1、开题报告猴头菌高密度发酵工艺的研究指导教师：王迪项目负责人：安升淑项目组成员：肖子建、毛海波、董麟一、立项目的二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果目录一一二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果目录立项背景 猴头菌多糖能提高自然杀伤细胞的活性、促进迟发型超敏反应（DTH）的发生，能增强巨噬细胞的吞噬细胞。 猴头菌提取物颗粒(tteriacium extract granules，HEG)能显著降低老年人服用过量非甾体类药物所致胃黏膜损伤，促进溃疡愈合 。目前HEG治疗慢性萎缩性胃炎在临床上已取得了满意的效果立项目的 本研究首先采用物理化学结合方法对猴头菌株进
2、行诱变选育，筛选得到细胞内多糖含量较其他菌株明显高的高产菌株，在此基础上，对培养基的组分和配比进行优化以便获得猴头菌高产菌株最佳发酵培养条件，使菌丝体产量进一步提高；并对猴头菌菌株胞内多糖进行提取纯化立项意义 实现利用豆粕为氮源优化猴头菌发酵工艺，实现猴头菌产业化生产，为其它的大型真菌类中药（比如灵芝、云芝、松茸等）开发提供很好的范例 分离和筛选猴头菌，提高其大规模发酵生产工艺，降低生产成本，缩短生产周期，为人们提供物美价廉的产品 填补低成本、大规模液体发酵生产猴头菌菌粉及其替代品在吉林省的空白。带动大型真菌类中药资源的科学开采，深度开发。一、立项目的三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成
3、果目录技术路线： 蜜环高产菌株蜜环高产菌株摇瓶发酵培养基优化摇瓶发酵培养基优化单因素实验、单因素实验、pb设计、设计、最陡爬坡试验、最陡爬坡试验、bb设计设计摇瓶发酵培养摇瓶发酵培养条件条件优化优化单因素实验、单因素实验、pb设计、设计、bb设计设计10L发酵罐发酵工艺优化发酵罐发酵工艺优化pb设计、单因素实设计、单因素实验验100L发酵罐发酵罐放大验证放大验证蜜环蜜环菌发酵菌发酵产产物物多成分含量快速分析多成分含量快速分析及测定及测定基因鉴别基因鉴别一、立项目的二、技术路线四、项目特色五、项目完成预期成果目录研究内容主要有高产猴头菌株发酵工艺开发、菌粉制备工艺的开发、高产猴头菌株检验方法建立
4、。本课题组研究内容分为以下几方面： 10L及100L发酵工艺优化研究建立100L发酵工艺参数。 高产猴头菌发酵水平测定建立高产猴头菌株胞内多糖检验方法，制定猴头菌菌粉的含量限度指标及检验方法。摇瓶发酵培养基优化 碳源浓度筛选以种子培养基为初始培养基。以食用葡萄糖为碳源，分别考察碳源浓度为10g/L，15g/L，20g/L，25g/L，30g/L。其它成分固定，进行发酵培养，以筛选最优碳源浓度。发酵条件为：种龄为5d，接种量为4%，装液量为500mL的摇瓶装200mL，培养温度26，摇床转速为150rpm，培养时间为5d。 氮源浓度筛选采用筛选出的最适碳源浓度，以食品级豆粕粉为氮源，分别考察氮源
5、浓度为20g/L，25g/L，30g/L，35g/L，40g/L，而其它成分不变进行发酵培养，筛选最适氮源浓度。 无机盐和微量元素筛选在筛选合适碳氮源的基础上，分别在培养基中加入以下无机盐离子：0.01 mmol/l，0.05 mmol/l，0.1 mmol/l，0.2 mmol/l，0.5 mmol/l的K+，Na+，Zn2+，Fe2+，Mg2+和0.01% VB1。进行发酵培养后测定D值，筛选最适无机盐离子。摇瓶发酵培养条件优化 温度对发酵的影响将猴头菌株接种于优化发酵培养基中，分别置于24、26、28、30和32 培养，5d后参照2.2的方法进行有效含量提取与检测，每组设2个重复，求平均
6、值，以确定最优的发酵温度。 转数对发酵的影响分别配制发酵培养基并接种，于2.4.1中优化的温度下进行培养，分别采用0、50、100、150、200和250 rpm的恒温摇床中培养，5d后参照2.2的方法进行有效含量提取与检测，每组设2个重复，求平均值，以确定最优的发酵转数。 初始接种量对发酵的影响分别按照体积分数为2%、4%、6%、8%和10%接种量接种于优化培养基中，摇床培养，5d后参照2.2的方法进行有效含量提取与检测，每组设2个重复，求平均值，确定接种量。摇瓶发酵培养条件优化 采用部分因子实验筛选对发酵影响显著因素采用部分因子实验设计，筛选对猴头菌发酵能力影响显著的因素。 验证试验用最优
7、的培养条件方案进行3次平行验证实验，以确定模型和优化方法的可靠性和准确性。高产猴头菌10L罐发酵工艺的研发 Plackett-Burman 设计实验 首先通过 Plackett-Burman 设计实验初步筛选培养条件中对于有效成分含量影响显著的因素。以温度、通气量、装液量、转速、种龄、初始 pH、接种量和发酵时间为实验因子，进行10因素2水平的Plackett-Burman设计实验。其中，发酵培养基配方按照2.3优化的结果配制。F检验检验模型显著性，t检验检验模型各项系数显著性，同时筛选出显著影响有效成分含量的培养基成分。 单因素实验 通过Plackett-Burman设计实验研究，得到影响产
8、量的关键因素，采用单因素实验进行优化。 验证实验 用最优的发酵工艺方案进行3次平行验证试验，以确定模型和优化方法的可靠性和准确性。一、立项目的二、技术路线三、研究内容五、项目进度安排六、项目完成预期成果目录项目特色 选用食品级葡萄糖及豆粕作为培养基的碳源及氮源，提高菌丝体干重的同时获得更高的经济效益，节省成本。 大豆具有蛋白质含量高、氨基酸组成基本平衡的特点，非常适合作为人类及动物的营养源，并且来源广泛，实验中用作蛋白源的豆粕一、立项目的二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果目录实验完成预期成果1.研究获得猴头菌菌株最佳发酵工艺，菌丝体产量提高2.找到在成本较低的情况下仍能出产较多产品、产品质量较好的发酵工艺 谢谢希望各位老师多多指点
