1、专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用砧板上的微生物砧板上的微生物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单, ,个体多数十分微小个体多数十分微小. .通常要用通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构胞结构. .且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素. .不能进行光合作用不能进行光合作用. .微生物包括五类：微生物包括五类：真菌真菌原生动物原生动物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物的基础知识微生物的基础知识是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称是一切肉眼看不见或看
2、不清楚的微小生物的总称HIV病毒病毒整合酶的功能是将病毒整合酶的功能是将病毒DNA整合到宿主细胞染色体中整合到宿主细胞染色体中 1 1、病毒的结构、病毒的结构病毒病毒结构结构核酸核酸(DNA或或RNA)衣壳衣壳(蛋白质蛋白质)；由衣壳粒构成；由衣壳粒构成核衣壳核衣壳囊囊 膜膜( (有的病毒具有有的病毒具有) )由蛋白质、多糖和脂类构成由蛋白质、多糖和脂类构成,上常有刺突；如流感病毒上常有刺突；如流感病毒.衣壳衣壳化学组成化学组成形态单位形态单位功能功能排列方式排列方式由蛋白质构成由蛋白质构成衣壳粒衣壳粒通常由通常由1-6个多个多肽分子组成肽分子组成保护核酸保护核酸决定抗原特异性决定抗原特异性使
3、病毒呈现不同的形态使病毒呈现不同的形态2 2、病毒的增殖、病毒的增殖只能在宿主的只能在宿主的活细胞活细胞中进行中进行SARS冠状病毒、冠状病毒、 禽流感病禽流感病毒毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）目前发现的唯一不用目前发现的唯一不用DNA，RNA作遗传物质的病毒。作遗传物质的病毒。1 1、细菌的形态：球形、杆形、螺旋形。、细菌的形态：球形、杆形、螺旋形。螺旋菌螺旋菌球菌球菌杆菌杆菌2 2、细菌的结构、细菌的结构所有的细菌所共有的基本结构有哪些？所有的细菌所共有的基本结构有哪些？某些细菌所具有的特殊结构有哪些？某些细菌所具有的特殊结构有哪些？（拟核）（拟核）基本结构基本结构特殊结构特殊
4、结构* *细胞壁细胞壁n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素结构结构化学本质化学本质功能或应用功能或应用细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜细细胞胞质质基质基质核糖体核糖体质粒质粒贮藏性贮藏性颗粒颗粒拟核拟核主要是肽聚糖主要是肽聚糖保护和维持细胞形状等保护和维持细胞形状等同真核生物同真核生物同真核生物同真核生物多种成分多种成分新陈代谢的主要场所新陈代谢的主要场所小型小型DNA分子分子同真核生物同真核生物同真核生物同真核生物控制细菌的抗药性、控制细菌的抗药性、固氮、抗生素生成固氮、抗生素生成多种成分多种成分贮藏营养物质或代谢废贮藏营养物质或代谢废物，如淀粉粒、
5、硫粒物，如淀粉粒、硫粒大型环型大型环型DNA 控制细菌主要遗传性状控制细菌主要遗传性状特殊的结构特殊的结构荚膜荚膜 主要成分为多糖，与其致病性有关。主要成分为多糖，与其致病性有关。芽孢芽孢 细菌生长到一定阶段产生的一种抗逆细菌生长到一定阶段产生的一种抗逆 性很强的性很强的休眠体休眠体, ,以度过不良的环境以度过不良的环境。荚膜、鞭毛、芽孢荚膜、鞭毛、芽孢 一般说，芽孢不起繁一般说，芽孢不起繁殖作用，只起度过不良环殖作用，只起度过不良环境的作用，芽孢对干旱、境的作用，芽孢对干旱、低温、高温、紫外线和许低温、高温、紫外线和许多有毒化学物质有很强的多有毒化学物质有很强的抗性。抗性。例如，有的细菌的例
6、如，有的细菌的芽孢，煮沸芽孢，煮沸3 3小时以后才死小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌形成一个细菌. . 细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据细菌所利用的根据细菌所利用的能源和碳源能源和碳源的不同，的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌自养菌: :分类分类, ,举例举例? ?异养菌异养菌: :腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌光合自养型光合自养型:光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细
7、菌硫细菌同化作用同化作用依靠分解动植物的遗体（尸体、粪便和枯枝落依靠分解动植物的遗体（尸体、粪便和枯枝落叶），从中吸取有机物来生活。例如枯草杆菌，叶），从中吸取有机物来生活。例如枯草杆菌，它可以引起食物的腐败。它可以引起食物的腐败。从活的动植物体内吸取有机物来生活。例如寄从活的动植物体内吸取有机物来生活。例如寄生在肠道内的痢疾杆菌，它能够引起细菌性痢生在肠道内的痢疾杆菌，它能够引起细菌性痢疾疾需氧型：需氧型：好氧性细菌。如：枯草杆菌、硝化细菌、铁好氧性细菌。如：枯草杆菌、硝化细菌、铁细菌、根细菌、根 瘤菌等瘤菌等。厌氧型：厌氧型：厌氧性细菌。如：破伤风杆菌，大肠杆菌，厌氧性细菌。如：破伤风杆菌
8、，大肠杆菌，乳酸菌等。乳酸菌等。 异养需氧型异养需氧型 异养厌氧型异养厌氧型 自养需氧型自养需氧型 自养厌氧型自养厌氧型问问 ： 细菌的代谢类型属于什么方式细菌的代谢类型属于什么方式? 在生态系统中处于什么地位在生态系统中处于什么地位?分解者或消费者分解者或消费者生产者生产者异化作用异化作用3 3、细菌的繁殖、细菌的繁殖 二分裂二分裂2020分钟分钟3030分钟，分裂一次分钟，分裂一次菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫
9、做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。问：菌落在生态学问：菌落在生态学上属于什么单位？上属于什么单位？菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 无鞭毛的无鞭毛的球菌：球菌：菌落菌落较小较厚、较小较厚、边缘整齐边缘整齐. . 有鞭毛的有鞭毛的细菌：细菌：菌落菌落大而扁平、大而扁平、边缘波状或边缘波状或锯齿状锯齿状. .问：菌落在生态学问：菌落在生态学上属于什么单位？上属于什么单位？1 1、结构：、结构：单细胞原核生物单细胞原核生物分支状的菌丝分支状的菌丝基内菌丝基内菌丝( (营养菌丝营养菌丝)吸收吸收现成的有机物现成的有机物( (大多营腐生大多营腐生生活生活) )
10、气生菌丝气生菌丝到一定阶段分到一定阶段分化成化成孢子丝孢子丝，上有成串的孢，上有成串的孢子。子。2 2、放线菌的生殖、放线菌的生殖孢子生殖孢子生殖70%70%以上的天然抗生素均由土壤放线菌产生。以上的天然抗生素均由土壤放线菌产生。 如头孢拉定、链霉素、金霉素、土霉素、庆大霉素、春雷霉素、如头孢拉定、链霉素、金霉素、土霉素、庆大霉素、春雷霉素、四环素、红霉素和卡那霉素等。四环素、红霉素和卡那霉素等。3、应用、应用四、真菌四、真菌单细胞或多细胞，有细胞壁（成分主单细胞或多细胞，有细胞壁（成分主要是几丁质），无叶绿体，异养型要是几丁质），无叶绿体，异养型（腐生或寄生）（腐生或寄生）酵母菌电子显微镜下
11、的酵母菌电子显微镜下的形态结构形态结构酵母菌酵母菌生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝孢子生殖孢子生殖类群类群结构特点结构特点遗传物质遗传物质繁殖方式繁殖方式举例举例病毒病毒原核原核生物界生物界真菌界真菌界原生原生生物界生物界无细胞结构无细胞结构(核酸衣壳囊膜核酸衣壳囊膜)原核原核(细胞壁、细胞壁、膜、质膜、质)真核真核(细胞壁、细胞壁、膜、质、核膜、质、核)真核真核(细胞膜、细胞膜、质、核质、核)噬菌体噬菌体烟草花叶病毒烟草花叶病毒流感病毒流感病毒细菌细菌(形状菌形状菌)放线菌放线菌霉菌、蘑菇、霉菌、蘑菇、酵母菌酵母菌衣藻、草履衣藻、草履虫、变形虫虫、变形虫DNA或或RNADNADNA
12、DNA增殖：吸附增殖：吸附注入注入合成合成装配装配释放释放分裂生殖分裂生殖(二分裂二分裂)孢子生殖孢子生殖出芽生殖出芽生殖分裂生殖分裂生殖有性生殖有性生殖一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培固体培养基养基和和液体培养基液体培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途液体培养基：增菌、工业生产液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：在固体培养基中加入
13、凝固固体培养基：在固体培养基中加入凝固剂（琼脂）制成。剂（琼脂）制成。用于纯化（分离），鉴定、活菌计数、用于纯化（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种保藏菌种微生物在固体培养基表面生长，可以形微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落成肉眼可见的菌落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) )（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。按功能不同按功能不同选择培养基：选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其根据某种微生物的特殊营
14、养要求或其对化学、物理因素的抗性而设计的培对化学、物理因素的抗性而设计的培养基。养基。鉴别培养基：鉴别培养基：培养基中加有能与某一菌的无色代谢培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌菌落与外形相似的其肉眼就能使该菌菌落与外形相似的其他菌落相区分的培养基叫他菌落相区分的培养基叫。n加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: :n 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌n加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : n 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌n不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : n 分离固氮菌分
15、离固氮菌n不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : n 分离自养型微生物分离自养型微生物（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。n 天然培养基有血清、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚天然培养基有血清、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限; ;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析结果的分析; ;易发生支原体污染易发生支原体污染; ; 合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量
16、，合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。无机盐和其它一些辅助物质。 优点：优点：标准化生产，组分和含量相对固定标准化生产，组分和含量相对固定; ;成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 2.2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3. 3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳
17、源碳源、和、和氮氮源源、 无机盐无机盐等等营养物质，另外还需要满足微生物营养物质，另外还需要满足微生物生长对生长对pHpH、特殊营养物质以及氧气的要求特殊营养物质以及氧气的要求水水作用：作用： 优良的溶剂优良的溶剂 可维持生物大分子结构的稳定，并参可维持生物大分子结构的稳定，并参与某些重要的生物化学反应与某些重要的生物化学反应（二）微生物的营养（二）微生物的营养碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐生长因子生长因子（特殊营养物质）（特殊营养物质）（三）无菌技术（三）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所
18、有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。 （）（）消毒定义：消毒定义：2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：利用较为温和的化学或物理方法，杀死物利用较为温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部大部份微生物的过程体表面或内部大部份微生物的过程以强烈的理化因素消灭以强烈的理化因素消灭所有所有微生物，包括所有细微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无完全无菌菌之过程之过程3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法n煮沸消毒法煮沸消毒法:100
19、100煮沸煮沸5-6min5-6minn巴氏消毒法：巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15minn化学药剂消毒法化学药剂消毒法: :用用75%75%酒精、新洁尔灭等进酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒行皮肤消毒; ;氯气消毒水源氯气消毒水源n紫外线消毒紫外线消毒n灭菌方法灭菌方法要求要求适用范围适用范围灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 160170 12h100kPa 121 15-30min接种环的接种环的灭菌灭菌培养皿、玻璃培养皿、玻璃棒的灭菌棒的灭菌培养基、无菌培养基、无菌水的灭菌水的灭菌1.1.无菌技术
20、除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（
21、3）需要消毒。）需要消毒。1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存三、实验操作三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以
22、免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤 8 8灭菌灭菌: : 将将5050mlml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将培养基用旧报纸包裹，放入干将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌
23、2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）近倒平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种. . 10 10无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划
24、线法连续划线法连续划线法 平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作
25、的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染
26、环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。 2. 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3. 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线条划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数的增加
27、而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。等。 1 1、临时保藏：
28、、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小
29、基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变
30、化。这一步的要求主要是培养学生到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。良好的科学态度与习惯。本课题知识小结本课题知识小结: :【典例解析典例解析】 例例1 1关于微生物营养物质的叙述中，正确的关于微生物营养物质的叙述中，正确的A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于
31、针对微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如同时是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；可作为自养型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可作为自养
32、型微，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于DD选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NHNH3 3可为硝可为硝化细菌提供能量和氮源。化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生
33、物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。全部微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有设备是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接
34、种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。所接菌种也杀死。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型的微生物类型是是 。（2 2）若不
35、慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 . .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 （3 3）若除去成分，加入）若除去成分，加入（CH2OCH2O），该培养基可用），该培养基可用于培养于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要种成分都溶化后分装前，要进行的是进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定）右表中各成分重量确定的原则的原则是是 。（7 7）若右表培养基用于菌种）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加
36、的成鉴定，应该增加的成分分 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂） 编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml 了解有关微生物及培养基的基础知识，了解有关微生物及培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。
37、 一、课题目标：一、课题目标： 掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平平板划线法板划线法等基本操作技术，熟练、规范地等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。进行无菌操作，成功地培养微生物。 无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标： 1. 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥
38、形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。
