1、沙皇遗骸的辨认沙皇遗骸的辨认 19171917年，十月革命后，年，十月革命后，尼古拉二世被流放到西尼古拉二世被流放到西伯利亚的叶卡捷琳堡。伯利亚的叶卡捷琳堡。 19181918年年7 7月月1717日清晨全日清晨全家被枪杀（至少家被枪杀（至少9 9人）。人）。 8080年代后，俄罗斯总统年代后，俄罗斯总统叶利钦亲自参加了在圣叶利钦亲自参加了在圣彼得堡举行的安葬仪式。彼得堡举行的安葬仪式。 第七章第七章 线粒体线粒体DNADNA多态性多态性mitochondrial DNA of polymorphismsmitochondrial DNA of polymorphisms第一节第一节 概述概述
2、第二节第二节mtDNAmtDNA多态性多态性第三节第三节mtDNAmtDNA分型命名分型命名第四节第四节mtDNAmtDNA分型技术分型技术第五节第五节mtDNAmtDNA分型的特殊问题分型的特殊问题教学内容和要求教学内容和要求 掌握：掌握：mtDNAmtDNA多态性、多态性、 mtDNA mtDNA分型技术分型技术 了解：了解：mtDNAmtDNA分型命名分型命名 mtDNA mtDNA分型的特殊问题分型的特殊问题第一节第一节 概述概述(summary)(summary)1.1.线粒体（线粒体（mitochondrionmitochondrion）: :细胞器，氧化磷酸化和提供能量的场所。细
3、胞器，氧化磷酸化和提供能量的场所。2.2.线粒体线粒体DNADNA（mitochondrial DNA,mtDNAmitochondrial DNA,mtDNA）: :细胞核外细胞核外DNADNA，编码蛋白质和，编码蛋白质和RNARNA的基因，的基因，人体不同组织细胞所含有的线粒体数目及人体不同组织细胞所含有的线粒体数目及DNADNA拷贝数不同，在数百至数万之间变化。拷贝数不同，在数百至数万之间变化。生物的遗传生物的遗传DNADNA分布分布主要在核染色体上主要在核染色体上细胞质内细胞质内细胞核遗传细胞核遗传细胞质遗传细胞质遗传（核染色体是（核染色体是DNADNA的主要的主要 载体）载体）97.
4、5%97.5%2.5%第一节第一节 概述概述线粒体电镜照片线粒体电镜照片线粒体线粒体“能量工厂能量工厂”线粒体是核外唯一线粒体是核外唯一含有遗传效应物质含有遗传效应物质的细胞器。的细胞器。 线粒体是真核细胞内的重要细胞器，它是细胞的能量工厂，细胞产生线粒体是真核细胞内的重要细胞器，它是细胞的能量工厂，细胞产生能量的能量的95%95%来自线粒体中进行的氧化磷酸化。来自线粒体中进行的氧化磷酸化。除了红细胞外，除了红细胞外，人类所有体细人类所有体细胞都含有线粒体，其中多数细胞含有数以万计的线粒体。胞都含有线粒体，其中多数细胞含有数以万计的线粒体。1.1.双链双链1656916569bpbp，其中一，
5、其中一条为重连，一条为轻连。条为重连，一条为轻连。基因编码物各不相同。基因编码物各不相同。2.2.基因中不含非编码序列。基因中不含非编码序列。3.3.几乎不含终止密码。几乎不含终止密码。4.4.转录与翻译均在线粒体转录与翻译均在线粒体中进行。中进行。6.DNA6.DNA不与组蛋白结合。不与组蛋白结合。7.7.部分密码子不同于核基部分密码子不同于核基因组密码子。因组密码子。线粒体结构特征线粒体结构特征1.mtDNA1.mtDNA的功能特点的功能特点（The functional characteristics of mtDNA）（1 1）碱基碱基结构紧凑、简洁：以最少碱基数编码尽量多的蛋白质和结
6、构紧凑、简洁：以最少碱基数编码尽量多的蛋白质和RNARNA；基；基 因间无间隔序列，基因内无内含子、前导序列、带帽序列和终止信因间无间隔序列，基因内无内含子、前导序列、带帽序列和终止信 号；号； 相邻基因甚至有碱基的重叠。相邻基因甚至有碱基的重叠。 （2 2）不存在同源基因间的重组与交换。）不存在同源基因间的重组与交换。（3 3）母系遗传，）母系遗传，mtDNAmtDNA所有序列变异呈单倍型特性。所有序列变异呈单倍型特性。 精细胞精细胞卵细胞卵细胞 遗传密码与一般的通用密码不同遗传密码与一般的通用密码不同密码子密码子 核核DNA mtDNA UGA 终止终止 色氨酸色氨酸 AGA, AGG 精
7、氨酸精氨酸 终止终止 AAA 赖氨酸赖氨酸 天冬酰胺天冬酰胺 AUA 异亮氨酸异亮氨酸 蛋氨酸蛋氨酸 甲硫酰胺甲硫酰胺 AUG AUA起始甲硫酰胺起始甲硫酰胺 AUG AUG AUA AUUAUC2.mtDNA2.mtDNA功能：功能：（1 1）储存信息）储存信息-编码参与氧化磷酸化的蛋白质和编码参与氧化磷酸化的蛋白质和RNARNA的的 H H 链：链：2 2个个rRNArRNA，1414个个tRNAtRNA，1212个蛋白质个蛋白质 L L 链：链：8 8个个rRNArRNA，1 1个蛋白质个蛋白质（2 2）自身复制）自身复制-单向复制单向复制: :置换环复制或置换环复制或D-D-环环(D-
8、loop)(D-loop)复制复制 特点：特点：不对称的复制不对称的复制 H H链和链和L L链各有一个复制起点，先复制链各有一个复制起点，先复制H H链，链， H H链复制到达链复制到达L L链起始点后，链起始点后，L L链开始复制链开始复制 D- D-环：环：新合成第三条新合成第三条H H链姊妹链链姊妹链 ，序列与，序列与L L链互补链互补 H H链复制起点附近（链复制起点附近（ 520-700 520-700 ），高变异。），高变异。（3 3）转录功能）转录功能-两条链同时转录合成两条链同时转录合成RNA-RNA-对称转录对称转录 mtDNAmtDNA与核常染色体与核常染色体DNADNA
9、的比较的比较mtDNAmtDNA核常染色体核常染色体DNADNA结构结构闭合、环状子，无组蛋白闭合、环状子，无组蛋白线状，形成核小体线状，形成核小体大小大小大小为大小为16,569bp16,569bp约约3030亿亿bpbp数目数目5050几千个拷贝几千个拷贝 / /细胞细胞1 1个拷贝个拷贝 / /细胞细胞编码编码约有约有1,100bp1,100bp非编码区非编码区基因组大部分为非编码区基因组大部分为非编码区遗传方式遗传方式母系遗传母系遗传孟德尔方式遗传孟德尔方式遗传重组重组不发生重组，单倍型遗传不发生重组，单倍型遗传发生重组发生重组突变率突变率高高低低全序列获得全序列获得19811981年
10、年, Aderson, Aderson序列（剑桥序列）序列（剑桥序列） 20012001年草图年草图mtDNAmtDNA自主复制，不依赖核染色体而将复制后的自主复制，不依赖核染色体而将复制后的DNADNA分配到子细胞中去。分配到子细胞中去。5.半自主的细胞器半自主的细胞器自身含有遗传表达系统（自主性），但编码的遗传信息十分有限，其自身含有遗传表达系统（自主性），但编码的遗传信息十分有限，其RNARNA的转录、蛋白质翻译等功能发挥必需依赖核的转录、蛋白质翻译等功能发挥必需依赖核DNADNA编码的遗传信息。编码的遗传信息。第二节第二节 mtDNAmtDNA多态性多态性 主要集中在主要集中在mtDN
11、AmtDNA的非编码区（的非编码区（D D环）和环）和部分编码区。其中部分编码区。其中D D环含有两个高变区环含有两个高变区（high variable regions,HVRhigh variable regions,HVR）I I和和II,II,无无修复系统，不受选择的影响，积累了较多修复系统，不受选择的影响，积累了较多的变异，多态性很好，适用于法医学研究。的变异，多态性很好，适用于法医学研究。 mtDNA突变率比较高突变率比较高 高高 变变 区区 HVR-I 29 HVR-I 29 408408号碱基号碱基 HVR-II 15996 HVR-II 15996 1640116401号碱基号
12、碱基 HVR-III 438 HVR-III 438 574574号碱基号碱基 主要原因主要原因 A : mtDNAA : mtDNA没有组蛋白的保护没有组蛋白的保护 B : DNA B : DNA聚合酶缺乏聚合酶缺乏3 3-5-5外切酶校正功能外切酶校正功能 C : C : 缺乏缺乏DNADNA损伤的修复体系损伤的修复体系 D : mtDNA D : mtDNA极少或不受来自选择压力的影响极少或不受来自选择压力的影响 突变类型突变类型 碱基的错配碱基的错配-序列多态性序列多态性 主要为转换（主要为转换（90%90%）：嘧啶转换）：嘧啶转换 HV-I 80%HV-I 80% HV-II 20%
13、 HV-II 20% 少数是顛换（少数是顛换（10%10%）：）： CA CA 或或 AC AC 插入或缺失插入或缺失-长度多态性长度多态性 poly polyC C：nt16184-nt16193 ( HV-I )nt16184-nt16193 ( HV-I ) CA CA 重复：重复：nt514-nt523 ( HV-III ) nt514-nt523 ( HV-III ) 多态性的类型的类型（The polymorphism of mtDNA type）1.1.点突变的多态性点突变的多态性DNADNA链中发生单个碱基的突变，且突变导致一个原有链中发生单个碱基的突变，且突变导致一个原有酶切
14、位点的丢失或形成一个新的酶切位点。酶切位点的丢失或形成一个新的酶切位点。2.2.序列多态性序列多态性DNADNA排列顺序发生改变：缺失、重复、插入所致。排列顺序发生改变：缺失、重复、插入所致。高变区（高变区（highly variable region highly variable region ）内串联重复顺序的）内串联重复顺序的拷贝数不同所产生的，其突出特征是限制性内切酶识别位拷贝数不同所产生的，其突出特征是限制性内切酶识别位点本身的碱基没有发生改变，改变的只是它在基因组中的点本身的碱基没有发生改变，改变的只是它在基因组中的相对位置。相对位置。 1.1.序列多态性（序列多态性（Seque
15、nce polymorphismSequence polymorphism） 主要集中在主要集中在D-loopD-loop区。区。HV1HV1：nt16024nt16024nt16365nt16365，342bp342bp。 HV2HV2：nt73nt73nt340nt340，268bp268bpHV3HV3：nt438nt438nt574nt574，137bp137bp2.2.长度多态性（长度多态性（Length polymorphismLength polymorphism） nt514-nt523nt514-nt523：CACA重复重复 C-stretch: polyCC-stretch
16、: polyCControl region (D-loop)1/16,569cyt bND5ND6ND4ND4LND3COIIIATP6ATP8COII12S rRNA16S rRNAND1ND2COIOH9-bp deletionOLFVL1IQMWANCYS1DKGRHS2L2EPTHV1HV216024163657334016024576“16,569” bp122 tRNAs2 rRNAs13 genesHeavy (H) strandLight (L) strandCoding Region1.1.概念概念一个种族不同个体的基因组或共同序列之间，存在单个核苷一个种族不同个体的基因组或
17、共同序列之间，存在单个核苷酸的差异。酸的差异。2.2.序列多态性（序列多态性（Sequence polymorphismSequence polymorphism） 主要集中在主要集中在D-loopD-loop区。区。HV1HV1：nt16024nt16024nt16365nt16365，342bp342bp。 HV2HV2：nt73nt73nt340nt340，268bp268bpHV3HV3：nt438nt438nt574nt574，137bp137bp三三.mtDNA.mtDNA串联重复序列多态性串联重复序列多态性( mtDNA short tandem repeats,STR)( mt
18、DNA short tandem repeats,STR)集中在集中在D-loopD-loop区区, ,核心序列一般在核心序列一般在10bp10bp以下，常见的是以下，常见的是CACA重重复（复（nt514-nt523nt514-nt523）和）和 polyC polyC （nt568-nt573nt568-nt573和和nt303-nt309nt303-nt309）. .三三.mtDNA.mtDNA串联重复序列多态性串联重复序列多态性( mtDNA short tandem repeats,STR)( mtDNA short tandem repeats,STR) 由于有多态性重复序列的存在
19、，实际人类由于有多态性重复序列的存在，实际人类mtDNAmtDNA的长度不总是的长度不总是16569bp,16569bp,可能会有可能会有10bp10bp左左右的增减。右的增减。四四.mtDNA.mtDNA单倍群单倍群（mtDNA haplogroupmtDNA haplogroup） 线粒体单倍群或单倍型类群是一组类似的单倍型线粒体单倍群或单倍型类群是一组类似的单倍型（haplotypehaplotype），它们有一个共同的单核苷酸多态性祖先。），它们有一个共同的单核苷酸多态性祖先。单倍群由相似的单倍型组成，可以从单倍型来预测单倍群。单倍群由相似的单倍型组成，可以从单倍型来预测单倍群。而单核
20、苷酸多态性分析被用来确认单倍型。单倍群以字母而单核苷酸多态性分析被用来确认单倍型。单倍群以字母来标记，并且以数字和一些字母来补充。来标记，并且以数字和一些字母来补充。 单倍群用来揭示数千年前的祖先来源。单倍群用来揭示数千年前的祖先来源。 追溯母系遗传的人类起源。追溯母系遗传的人类起源。 序列多态性（序列多态性（Sequence polymorphismSequence polymorphism） 主要集中在主要集中在D-loopD-loop区。区。-HVRI,HVRII,1122-HVRI,HVRII,1122个碱基个碱基HV1HV1：nt16024nt16024nt16365nt16365，
21、342bp342bp。 HV2HV2：nt73nt73nt340nt340，268bp268bp长度多态性（长度多态性（Length polymorphismLength polymorphism）nt514-nt523nt514-nt523：CACA重复重复 C-stretch: polyCC-stretch: polyC第四节第四节 mtDNAmtDNA多态性分析技术多态性分析技术第四节第四节 mtDNAmtDNA多态性分析技术多态性分析技术 长度多态性：长度多态性：AMP-FLPAMP-FLP分析技术分析技术 序列多态性：序列多态性：PCR-RFLPPCR-RFLP法法PCR-SSOPC
22、R-SSO杂交法杂交法PCRPCRDNADNA自动测序自动测序 目前分析目前分析mtDNAmtDNA多态性最常用，也是最准确的方法。多态性最常用，也是最准确的方法。 四四.mtDNA.mtDNA的的PCR-RFLPPCR-RFLP分型分型 形成形成mtDNAmtDNA序列多态性主要是点突变，在序列多态性主要是点突变，在HV-IHV-I和和HV-IIHV-II区段，具有变异的碱基位置有区段，具有变异的碱基位置有700700800800个，其中大约有个，其中大约有2/32/3的碱基变异涉及的碱基变异涉及到限制酶识别点回文式序列的改变，构成典到限制酶识别点回文式序列的改变，构成典型的型的RFLPRF
23、LP现象。现象。 四四.mtDNA.mtDNA的的PCR-RFLPPCR-RFLP分型分型 在在mtDNA mtDNA 控制区控制区D D环，有环，有8888个突变点，其中个突变点，其中只有只有2121个能采用个能采用PCR-RFLPPCR-RFLP分析进行分型。分析进行分型。 检测检测mtDNAmtDNA上多个多态性位点的序列，可以上多个多态性位点的序列，可以形成多个单倍型（形成多个单倍型（haplogroupshaplogroups）组合，个人）组合，个人识别力比单个位点的明显提高。识别力比单个位点的明显提高。五五. .法医学应用法医学应用（Forensic applicationFore
24、nsic application） PCR-RFLP PCR-RFLP 技术的优点技术的优点1.1.分型技术简单，结果判定容易。分型技术简单，结果判定容易。2.2.电泳后不需测定片段长度，避免了测量误差，可以电泳后不需测定片段长度，避免了测量误差，可以准确判定基因型。准确判定基因型。3.3.分型结果稳定，重复性好，分析结果可以用数字化分型结果稳定，重复性好，分析结果可以用数字化的形式记录保存。的形式记录保存。4.4.特异性好，灵敏度高，对检材质量要求低。特异性好，灵敏度高，对检材质量要求低。一一. .法医法医mtDNAmtDNA分型分型（Forensic mtDNA typing）什么时候需要
25、做什么时候需要做mtDNAmtDNA分析？分析？ 当细胞核当细胞核DNADNA量不足无法进行核量不足无法进行核DNADNA分型分型时，时， mtDNAmtDNA分析技术是唯一可以利用的技术。分析技术是唯一可以利用的技术。人体生物检材中的毛发、骨头、牙齿以及其它人体生物检材中的毛发、骨头、牙齿以及其它严重降解的生物检材均可进行严重降解的生物检材均可进行mtDNAmtDNA分析。分析。二二.PCR.PCR循环测序循环测序-mtDNA-mtDNA序列多态性流程序列多态性流程1.1.样本样本mtDNAmtDNA模板的制备模板的制备2.PCR2.PCR扩增扩增HV1HV1和和HV2HV2区域区域 3.
26、3.正、反向引物对正、反向引物对HV1HV1和和HV2HV2区域进行序列测定区域进行序列测定 4. 4.对比正反向序列确定对比正反向序列确定mtDNAmtDNA序列序列5.5.与与AndersonAnderson序列对比找出不同碱基序列对比找出不同碱基6.6.确定该样本确定该样本mtDNA mtDNA 的单体型的单体型1.1.样本样本mtDNAmtDNA提取提取生物样本：生物样本：缺乏毛囊的毛干缺乏毛囊的毛干暴露在空气的陈旧的骨骼、牙齿暴露在空气的陈旧的骨骼、牙齿核核DNADNA检测失败的血痕、拭子、组织检测失败的血痕、拭子、组织严重降解的生物检材严重降解的生物检材2.2.人类线粒体基因组人类
27、线粒体基因组DNADNA高变区分析高变区分析分析分析和和。1.1.第一次扩增用第一次扩增用L15926-H00580L15926-H00580引物扩增引物扩增D D环区片段（环区片段（1.3kb)1.3kb)。2.2.第二次扩增用第二次扩增用L15997-H16401L15997-H16401引物和引物和L00029-H00408L00029-H00408引物分别引物分别扩增扩增HVRHVR和和HVRHVR片段。片段。3.3.测序模板扩增测序模板扩增 双链双链DNADNA测序经过测序经过L L链和链和H H链分别从两个方向测序，链分别从两个方向测序，对比两链相应碱基的互补性，可以获得准确的序列
28、。对比两链相应碱基的互补性，可以获得准确的序列。4.4.测序测序 用自动荧光检测完成。用自动荧光检测完成。 清洗毛干溶解细胞保护DNA分子，防止酶切纯化DNA存储DNA提取毛干中的DNA的步骤二氧化硅悬浮液的制备骨粉的制备除菌，防止外源性DNA的污染原理：对骨骼进行清洗、消毒、磨为原理：对骨骼进行清洗、消毒、磨为粉末，然后对骨细胞进行裂解，采用粉末，然后对骨细胞进行裂解，采用吸附和超滤作用对吸附和超滤作用对DNADNA提取和纯化。提取和纯化。骨细胞脱钙除去杂物，纯化DNA从gui珠洗脱DNA3.3.人类线粒体基因组人类线粒体基因组STRSTR位点分析位点分析 位于位于D D环中环中nt514-
29、523nt514-523位点处有位点处有CACA重复。重复。扩增片段长度多态性分析技术检测。扩增片段长度多态性分析技术检测。 法医学实践中如何根据法医学实践中如何根据mtDNAmtDNA序列多态性进行个体序列多态性进行个体识别或亲子鉴定？识别或亲子鉴定？第五节第五节 mtDNAmtDNA分析在法医学上的应用分析在法医学上的应用 优势优势 局限性局限性 结果解释结果解释一一.mtDNA.mtDNA的特点及其法医学应用优势的特点及其法医学应用优势1.1.唯一的核外唯一的核外DNADNA来源来源可检测样品范围增大，为很少或没有可检测样品范围增大，为很少或没有nDNAnDNA（nucleic DNAn
30、ucleic DNA）的）的样本的检验提供了希望。如骨骼、指甲、毛干等。样本的检验提供了希望。如骨骼、指甲、毛干等。2.2.拷贝数多拷贝数多适于微量、高度降解样本。适于微量、高度降解样本。3.3.母系遗传母系遗传可选择的比对参照样本范围扩大。可选择的比对参照样本范围扩大。 如遗骸的个人认定或一个失踪的人无法提供参考样本，可用如遗骸的个人认定或一个失踪的人无法提供参考样本，可用其母亲、兄弟姐妹等血液作为参考样本。其母亲、兄弟姐妹等血液作为参考样本。二二.mtDNA.mtDNA序列分析用于下列情况序列分析用于下列情况 脱落毛发 指甲、骨骼、牙齿 极微量血痕 核DNA分型失败样本 案例案例1 1 H
31、ollandHolland等（等（19931993年）对年）对19841984年越南归还的越年越南归还的越战身亡美国士兵的残骸成功地进行了身源鉴定。这些残战身亡美国士兵的残骸成功地进行了身源鉴定。这些残骸遗存于自然环境下长达骸遗存于自然环境下长达2424年之久。年之久。 案例案例2 2 沙皇遗骸的辨认（沙皇遗骸的辨认（19181918年埋葬，年埋葬，19911991年挖掘，年挖掘，19941994年测定年测定mtmtDNADNA序列）序列） 案例案例3 3 （19961996年美国）现场仅从死者身上发现年美国）现场仅从死者身上发现1 1根毛发。根毛发。mtmtDNADNA序列分析与犯罪嫌疑人序
32、列分析与犯罪嫌疑人 Paul Ware Paul Ware 的完全匹配，的完全匹配，Paul Ware Paul Ware 被判强奸、谋杀罪。这是被判强奸、谋杀罪。这是mtmtDNADNA序列分析首次序列分析首次在法庭上作为证据。在法庭上作为证据。Identifying the Romanov Remains (the Last Russian Czar)TsarinaAlexandraTsar Nicholas IIXenia Cheremeteff-SfiriPrince PhilipDuke of EdinburghGeorgijRomanovMitotype16111T16357C26
33、3G315.1CMitotype16126C16169T16294T16296T73G263G315.1C16169T/C16169T/CLouise of Hesse-CasselSOURCES: Gill et al. (1994) Nature Genetics, 6, 130 135.; Ivanov et al. (1996) Nature Genetics, 12, 417 420; Stone, R. (2004) Science, 303, 753. 三三. mtDNA. mtDNA分型在法医学应用的局限性分型在法医学应用的局限性1.1.分型技术要求高，耗时耗力耗钱（分型技术要
34、求高，耗时耗力耗钱（Expensive） FBI： 2003年计划$4,000,000再次资助4个区域性的法医mtDNA实验室； 一年约须2/3的人力分析大约120 mtDNA 的案件。（FBI laboratory 2002 annual report）三三. mtDNA. mtDNA分型在法医学应用分型在法医学应用的局限性的局限性2.2.个人识别力相对较低个人识别力相对较低（1 1）US Caucasians mtDNA databaseUS Caucasians mtDNA database： 1175 1175 个个体检出个个体检出982982种单倍型。种单倍型。（2 2）中国）中国m
35、tDNA databasemtDNA database：检出：检出356356种单倍型。种单倍型。（3 3）非洲裔美洲人）非洲裔美洲人mtDNA databasemtDNA database：检出：检出16551655种单倍型（最种单倍型（最多）。多）。（4 4）巴勒斯坦的）巴勒斯坦的mtDNA databasemtDNA database：检出：检出8 8种单倍型（最少）。种单倍型（最少）。三三. mtDNA. mtDNA分型在法医学应用的局限性分型在法医学应用的局限性3.3.不存在严格的匹配概念，不能作为绝对个人认定不存在严格的匹配概念，不能作为绝对个人认定的遗传标记。真正价值在于排除统一
36、性。的遗传标记。真正价值在于排除统一性。4.4.异质性异质性5.5.高污染风险高污染风险6.6.混合斑（几乎不可能）混合斑（几乎不可能）注意！注意！异质性（Heteroplasmy Heteroplasmy ）概念概念 ：一个个体的线粒体：一个个体的线粒体DNADNA有两套或两套以上不同碱基序列差异的情况。有两套或两套以上不同碱基序列差异的情况。 三种形式：三种形式： a: a: 个体的不同组织中含有一种以上的个体的不同组织中含有一种以上的mtDNAmtDNA序列序列 B: B:同一个体同一组织的不同细胞的同一个体同一组织的不同细胞的mtDNAmtDNA序列不同序列不同 C: C:同一个体同一
37、组织的不同细胞同一细胞间不同拷贝的线粒体间有不同序列。同一个体同一组织的不同细胞同一细胞间不同拷贝的线粒体间有不同序列。 在同一细胞中只有一个拷贝核染色体，但约有在同一细胞中只有一个拷贝核染色体，但约有100000100000个拷贝的线粒体个拷贝的线粒体DNADNA，所，所以一个细胞内的以一个细胞内的mtDNAmtDNA比例大于一定值时，才能被检测到其遗传突变（异质比例大于一定值时，才能被检测到其遗传突变（异质性）。性）。异质性出现频率：异质性出现频率：2-8 % 2-8 % 为避免可能存在异质性影响序列必须双向测序和至少重复为避免可能存在异质性影响序列必须双向测序和至少重复一次。一次。四四.
38、mtDNA.mtDNA结果解释可分为三类：结果解释可分为三类：1.1.排除：排除：排除来自同一个人或家系。排除来自同一个人或家系。 比对样品有比对样品有2 2个或个或2 2个以上的碱基序列不同。个以上的碱基序列不同。2.2.不确定不确定 比对样品有比对样品有1 1个碱基序列不同。个碱基序列不同。 - - 异质性异质性 - -不能确定不能确定四四.mtDNA.mtDNA结果解释可分为三类：结果解释可分为三类：3.3.不能排除，匹配不能排除，匹配 比对样品碱基序列相同比对样品碱基序列相同 - -可能来自嫌疑人可能来自嫌疑人 - -可能来自与嫌疑人同一母系的人可能来自与嫌疑人同一母系的人 - -可能来自与嫌疑人无母系关系的一个个体可能来自与嫌疑人无母系关系的一个个体 考虑案件限定范围，可有认定意义。考虑案件限定范围，可有认定意义。 谢 谢 !
