4.3 方法再验证方法再验证在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂处方改变、分析方法发生部 分改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分验证，以保证分析方法 可靠，这一过程称为方法再验证。再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。 方法
20、再验证是对分析方法的完善过程，应根据实际改变情况进行再验证，从而保证所采用的分析方法能够控制药品的内在质量。4. 国内有关指导原则4.3 方法再验证方法再验证当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。当制剂的处方组成改变、辅料变更时，可能会影响鉴别的专属性、溶出度 和含量测定的准确度，因此需要对鉴别、含量测定方法再验证。当原料药产 地来源发生变更时，可能会影响杂质检查和含量测定的专属性和准确度，因 此需要对杂质检查方法和含量测定方法进行再验证。4. 国内
21、有关指导原则4.3 方法再验证方法再验证当质量标准中某一项目分析方法发生部分改变时，如采用高效液相色谱法测定含量时，检测波长发生改变，则需要重新进行检测限、专属性、准确度、精密度、线性等内容的验证，证明修订后分析方法的合理性、可行性。同样，已有国家标准的药品质量研究中，基于申报的原料药合成工艺、制 剂处方中的辅料等一般无法保证与已上市药品的一致性，需对质量标准中部 分项目进行方法的再验证。4. 国内有关指导原则4.4 对方法验证的评价对方法验证的评价有关方法验证评价的一般考虑并非每个检测项目的分析方法都需进行所有内容的验证，但同时也要注意 验证内容应充分，足以证明采用的分析方法的合理性。如杂质
22、限度试验一般 需要验证专属性和检测限，而对于精密度、线性、定量限等涉及定量测定的 项目，则一般不需要进行验证。方法验证的整体性和系统性 方法验证内容之间相互关联，是一个整体。因此不论从研发角度还是评价角度，方法验证均注重整体性和系统性。总结分析方法验证：正文分析方法验证：正文要验证的分析方法的类型、典型的验证参数、术语分析方法验证：方法学分析方法验证：方法学对每一种分析方法中参数的验证提供指导和建议（专属性、线性、范围、准确性、精密度、检测限、定量限、耐用性、系统适用性试验）对验证中的所有相关数据和参数验证的计算公式的申报提供指导化学药物质量控制分析方法验证技术指导原化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则则方法验证的一般原则、方法验证涉及的三个主要方面、方 法验证的具体内容、方法再验证、对方法验证的评价等内容。谢谢你的观看谢谢你的观看
