1、同型半胱氨酸和蛋氨酸合成酶还原酶A66G基因多态性与Alzheimer病的关系实习生：陈晶砺指导老师：陈盛强主任实习医院：广州医学院第二附属医院 目的探讨同型半胱氨酸()和蛋氨酸合成酶还原酶(MSR)A66G基因多态性与Alzheimer病的关系。 研究背景nAlzheimer病是老年性痴呆中较常见的一种,其病因未明确,是一种神经系统变性疾病,临床表现为进行性加重的智力障碍,病理特征为老年斑和神经纤维缠结。 蛋氨酸循环转硫作用再甲基化作用维生素-甲基四氢叶酸维生素研究背景研究背景n血中同型半胱氨酸()浓度升高的原因有遗传遗传和环境营养环境营养两种因素 研究背景n遗传因素：胱硫醚-合成酶（）缺陷
2、、，-亚甲基四氢叶酸还原酶（）、蛋氨酸（甲硫氨酸）合成酶（）缺陷等；n环境因素：维生素、和叶酸摄入不足等。n此外血浆还与血胆固醇水平、血压正相关，慢性肾衰、甲减也可导致升高。研究对象n组：病例共66例,其中男29例,女37例,诊断标准为 (美国精神病协会的精神障碍诊断和统计手册),年龄为6093岁;n对照组：143例对照者(既往无心脑血管病、糖尿病、慢性肝病、慢性阻塞性肺气肿、支气管哮喘等病史),其中男65例,女78例,年龄与患者相近。研究对象n以上研究对象全部来自广州市老人院,均为随机选择,无血缘关系。以上各组研究对象均排除高血压、心脏病、脑血管病、周围血管病、高血脂、糖尿病、吸烟、肾功能不
3、全、药物因素等对血浆中总水平的影响。n两组间性别和年龄差异无显著意义。 研究方法n运用多聚酶链反应限制性内切酶片段长度多态性技术(-)和荧光偏振法()检测66例阿尔茨海默病及143例正常人2756基因多态性和血浆总水平。 研究方法病人标本血浆提取测测定血浆叶酸、VitB12浓度 扩增 数据分析统计 试验结果n经扩增后基因目的片段大小为bpn重复性实验：10份标本,每份重复5次PCR扩增,均产生同样结果试验结果nMSR等位基因的指定 ：R基因片段扩增产物长度分别为151。R A66G突变的G等位基因扩增产物经NdeI消化后裂解成124和27两个片段.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示MSR基因酶切产物存在两
4、种等位基因(A,G)和三种基因型(AA:纯合野生型;AG:突变杂合型;GG:纯合突变型，各表型的酶切片断的大小为:AA151bp;AG151bp、124bp、27bp;GG124bp、27bp)试验结果试验结果由上电泳图可得：MSR A66G基因多态性泳道M为分子量标记,泳道1,2,5,6,7,8,9为MSRA66G突变杂合型;泳道3,4为MSRA66A纯合野生型;泳道10为MSRG66G纯合突变型。 试验结果组与对照组MSR A66G基因型频率与等位基因频率的分布 : 例数 MSR A66G基因型频率(%) 等位基因频率(%) / / / AD组 66 98.48(65) 1.52(1) 0
5、.00(0) 0.9924 0.0076对照组 143 98.60(141) 1.40(2) 0.00(0) 0.9930 0.0070n由表可知, MSR A66G各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(0 05)。 组与对照组血浆总, 叶酸,VitB12水平比较： N Hcy(mol/L) 叶酸 (nmol/L) VitB12(pmol/L)组 66 14.726.2 15.565.51 475.09175.18对照组 143 10.92.44 17.756.82 433.53157.47 n由表可知,患者血浆总Hcy水平显著高于正常组,两者差异有显著差异(0.05)。结论
6、多态性与无明显相关，高同型半胱氨酸血症与Alzheimer病发生有一定关系。 讨论n蛋氨酸(甲硫氨酸)合成酶的主要生化功能是催化同型半胱氨酸复甲基为甲硫氨酸。在对MS活性的研究中发现，叶酸/钴胺素代谢失调的病人表现为MS还原系统活性的缺失，MS催化HCY复甲基为甲硫氨酸，其间存在一种具有还原甲基功能的酶，即蛋氨酸合成酶还原酶( MSR)，MSR为MS的还原活性状态酶，由于该酶为MS、钴胺素依赖酶以及叶酸依赖HCY的甲基化，所以认为MSR可能会影响NTDs的发生。 讨论n有研究发现高水平的同型半胱氨酸可使培养的海马神经元对淀粉样蛋白的损害的敏感性提高6。国内外关于MSR基因A66G多态性与血栓性
7、疾病的关系的报道较少。Brown CA等认为MSR基因A66G多态性与早发性冠心病有关4。Ray JG等6研究了MSR A66G与女性静脉血栓栓塞的关系，发现病例组（32.6）中GG型频率高于对照组（27.1），但是无统计学意义。 讨论nNejat Akar等7研究了MSR基因A66G 多态性与儿童卒中的关系，发现病例与对照之间G等位基因的分布无差别。我们探讨了MSR基因A66G多态性与AD的关系，发现AD组和对照组的MSR各基因型的分布及G等位基因的频率均无显著性差异。这提示本组病例中，MSR基因A66G多态性与AD的发病无相关性。 讨论n本文得到的组总水平比正常组有明显升高的结果可能与同型
8、半胱氨酸代谢中其他酶的突变有关.造成不同人群与有不同的关联的可能原因有很多n例如:(1)是一种多基因遗传的疾病,除了R基因以外,其它基因也可能与易感性有关,其他危险因子如基因等亦可能会影响R基因多态性与的相关性;(2)病人选择上的差别;(3)由于各地饮食习惯、地理环境、人的生长状态等环境因子改变R的作用效果而使不同地区的人群基因多态性与相关性存在着差异,这些都有待进一步研究。致谢n本实验在陈盛强主任悉心指导下完成。非常感谢我的导师陈盛强主任在整个课题设计、实验以及论文撰写过程中对我的帮助。导师的严谨、求实、细致的工作作风、积极乐观的人生态度、谦虚、宽容的处世原则，将指引着我走向未来。n在学习期间得到了神经研究所和检验科有关人员的大力协助,谨在此致以衷心的感谢！
