1、项目四项目四发酵灭菌发酵灭菌学习目标知识目标知识目标1. 知道发酵行业常用灭菌的原理和方法。知道发酵行业常用灭菌的原理和方法。2. 知道无菌空气的质量要求。知道无菌空气的质量要求。3. 能陈述培养基灭菌的常用方法。能陈述培养基灭菌的常用方法。4. 能陈述影响培养基灭菌的主要因素。能陈述影响培养基灭菌的主要因素。5. 能陈述空气的除菌原理、流程和常用的方法；能陈述空气的除菌原理、流程和常用的方法；技能目标技能目标1. 能够按照培养基灭菌工艺，进行操作和控制。能够按照培养基灭菌工艺，进行操作和控制。2. 能根据生产工艺需求，选择合理的空气净化设备。能根据生产工艺需求，选择合理的空气净化设备。3.
2、能认识发酵罐中主要部件，清楚它们的作用，进行能认识发酵罐中主要部件，清楚它们的作用，进行实罐灭菌。实罐灭菌。请大家思考：假如你是某单位化验室的检验员，进行微假如你是某单位化验室的检验员，进行微生物检验时，不知什么原因培养基已受到生物检验时，不知什么原因培养基已受到污染，你并不知道，继续进行检验操作时，污染，你并不知道，继续进行检验操作时，结果将如何？结果将如何？有哪些原因导致污染？有哪些原因导致污染？如何避免？如何避免？在发酵生产中，为什么要进行灭菌操作？1、由于杂菌的污染，使生物反应中的基质或产物因杂菌的消、由于杂菌的污染，使生物反应中的基质或产物因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降；耗而
3、损失，造成生产能力的下降； 2、由于杂菌所产生的一些代谢产物，或在染菌后改变了培养、由于杂菌所产生的一些代谢产物，或在染菌后改变了培养液的某些理化性质，使产物的提取和分离变得困难，造成收率液的某些理化性质，使产物的提取和分离变得困难，造成收率降低或使产品的质量下降；降低或使产品的质量下降；3、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的PH值，从而使生物反值，从而使生物反应发生异常变化；应发生异常变化；4、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败；、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败；5、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，而使生产失败、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，
4、而使生产失败.为防止杂菌的污染，哪些需要灭菌？为防止杂菌的污染，哪些需要灭菌？培养基、发酵设备、空气、菌种制作培养基、发酵设备、空气、菌种制作背景资料背景资料（一）概念:灭菌、消毒、除菌、防腐灭菌灭菌:用化学或物理方法杀死物料或设备中所有用化学或物理方法杀死物料或设备中所有微生物的过程。包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。微生物的过程。包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。消毒消毒:用物理或化学方法杀死空气、地表以及容用物理或化学方法杀死空气、地表以及容器和器具表面的病源微生物。一般只能杀死营养器和器具表面的病源微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。细胞而不能杀死细菌芽孢。 除菌除菌: 用过滤方法
5、除去空气或液体中的微生物及用过滤方法除去空气或液体中的微生物及其孢子。其孢子。 防腐防腐: 用物理或化学方法抑制微生物的生长和繁用物理或化学方法抑制微生物的生长和繁殖殖 。（低温、高渗。（低温、高渗 、缺氧、缺氧 、高酸度、高酸度 、干燥、干燥、防腐剂）防腐剂）（二）灭菌方法1、化学试剂灭菌法、化学试剂灭菌法 适用范围：环境空气、皮肤及器械的表面消毒适用范围：环境空气、皮肤及器械的表面消毒2、射线灭菌法、射线灭菌法 适用范围：无菌室、接种箱适用范围：无菌室、接种箱 3、干热灭菌法、干热灭菌法 适用范围：金属或玻璃器皿适用范围：金属或玻璃器皿4、湿热灭菌法、湿热灭菌法 适用范围：广泛应用于生产设
6、备及培养基的灭菌适用范围：广泛应用于生产设备及培养基的灭菌5、过滤除菌法、过滤除菌法 利用过滤方法阻留微生物利用过滤方法阻留微生物 适用范围：制备无菌空气适用范围：制备无菌空气 （三）湿热灭菌原理1.热阻（耐热性）热阻（耐热性）热死时间：热死时间：即在规定温度下杀死一定比例的微生物即在规定温度下杀死一定比例的微生物所需要的时间。所需要的时间。致死温度：致死温度：杀死微生物的极限温度。杀死微生物的极限温度。致死时间：致死时间：在此温度下，杀死全部微生物所需要的在此温度下，杀死全部微生物所需要的时间。时间。热热 阻：阻：对热的抵抗力，指微生物在某一特定条对热的抵抗力，指微生物在某一特定条件（主要是
7、温度和加热方式）下的致死时间。件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻：相对热阻：指微生物在某一特定条件下的致死时间指微生物在某一特定条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。2. 微生物热死定律：对数残留定律微生物热死定律：对数残留定律在一定温度下，微生物在一定温度下，微生物受热致死受热致死遵循分子反应速度理论，遵循分子反应速度理论，微生微生物受热死亡的速率物受热死亡的速率-dN/dt与任何瞬间残留的活菌数与任何瞬间残留的活菌数N成正比成正比，即，即 灭菌时间取决于培养基中所含的原始微生物数（灭菌时间取决于培养基中所含的原始微
8、生物数（No），灭菌），灭菌的程度（的程度（Nt）和）和k值。值。 当当Nt=0时，时， t=， 既无意义，也不可能。既无意义，也不可能。 一般采用一般采用Nt=0.001，即，即1000次灭菌中只有一次失败。次灭菌中只有一次失败。 ktNNt0lnkNdtdNtNNkt0log/303. 2比热死速率常数k k，热阻, t 灭菌速度常数灭菌速度常数K是判断微生物受热死亡难易程度是判断微生物受热死亡难易程度的基本依据。各种微生物在同样的温度下的基本依据。各种微生物在同样的温度下K值是值是不同的，不同的，K值愈小，则此微生物愈耐热。值愈小，则此微生物愈耐热。10t (min)N/N0嗜热脂肪芽孢
9、杆菌芽孢在不同温度下的死亡曲线10-110-210-310-451015202512111611010810510t (min)N/N0大肠杆菌在不同温度下的死亡曲线10-110-210-310-424681060585654（四）发酵设备简介（四）发酵设备简介 发酵罐指工业上用于培发酵罐指工业上用于培养微生物或细胞的封闭养微生物或细胞的封闭容器或生物反应装置。容器或生物反应装置。机械搅拌通风发酵罐主机械搅拌通风发酵罐主要有罐体、搅拌器、挡要有罐体、搅拌器、挡板、轴封、空气分布器、板、轴封、空气分布器、传动装置、冷却管、消传动装置、冷却管、消泡器、人孔、视镜等。泡器、人孔、视镜等。 任务一任务
10、一 培养基和发酵设备的灭菌培养基和发酵设备的灭菌一、一、灭菌温度和时间的选择灭菌温度和时间的选择 （1）灭菌温度：）灭菌温度： 速率常数与速率常数与T有关，这可用阿累尼乌斯方程有关，这可用阿累尼乌斯方程来表示：来表示： KA*eE/RTA：比例常数；：比例常数；E：杀死微生物所需的活化能；：杀死微生物所需的活化能；R：气体常数：气体常数A、E值视菌种而异，值视菌种而异， A1.341.36，一般，一般杀死微生物的营养体的杀死微生物的营养体的E200-270kj/mol，芽孢芽孢E400kj/mol，R1.987卡卡/Kmol。K是判断微生物受热死亡难易程度的基本依据。是判断微生物受热死亡难易程
11、度的基本依据。K值越小，说明微生物的热阻越大。值越小，说明微生物的热阻越大。灭菌温度和时间的选择灭菌温度和时间的选择（2）对营养成分）对营养成分由于大部分培养基受热的破坏为一级分解反应：由于大部分培养基受热的破坏为一级分解反应：dC/dtKC（3）反应物浓度）反应物浓度同样同样KA. eE/RT当温度从当温度从T1升至升至T2，灭菌速度常数，灭菌速度常数K和培养基和培养基成分破坏的速度常数成分破坏的速度常数K的变化情况：的变化情况：K1A.e E/RT1K2A.e E/RT2灭菌温度和时间的选择灭菌温度和时间的选择（lnk2/k1）/（lnk2/k1）= E/E由于灭菌时间的活化能由于灭菌时间
12、的活化能E培养基成分破坏的活培养基成分破坏的活化能化能E，所以：，所以：lnK2/K1 lnK2/K1，即随即随T升高，灭菌速率常数的增加倍数升高，灭菌速率常数的增加倍数培养基培养基成分破坏的速率常数的倍加倍数。成分破坏的速率常数的倍加倍数。结论结论：在热灭菌过程中，同时产生微生物死亡和培养基在热灭菌过程中，同时产生微生物死亡和培养基破坏两个过，温度升高，两分过程的速率都升高，破坏两个过，温度升高，两分过程的速率都升高，但其中微生物死亡速率随但其中微生物死亡速率随T升高更为显著。因此，升高更为显著。因此，我们在灭菌时选择较高温度，较短时间，以减少我们在灭菌时选择较高温度，较短时间，以减少培养基
13、的破坏，这就是通常所说的培养基的破坏，这就是通常所说的“高温瞬时灭高温瞬时灭菌法菌法”。灭菌时间的计算灭菌时间的计算例例1：有一发酵罐内装：有一发酵罐内装40m3培养基，在培养基，在1210C温度下实罐温度下实罐灭菌，原污染程度为每灭菌，原污染程度为每1ml有有2105个耐热细菌芽孢，已个耐热细菌芽孢，已知知1210C时灭菌速度常数时灭菌速度常数k=1.8min-1，求灭菌失败机率为，求灭菌失败机率为0.001时所需时间。时所需时间。 解：解：N0=401062105=81012(个个) Nt=0.001(个个) k=1.8(min-1) (Nt/N0)=-kt t=2.303/klg(N0/
14、Nt)=2.303/1.8lg(81015) =20.34(min) 由于升温阶段就有部分菌被杀灭，特别是当培养基加由于升温阶段就有部分菌被杀灭，特别是当培养基加热至热至1000C以上，这个作用较为显著，故实际保温阶段时以上，这个作用较为显著，故实际保温阶段时间比计算值要短。间比计算值要短。连续灭菌时间的估算例例2某发酵罐内装某发酵罐内装40m3培养基，采用连续灭菌，培养基，采用连续灭菌，灭菌温度为灭菌温度为1310C，原污染程度为每，原污染程度为每1ml含有含有2105个杂菌，已知个杂菌，已知1310C时灭菌速度常数为时灭菌速度常数为15min-1，求灭菌所需的维持时间。，求灭菌所需的维持时
15、间。解：解：N0=2105(个个/ml) Nt=0.001/(40106)=2.510-11(个个/ml) t=2.303/klg(N0/Nt)=2.303/15lg(2105)/(2.510-11) =2.37 min二二. 影响培养基灭菌的其它因素影响培养基灭菌的其它因素培养基成分培养基成分油脂、糖类及一定浓度的蛋白质、高浓度油脂、糖类及一定浓度的蛋白质、高浓度有机物等增加微生物的耐热性有机物等增加微生物的耐热性低浓度（低浓度（1%-2%）NaCl对微生物有保对微生物有保护作用，随着浓度增加，保护作用减弱，护作用，随着浓度增加，保护作用减弱，当浓度达当浓度达8%-10%以上，则减弱微生物以
16、上，则减弱微生物的耐热性。的耐热性。4. 影响培养基灭菌的其它因素影响培养基灭菌的其它因素pH：pH6.0-8.0，微生物最耐热，微生物最耐热，pH6.0，H+易渗入微生物细胞内，改变细胞的生易渗入微生物细胞内，改变细胞的生理反应促使其死亡。理反应促使其死亡。培养基培养基pH愈低，愈低，灭菌所需时间愈短。灭菌所需时间愈短。培养基的物理状态培养基的物理状态（颗粒大小）（颗粒大小）泡沫泡沫：泡沫中的空气形成隔热层，对灭菌：泡沫中的空气形成隔热层，对灭菌极为不利，可加入少量消泡剂极为不利，可加入少量消泡剂 。培养基中的微生物数量培养基中的微生物数量三、培养基灭菌工艺三、培养基灭菌工艺（一）培养基的分
17、批灭菌（一）培养基的分批灭菌（实罐灭菌）（实罐灭菌）分批灭菌就是指将配制好的培分批灭菌就是指将配制好的培养基放在发酵罐或其他容器中，养基放在发酵罐或其他容器中，通入蒸汽将培养基和所用设备通入蒸汽将培养基和所用设备一起灭菌的操作过程，也称一起灭菌的操作过程，也称实实罐灭菌罐灭菌或或间歇灭菌间歇灭菌 。过程包括：升温、保温和冷却过程包括：升温、保温和冷却等三个阶段。等三个阶段。各阶段对灭菌的贡献：各阶段对灭菌的贡献：20%、75%、5%24016012080时间（min)050100150温度升温冷却保温灭菌工艺过程灭菌工艺过程分空气过滤器灭菌分空气过滤器灭菌并用空气吹干并用空气吹干夹套或蛇管排冷
18、水，开启排夹套或蛇管排冷水，开启排气管阀，空气管通蒸汽，也气管阀，空气管通蒸汽，也可夹套内通蒸汽可夹套内通蒸汽达达70左右左右取样管取样管放料管放料管通蒸汽通蒸汽120，1105pa保温保温保温阶段，凡液面以下各管保温阶段，凡液面以下各管道都应通蒸汽，液面上其余道都应通蒸汽，液面上其余各管道则应排蒸汽，不留死各管道则应排蒸汽，不留死角，维持压力、温度恒定角，维持压力、温度恒定罐压接近空气压力罐压接近空气压力保温结束，依次关闭保温结束，依次关闭各排汽、进汽阀门各排汽、进汽阀门夹套或蛇管中通冷水夹套或蛇管中通冷水 培养基降温到所需温度培养基降温到所需温度向罐内通无菌空气向罐内通无菌空气（二）连续灭
19、菌（连消）（二）连续灭菌（连消）连续灭菌连续灭菌就是将配制好的培养基在通入发就是将配制好的培养基在通入发酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，也称为也称为连消连消。 连续灭菌时，培养基在短时间内被加热到连续灭菌时，培养基在短时间内被加热到灭菌温度（一般高于分批灭菌温度，灭菌温度（一般高于分批灭菌温度，130160），短时间保温（一般为），短时间保温（一般为58min）后，被快速冷却，再进入早）后，被快速冷却，再进入早已灭菌完毕的发酵罐。已灭菌完毕的发酵罐。喷淋冷却连续灭菌流程发酵罐蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽冷却水冷却水无菌培养基无菌培养基配料罐配料罐泵泵连消塔连消塔
20、维持罐维持罐冷却管冷却管连续灭菌流程分批灭菌与连续灭菌的比较分批灭菌与连续灭菌的比较优优 点点缺缺 点点连连续续灭灭菌菌1.1.灭菌温度高，可减少培养基中营灭菌温度高，可减少培养基中营养物质的损失养物质的损失2.2.操作条件恒定，灭菌质量稳定操作条件恒定，灭菌质量稳定3.3.易于实现管道化和自控操作易于实现管道化和自控操作4.4.避免了反复的加热和冷却，提高避免了反复的加热和冷却，提高了热的利用率了热的利用率5.5.发酵设备利用率高发酵设备利用率高1.1.对设备的要求高，需另外设置对设备的要求高，需另外设置加热、冷却装置加热、冷却装置2.2.操作较麻烦操作较麻烦3.3.染菌的机会较多染菌的机会
21、较多4.4.不适合于含大量固体物料的灭不适合于含大量固体物料的灭菌菌5.5.对蒸汽的要求高对蒸汽的要求高间间歇歇灭灭菌菌1.1.设备要求低，不需另外设置加热、设备要求低，不需另外设置加热、冷却装置冷却装置2.2.操作要求低，适于手动操作操作要求低，适于手动操作3.3.适合于小批量生产规模适合于小批量生产规模4.4.适合于含有大量固体物质的培养适合于含有大量固体物质的培养基的灭菌基的灭菌1.1.培养基的营养物质损失较多，培养基的营养物质损失较多，灭菌后培养基的质量下降灭菌后培养基的质量下降2.2.需进行反复的加热和冷却，能需进行反复的加热和冷却，能耗较高耗较高3.3.不适合于大规模生产过程的灭不
22、适合于大规模生产过程的灭菌菌4.4.发酵罐的利用率较低发酵罐的利用率较低（三）培养基与设备、管道灭菌条件（1）杀菌锅内灭菌）杀菌锅内灭菌 固体培养基灭菌固体培养基灭菌（2）种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐）种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐等的空罐灭菌及管道灭菌等的空罐灭菌及管道灭菌（3）空气总过滤器和分过滤器灭菌）空气总过滤器和分过滤器灭菌（三）培养基与设备、管道灭菌条件（4）种子培养基实罐灭菌）种子培养基实罐灭菌 （5）发酵培养基实罐实菌）发酵培养基实罐实菌 （6）发酵培养基连续灭菌）发酵培养基连续灭菌 （7）消泡剂灭菌）消泡剂灭菌 （8）补料实罐灭菌）补料实罐灭菌（9）尿素溶液灭菌）尿素溶液灭
23、菌任务二任务二 空气净化空气净化（一）空气中微生物的分布（一）空气中微生物的分布空气空气(即大气即大气)是一种气态物质的混合物，此外，是一种气态物质的混合物，此外，尚有悬浮在空气中的灰尘，主要由构成地壳的无尚有悬浮在空气中的灰尘，主要由构成地壳的无机物质微粒、烟灰、植物的花粉以及种类繁多的机物质微粒、烟灰、植物的花粉以及种类繁多的细菌和其他微生物所组成。细菌和其他微生物所组成。 空气中常见的微生物种类及其大小空气中常见的微生物种类及其大小（二）发酵用无菌空气的质量标准 发酵用的无菌空气，达到以下标准：发酵用的无菌空气，达到以下标准： 连续提供一定流量的压缩空气。连续提供一定流量的压缩空气。 空
24、气的压强（表压）为空气的压强（表压）为0.20.4 MPa。 进入过滤器之前，空气的相对湿度进入过滤器之前，空气的相对湿度70%。 进入发酵罐的空气温度可比培养温度高进入发酵罐的空气温度可比培养温度高10 30。 压缩空气的洁净度，在设计空气过滤器时，一压缩空气的洁净度，在设计空气过滤器时，一般取失败概率般取失败概率10-3为指标。也可以把为指标。也可以把100级作级作为无菌空气的洁净指标。为无菌空气的洁净指标。 （三）空气除菌方法（三）空气除菌方法辐射杀菌辐射杀菌：超声波、高能阴极射线，：超声波、高能阴极射线，x射线、射线、射线、射线、射线、紫外线射线、紫外线(2265 3287 )加热杀菌
25、加热杀菌：加热方法可用蒸汽、电和空气压缩机：加热方法可用蒸汽、电和空气压缩机产生的热量产生的热量 静电除菌静电除菌 ：常用于洁净工作台、洁净工作室所：常用于洁净工作台、洁净工作室所需无菌无尘空气的第一次除尘，配合高效过滤器需无菌无尘空气的第一次除尘，配合高效过滤器使用。使用。过滤除菌过滤除菌：采用定期灭菌的介质来阻截流过的空：采用定期灭菌的介质来阻截流过的空气所含的微生物而取得无菌空气。常用的过滤介气所含的微生物而取得无菌空气。常用的过滤介质有棉花、活性炭、玻璃纤维、有机合成纤维、质有棉花、活性炭、玻璃纤维、有机合成纤维、有机和无机烧结材料等等。有机和无机烧结材料等等。 （四）空气过滤除菌的原
26、理与介质（四）空气过滤除菌的原理与介质1.过滤除菌的种类绝对过滤：过滤介质的滤孔小于细胞和孢子。 如聚乙烯醇缩甲醛树脂（PVF）制成的0.3 m的微孔滤膜。深层介质过滤：介质的孔隙一般大于微生物细胞。如用棉花、玻璃纤维和颗粒活性炭填充的过滤器。2.深层介质过滤的原理 微粒随气流通过滤层时，由于滤层纤维微粒随气流通过滤层时，由于滤层纤维的层层阻碍，使气流出现无数次改变运动速的层层阻碍，使气流出现无数次改变运动速度和方向的绕流运动，引起微粒与滤层纤维度和方向的绕流运动，引起微粒与滤层纤维间产生间产生惯性冲击、拦截、布朗扩散、重力沉惯性冲击、拦截、布朗扩散、重力沉降、静电引力降、静电引力等作用把微粒
27、滞留在纤维表面等作用把微粒滞留在纤维表面上，实现过滤的目的。上，实现过滤的目的。3. 空气过滤除菌介质（）纤维状或颗粒状过滤介质（）纤维状或颗粒状过滤介质 棉花：常用，有弹性，纤维长度适中。棉花：常用，有弹性，纤维长度适中。 玻璃纤维：直径小，不易折断，过滤效果好。玻璃纤维：直径小，不易折断，过滤效果好。 活性炭：要求质地坚硬，颗粒均匀。活性炭：要求质地坚硬，颗粒均匀。 缺点：体积大，装填费时费力，松紧度不易掌握，空气缺点：体积大，装填费时费力，松紧度不易掌握，空气压降大。压降大。（）纸类过滤介质（）纸类过滤介质超细玻璃纤维纸超细玻璃纤维纸 36张叠在一起使用，过滤效率高，压降小。张叠在一起使
28、用，过滤效率高，压降小。 缺点：强度不大（特别是受潮后）。缺点：强度不大（特别是受潮后）。发酵生产中制备无菌空气的大致过程发酵生产中制备无菌空气的大致过程空气空气 空压机空压机 贮气罐贮气罐 冷却冷却 除油水除油水 加热加热 空气预处理空气预处理 总过滤器总过滤器 分过滤器分过滤器 无菌空气无菌空气 空气过滤空气过滤（五）空气的预处理1. 原理：原理：除尘除尘(外源空气的前处理外源空气的前处理)：防塞，提高过滤效率：防塞，提高过滤效率和滤器寿命；和滤器寿命；措施：措施：建吸风塔、粗过滤器（布袋建吸风塔、粗过滤器（布袋过滤器、填料过滤器、油浴洗涤和水雾除尘装置过滤器、填料过滤器、油浴洗涤和水雾除
29、尘装置等）、高效前置过滤器等）、高效前置过滤器降温降温：防烧伤介质及水分蒸发严重，对发酵不利：防烧伤介质及水分蒸发严重，对发酵不利除油、除水除油、除水：防塞（因油膜堵），防止过滤器长：防塞（因油膜堵），防止过滤器长菌堵塞（因水滴）菌堵塞（因水滴）加热加热：保持相对湿度：保持相对湿度稳压稳压：防止压力波动，贮罐：防止压力波动，贮罐2. 预处理流程设计的简繁关键：去湿问题预处理流程设计的简繁关键：去湿问题预处理设备简介（1）采风塔）采风塔（2）粗过滤器）粗过滤器（3）空气压缩机）空气压缩机（4）空气贮罐）空气贮罐（5）冷却器）冷却器（6）气液分离设备）气液分离设备（7）空气加热设备）空气加热设备含
30、尘气体清洁气体排气管排尘BB（六）空气净化流程1.1.两级分离、冷却、加热的空气除菌流程两级分离、冷却、加热的空气除菌流程2冷热空气直接混合式空气除菌流程3.高效前置过滤除菌流程高效前置过滤器高效前置过滤器压缩机压缩机贮罐贮罐冷却器冷却器 丝网分离器丝网分离器加热器加热器过滤器过滤器4利用热空气加热冷空气的流程大型空气压缩机大型空气压缩机发酵车间的空气过滤器发酵车间的空气过滤器思考题1. 在灭菌过程中什么是微生物的热阻？在灭菌过程中什么是微生物的热阻？2. 微生物的热死规律是什么？灭菌时如何利用好这个规律？微生物的热死规律是什么？灭菌时如何利用好这个规律？3. 常用的灭菌方法有哪些？各有什么优
31、点或缺点？常用的灭菌方法有哪些？各有什么优点或缺点？4. 湿热灭菌法的灭菌条件是什么？它又有哪两种不同方法，湿热灭菌法的灭菌条件是什么？它又有哪两种不同方法，主要优点和缺点有哪些？主要优点和缺点有哪些？5. 空气净化时采用过滤方式来除菌的种类、介质有哪些？过空气净化时采用过滤方式来除菌的种类、介质有哪些？过滤的原理是什么？滤的原理是什么？6. 提高过滤除菌效率的措施有哪些？提高过滤除菌效率的措施有哪些？7. 发酵生产中制备无菌空气的总流程？发酵生产中制备无菌空气的总流程？EndEnd！Thank you Thank you for your attention !for your attention !
