1、第十四章第十四章 维生素类药物的分析维生素类药物的分析 Analysis of VitaminsAnalysis of VitaminsPharmaceutical Analysisv 维生素：是维持人体正常代谢机能所必需维生素：是维持人体正常代谢机能所必需 的微量营养物质。的微量营养物质。v 脂溶性：脂溶性：VitAVitA、D D2 2、D D3 3、E E、K K1 1 等等v 水溶性：水溶性：VitBVitB族族(B(B1 1、B B2 2、B B6 6、B B1212)、VitCVitC、叶酸、烟酸、烟酰胺叶酸、烟酸、烟酰胺CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3R:-H R:-H
2、维生素维生素A A醇醇 -COCH-COCH3 3 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯 -COC-COC1515H H31 31 维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯第一节第一节 维生素维生素A A一、结构与性质一、结构与性质环己烯环己烯共轭多烯醇共轭多烯醇CH2OHVitA2CH2VitA3鲸醇鲸醇CH2OHCH2OHCH3脱水脱水去氢去氢二聚体二聚体酸酸醛醛环氧化物环氧化物、氧化剂、氧化剂紫外线、紫外线、VitAVitAVitAOO22 2、不稳定性：共轭多烯侧链不稳定性：共轭多烯侧链易被氧化，易被氧化，或有金属离子存或有金属离子存在时氧化在时氧化环氧化物环氧化物OCH2OHVitAVitA醛醛
3、HOCVitAVitA酸酸COOH紫紫红红蓝蓝色色3SbClVitACHClCHCl3 33.3.与三氯化锑发生呈色反应（鉴别、含量测定）与三氯化锑发生呈色反应（鉴别、含量测定）4.4.溶解性：不溶于水，易溶于有机溶剂和植物溶解性：不溶于水，易溶于有机溶剂和植物 油等。油等。条件：无水、无醇条件：无水、无醇紫紫红红蓝蓝色色 3SbClVitACHClCHCl3 3二、鉴别试验二、鉴别试验1.1.三氯化锑反应三氯化锑反应-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色+CH2-RCOOSbC l5紫红紫红VitAVitAHCl去水去水无水乙醇无水乙醇maxmax326nm326nm一个吸收峰一个吸收峰max
4、max350350390nm390nm三个吸收峰三个吸收峰2 2、UVUV法（法（BP 2000BP 2000）去水去水VitAVitA（VitAVitA3 3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitAVitA三、含量测定三、含量测定1.1.UVUV法法:三点校正法三点校正法（ChPChP 2010 2010 第一法）第一法）2.三氯化锑比色法三氯化锑比色法3.HPLC法法（ChPChP 2010 2010 第二法）第二法）1 1、为何要采用三点校正法？、为何要采用三点校正法？维生素维生素A A原料药中常混有杂质，如维生素原料药中常混有杂质，如维生素A A2 2、维生、维生素素A
5、 A3 3等，这些杂质在维生素等，这些杂质在维生素A A的最大吸收波长附近的最大吸收波长附近有吸收，采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。有吸收，采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。2 2、测定原理、测定原理1 1）在）在310310340nm340nm范围内，杂质吸收呈一直线，范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸收度下降。且随波长的增大吸收度下降。2 2）物质对光吸收呈加和性。）物质对光吸收呈加和性。三点校正法三点校正法328340316328 32176 AAA 4 4、测定方法、测定方法首先判断用哪个吸收度首先判断用哪个吸收度(A(A328328 or A or A328(328
6、(校正校正)）进行）进行含量计算。含量计算。第一法：第一法：供试液浓度为供试液浓度为9 915IU/ml15IU/ml，溶剂为环己，溶剂为环己烷，在烷，在300300、316316、328328、340340、360nm360nm五个波长处测五个波长处测定吸收度。定吸收度。1 1）最大吸收波长在）最大吸收波长在326326329nm329nm之间，计算吸收之间，计算吸收度比值度比值A Ai i/A/A328328，并与规定值相减，差值不超过，并与规定值相减，差值不超过0.020.02，则用，则用A A328328计算含量。计算含量。2 2）如果最大吸收波长在）如果最大吸收波长在32632632
7、9nm329nm之间，之间，5 5个波个波长下的差值有一个或几个超过长下的差值有一个或几个超过0.020.02，这时先计，这时先计算算A A328328（校正）：（校正）：A A328328（校正校正）=3.52=3.52（2 A2 A328 328-A-A316316-A-A340340）A A328328（校正）（校正）-A-A328328-100%100%A A328328 再计算再计算若所得的数值在若所得的数值在3%3%，则仍用，则仍用A A328328计算含量；计算含量；若所得的数值在若所得的数值在-15%-15%-3%-3%之间，则用之间，则用A A328328（校正）（校正）计计
8、算含量；算含量；若所得的数值小于若所得的数值小于-15%-15%或大于或大于+3%+3%，或最大吸收波，或最大吸收波长不在长不在326326329nm329nm之间，则应采用第二法测定。之间，则应采用第二法测定。第一法步骤小结：第一法步骤小结：最大吸收波长是否在：最大吸收波长是否在326-329nm间间 符合符合-，不符合，不符合第二法第二法：测定指定波长吸收度测定指定波长吸收度：计算（：计算（A指定波长指定波长/A328）比值）比值,并与规定值比较并与规定值比较 符合符合-，不符合，不符合：计算校正吸收度，并与实测值比较，判断是否需要校正计算校正吸收度，并与实测值比较，判断是否需要校正：计算
9、：计算328nm处样品的处样品的E 1cm1%：计算效价及标示量的百分含量：计算效价及标示量的百分含量维生素维生素A A醋酸酯的醋酸酯的换算：换算：IU/g=E 1cm1%1900 IU/丸丸 标示量标示量%=100%标示量标示量第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS处测处测、于于稀释至稀释至溶解溶解异丙醇异丙醇除去植物油的干扰除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐甘油和脂肪酸盐植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液挥干乙醚挥干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇%100AAAf325325)(325 校校正正
10、334310325325260455528156A.A.A.A 校正校正5 5、讨论、讨论 1 1）维生素）维生素A A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法推导而来：维生素式法推导而来：维生素A A醇的吸收度校正公式是用相似醇的吸收度校正公式是用相似三角形法推导而来。三角形法推导而来。2 2）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收）在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差
11、。因此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素A A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于两份。于两份。3 3）中国药典（）中国药典（20102010年版）收载的维生素年版）收载的维生素A A软胶囊采软胶囊采用三点校正法测定。用三点校正法测定。求本品中维生素求本品中维生素A A的的含量。含量。A300/A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A3
12、40/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 规定比值规定比值A300/A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 +0.010.01 0+0.02+0.04 605052305610628025232523340316328328.AAA.A 校正校正=%)3%15(%7.3%100AAAf328328)(328 校正校正%0.99%1001000008262.010020125022399.01900605.
13、0%100)ml100/g(C1900A%328 标示量标示量平均丸重平均丸重标示量标示量校正校正蓝蓝色色 3SbClVitAv 优点：简便、快速优点：简便、快速v 缺点：呈色不稳定缺点：呈色不稳定 （5 510s10s内）内）水分干扰（反应需要无水条件）水分干扰（反应需要无水条件）专属性差（有关物质的干扰）专属性差（有关物质的干扰）三氯化锑有腐蚀性（注意安全）三氯化锑有腐蚀性（注意安全）max max 618nm618nm620nm620nm2 2、三氯化锑比色法三氯化锑比色法(标准曲线法标准曲线法)第二节第二节 维生素维生素E E一、结构与性质一、结构与性质 名称：名称：消旋消旋生育酚醋酸
14、酯生育酚醋酸酯 母核：苯骈二氢吡喃衍生物母核：苯骈二氢吡喃衍生物 苯环上有一乙酰苯环上有一乙酰化化的酚羟基的酚羟基 侧链：脂肪烷烃侧链：脂肪烷烃OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458化学性质：化学性质：1 1、易溶于有机溶剂，不溶于水、易溶于有机溶剂，不溶于水2 2、UV:284nm(UV:284nm(乙醇乙醇)3 3、酯键易水解、酯键易水解4 4、对氧敏感，易氧化、对氧敏感，易氧化 OorOHHVitE醌醌型型化化合合物物生生育育酚酚 OHNO3VitE生生育育红红生生育育酚酚橙红色橙红色二、鉴别二、鉴别1.硝酸反应（硝酸反应（chp2010）取本品约取本品约
15、30mg30mg，加无水乙醇，加无水乙醇10ml10ml溶解后，加硝溶解后，加硝酸酸2ml2ml，摇匀，在，摇匀，在7575加热加热1515分钟，溶液应显橙分钟，溶液应显橙红色。红色。OOCH3C16H33H3CCH3O生育红（橙红色）生育红（橙红色）CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂红红色色生生育育醌醌对对生生育育酚酚联联吡吡啶啶 2FeKOHFeVitE3O2.2.三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应+23Fe3+2FeNNNN红色红色OOH3CCH3OHCH3C16H33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚对对-生育醌生
16、育醌+3FeO弱氧化剂弱氧化剂3.UV3.UV法法284nm254nm4.TLC4.TLC法法薄层板薄层板 硅胶硅胶G G展开剂展开剂 环己烷环己烷 -乙醚（乙醚（4 4 ：1 1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5105 5）VitE RVitE Rf f =0.7=0.7硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L0.01mol/L）指示剂：二苯胺（亮黄指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）生生育育醌醌对对生生育育酚酚 3422CeCe 2.2.试剂试剂1.1.原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈还原成硫酸亚铈 取本品取本品0.10g0.
17、10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml5ml溶解后，加二苯溶解后，加二苯胺试液胺试液1 1滴，用硫酸铈液（滴，用硫酸铈液（0.010.01mol/Lmol/L）滴定，消耗）滴定，消耗硫酸铈液（硫酸铈液（0.010.01mol/Lmol/L）不得过）不得过 1.0ml1.0ml。四、含量测定四、含量测定载气载气N N2 2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265265检测器检测器FIDFID内标内标正三十二烷正三十二烷色色谱谱条条件件适用性试验适用性试验 n 500，R2样品样品 dldl生育酚生育酚固定相固定相十八烷基硅烷键
18、合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇-水（水（49 49 ：1 1）检测波长检测波长292nm292nm R R2.62.6 RSD0.8%RSD0.8%色色谱谱条条件件利用生育酚的易氧化性利用生育酚的易氧化性二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）生生育育醌醌对对生生育育酚酚溶溶解解）（无无水水乙乙醇醇 SOCeSOHVitE3 3、铈量法、铈量法NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+ClCl-HClHCl第四节第四节 维生素维生素B B1 1一、结构与性质一、结构与性质 蓝色荧光蓝色荧光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH3.3.硫色素反应硫色素反应4.4.碱性：嘧啶环碱性：
19、嘧啶环 伯氨，噻唑环伯氨，噻唑环 季铵季铵v 可与酸成盐可与酸成盐v 与生物碱与生物碱v 含量测定含量测定 非水碱量法非水碱量法1.1.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2.UV:246nm(2.UV:246nm(盐酸液盐酸液)荧荧光光消消失失蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（环环合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH1.1.硫色素反应（维生素硫色素反应（维生素B1B1专属反应）专属反应）二、鉴别试验二、鉴别试验 4242HgIHBHgIK 淡淡黄黄 2KIIIHIB2 红红色色H+白白色色硅硅钨钨酸酸 H+OH4WO12OHSiOB2322
20、2 2.2.沉淀反应沉淀反应白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 H+3 3、硝酸铅反应、硝酸铅反应4 4、氯化物反应、氯化物反应三、含量测定三、含量测定1.1.非水溶液滴定法（非水溶液滴定法（ChP2010ChP2010）HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝（紫红（紫红天蓝）天蓝）加入醋酸汞的目的加入醋酸汞的目的消除氢卤酸盐对非水滴消除氢卤酸盐对非水滴定的干扰。定的干扰。2.UV2.UV法法246nm3.3.硫色素荧光法硫色素荧光法荧荧光光硫硫色色素素异异丁丁醇醇铁铁氰氰化化钾钾 VitBNaOH自学自学-维生素维生素D:D:1.1.了解杂质检查中麦角甾醇的检
21、查；了解杂质检查中麦角甾醇的检查；2.2.初步掌握正相高效液相色谱法的应用。初步掌握正相高效液相色谱法的应用。654321OOHHOO C OHHCH2OHL L抗坏血酸抗坏血酸第五节第五节 维生素维生素C C一、结构与性质一、结构与性质1.1.强还原性强还原性：烯二醇结构：烯二醇结构显显色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚类类脱脱水水 H蓝蓝色色糠糠醛醛吡吡咯咯脱脱水水 HVitC502.2.结构与糖类相似，具糖的性质结构与糖类相似，具糖的性质-糖类的显色反应糖类的显色反应3.UV3.UV特征特征(243nm)(243nm)4.4.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。溶解性：易溶于水，水溶液呈酸
22、性。OOHHOO C OHHCH2OH1234565.5.酸性：一元酸酸性：一元酸C3OH，pKa=4.17C2OH，pKa=11.57单钠盐单钠盐32CONa酮酮酸酸盐盐水水解解 NaOH6.6.水解反应：水解反应：与碱反应与碱反应去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸OVitC二、鉴别试验二、鉴别试验1.1.与氧化剂的反应与氧化剂的反应（银镜）（银镜）黑黑 AgAgNOVitC1)1)与与AgNOAgNO3 3反应反应(ChP2010)(ChP2010)2)2)与与2 2，6-6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP2010)(ChP2010)无无色色二二氯氯靛靛酚酚，VitC62氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红
23、色 H蓝色蓝色 OHOHOH（还原型）（还原型）红红碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜 OCuVitC3)3)与碱性酒石酸铜反应（与碱性酒石酸铜反应（USPUSP）4)4)与与KMnOKMnO4 4反应反应 MnKMnOVitC2.2.糖类的反应糖类的反应OCHO糠醛：糠醛：3.UV3.UV0.01mol/L HCL液中，max243nm IIVitCH去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸2v 指示剂：淀粉指示液指示剂：淀粉指示液三、含量测定三、含量测定1.1.碘量法（碘量法（ChP2010）原理原理 取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加新沸过，精密称定，加新沸过的冷水的冷水100ml100ml与稀醋酸与
24、稀醋酸10ml10ml使溶解，加淀粉使溶解，加淀粉指示液指示液1ml1ml，立即用碘滴定液（，立即用碘滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，至溶液显滴定，至溶液显蓝色蓝色，在，在3030秒内不褪。每秒内不褪。每1ml1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8O O6 6方法方法酸性环境：减慢酸性环境：减慢VitCVitC被被O O2 2氧化速度氧化速度新沸冷新沸冷H H2 2O O：赶走水中：赶走水中O O2 2 立即滴定：减少立即滴定：减少O O2 2的干扰的干扰附加剂干扰的排除：附加剂干扰的排
25、除：讨论讨论片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O52 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，VitC原理原理方法方法空空样样二氯靛酚液二氯靛酚液空白空白样品样品VVHAcHPO 3自身指示剂自身指示剂终点法终点法蓝蓝色色玫玫瑰瑰红红 OHH无无色色还还原原 讨论讨论（1 1）酸性环境（）酸性环境（HPOHPO3 3-HAc-HAc）：）：稳定稳定VitCVitC（2 2）快速滴定（）快速滴定（2min2min内内）：）：防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3 3）剩余比色测定）剩余比色测定（4 4）缺点）缺点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强 （5 5）专属性比碘量法高，多用于维生素）专属性比碘量法高，多用于维生素C C 制剂的分析。制剂的分析。不稳定不稳定习习 题题生育酚生育酚 维生素维生素C C是是 元弱酸，具有强元弱酸，具有强 性，性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的 剂。剂。一一还原还原抗氧抗氧
