1、掌握中药制剂含量测定的目的特点掌握中药制剂含量测定的目的特点掌握含量测定样品处理的作用掌握含量测定样品处理的作用掌握方法学考察试验内容掌握方法学考察试验内容熟悉色谱法分离净化样品常用填料及其特点熟悉色谱法分离净化样品常用填料及其特点n用适当的化学方法或仪器分析方法对制剂中有效成分或有效部位进行的定量分析。n以其测定结果是否符合药品标准的规定来判断药品的优劣，是控制和评价药品质量的重要方法。中药制剂含量测定的定义中药制剂含量测定的特点含量测定内容含量测定内容中药制剂中药制剂化学药品化学药品对象不同对象不同供试品溶液制备供试品溶液制备待测成分确定待测成分确定组成及成分复杂组成及成分复杂方法繁琐，大
2、多需要净化方法繁琐，大多需要净化分离分离先根据中医药理论选择药先根据中医药理论选择药味，再综合选择待测成分味，再综合选择待测成分成分单一成分单一方法简单方法简单成分明确，一成分明确，一般选择主要成般选择主要成分分中药制剂与化学药品含量测定区别中药制剂与化学药品含量测定区别第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 作用：作用：u将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样。便于分析测定的稳定试样。u除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。性和准确度。u富集浓缩或进行衍生化，以测
3、定低含量被测成富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。以提高方法的选择性。u使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。步骤：步骤：n样品的粉碎样品的粉碎n样品的提取样品的提取n样品的分离净化样品的分离净化第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 目的：目的：1.保证所取样品均匀而有保证所取样品均匀而有代表性代表性，提高测定结果，提高测定结果的精密度和准确度。的精密度和准确度。2.加速被测定组分的加速被测定组分的提取完全。提取完全。样品的粉碎样品
4、的粉碎第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 注意：1.避免过细2.避免样品受污染3.避免粉尘飞散及挥发性成分的损失4.避免丢弃不易通过筛孔的部分颗粒设备：粉碎机、研钵、高速匀浆机、玻璃匀浆器细粉：全部通过5号筛（80目），并含能过6号筛（100目）不少于95的粉末样品的粉碎样品的粉碎第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n冷浸法冷浸法 n回流提取法回流提取法 n连续回流提取法连续回流提取法 n超声法超声法 n超临界流体提取法超临界流体提取法 关键关键提取完全提取完全样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 称取一定量样品置于带塞容器内，
5、摇匀后放置，浸称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀后放置，浸泡提取，溶剂用量为样品重量的泡提取，溶剂用量为样品重量的10105050倍倍，并称重。，并称重。浸泡时间浸泡时间12122424小时小时，浸泡期间应注意经常振摇。，浸泡期间应注意经常振摇。取浸泡后的溶液测定有效成分。取浸泡后的溶液测定有效成分。n冷浸法冷浸法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 浸泡提取法中供试品的制备方式浸泡提取法中供试品的制备方式1.1.部分测定法（等量法）部分测定法（等量法）：即将浸泡后的溶液，用即将浸泡后的溶液，用适宜滤器滤过，精密量取一定体积，进行测定适宜滤器滤过，精密量取一定
6、体积，进行测定注：此法不适宜挥发性较大的提取溶剂注：此法不适宜挥发性较大的提取溶剂n冷浸法冷浸法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 2.2.全部测定法（即总量测定法）：全部测定法（即总量测定法）：将浸泡后的溶液滤将浸泡后的溶液滤过，滤渣充分用溶剂洗涤过，滤渣充分用溶剂洗涤至提取完全至提取完全，合并滤液及洗液，合并滤液及洗液，浓缩或蒸干浓缩或蒸干，残留物用另一溶剂溶解，残留物用另一溶剂溶解，定量转入量瓶中定量转入量瓶中，稀释至刻度，摇匀，进行测定稀释至刻度，摇匀，进行测定 注意：注意：转移完全转移完全n冷浸法冷浸法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品
7、的处理含量测定样品的处理 灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定 取本品适量，研细，取约取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚（60-90）4ml，浸泡，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤纸挥去溶剂，放回锥形小时，滤过，滤渣及滤纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（1 10）15ml，摇匀，密塞，摇匀，密塞，称定重量，浸泡称定重量，浸泡12小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1 10）补足减失的重量，
8、摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。特点特点n优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少取杂质少n缺点：费时（缺点：费时（12-24 h）、费溶剂（）、费溶剂（10-50倍）倍）n冷浸法冷浸法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 将冷浸法中的带塞容器换成回流装置，将冷浸法中的带塞容器换成回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热回用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热回流提取，其余操作方法同冷浸法。流提取，其余操作方法同冷浸法。万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定万应胶囊
9、（黄连等）中盐酸小檗碱测定在HCl-70%乙醇溶液，加热回流1hn回流提取法回流提取法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n回流提取法回流提取法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 1 1、提取效率高于冷浸法；、提取效率高于冷浸法；2 2、每次提取时间为、每次提取时间为0.50.52 2小时小时，直至提取，直至提取 完全为止。完全为止。1 1、提取杂质较多；、提取杂质较多；2 2、不适于对热不稳定或具有挥发性的成分。、不适于对热不稳定或具有挥发性的成分。优点优点缺点缺点第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品
10、置索氏提取器中，利用遇热可以挥发样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进行反复提取（相当于总是在使用的溶剂进行反复提取（相当于总是在使用新鲜溶剂提取），一般提取新鲜溶剂提取），一般提取数小时数小时方可完方可完全。全。保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定+甲醇，加热回流至提取液无色为止甲醇，加热回流至提取液无色为止n连续回流提取法连续回流提取法样品的提取样品的提取优点：优点：1 1）无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管，就可）无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管，就可回收溶剂，再用适宜溶剂溶解，定容，进行测定。回收溶剂，再用适宜溶剂溶解，定容，进行测定。2 2）提取效率高，所
11、需溶剂少，提取杂质少。）提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少。缺点：缺点：受热易分解的成分不宜使用。受热易分解的成分不宜使用。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n连续回流提取法连续回流提取法样品的提取样品的提取第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器振荡器（超声波清洗器）中进行（超声波清洗器）中进行提取。一般样品提取。一般样品3030分钟分钟内即可完成，最多不超过内即可完成，最多不超过1 1小时。小时。保济丸（厚朴等）中厚朴酚测定保济丸（厚朴等）中厚朴酚测定+石油醚（石油醚（3
12、0-60），超声处理（功率，超声处理（功率500W，频率，频率33kHz）2次，每次次，每次30minn超声提取法超声提取法样品的提取样品的提取优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中提高提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）提高提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分子化合物的降解和解聚合作用等）。子化合物的降解和解聚合作用等）。注明超声波的频率、功率，以保证重现性注明超声波的频率、功率，以保证重现性第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n超声提
13、取法超声提取法样品的提取样品的提取以超临界流体作溶剂的样品提取新技术。以超临界流体作溶剂的样品提取新技术。当压力和温度超过气体的临界点时所形成的单一相态当压力和温度超过气体的临界点时所形成的单一相态超临界流体超临界流体特殊的物质状态特殊的物质状态密度密度 液体液体 溶解能力强溶解能力强粘度粘度 气体气体 传质快，有利于待测组分的扩散传质快，有利于待测组分的扩散表面张力几乎为表面张力几乎为 0 渗透性好渗透性好密度受压力、温度的影响大密度受压力、温度的影响大 改变对溶质的溶解能力改变对溶质的溶解能力第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n超临界流体萃取法（超临界流体萃取法（SFES
14、FE）样品的提取样品的提取 最常用的最常用的SFSF是是COCO2 2，它的性质稳定，使用安全，它的性质稳定，使用安全，价格低廉，临界点低（价格低廉，临界点低（Tc=31Tc=31和和Pc=7.4MPaPc=7.4MPa），），易于操作。易于操作。加入甲醇、氯仿、苯等改变极性加入甲醇、氯仿、苯等改变极性 提取不同极提取不同极性的成分性的成分第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n超临界流体萃取法（超临界流体萃取法（SFESFE）样品的提取样品的提取SFESFE具有优点：具有优点：Z 速度快速度快Z 萃取效率高、萃取效率高、Z 选择性较高、选择性较高、Z 节省溶剂、节省溶剂、Z 可
15、避免使用易燃，有毒的有机溶剂可避免使用易燃，有毒的有机溶剂 SFESFE不仅常用于热不稳定成分或挥发性成分的萃取，而且不仅常用于热不稳定成分或挥发性成分的萃取，而且也越来越多地用于热稳定性成分的萃取。也越来越多地用于热稳定性成分的萃取。缺点：对设备要求高。缺点：对设备要求高。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 n超临界流体萃取法（超临界流体萃取法（SFESFE）样品的提取样品的提取n沉淀法沉淀法 n蒸馏法蒸馏法 n液液-液萃取法液萃取法 A 直接萃取法直接萃取法 B 离子对萃取法离子对萃取法 n色谱法色谱法n消化法消化法 关键关键保留有效成分保留有效成分第一节第一节 含量测定样
16、品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化原则：从提取液中除去对测定有原则：从提取液中除去对测定有干扰的杂质，而又不损失被测定干扰的杂质，而又不损失被测定成分成分依据：被测定成分和杂质在理化依据：被测定成分和杂质在理化性质上的差异，结合测定方法的性质上的差异，结合测定方法的要求要求第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n沉淀法沉淀法 原理：它是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离原理：它是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离沉淀或保留溶液以得到精制的方法。沉淀或保留溶液以得到精制的方法。这种方法须注意：这种方法须注意：1 1）
17、过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法除去；）过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法除去；2 2）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分不应产生共沉）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分不应产生共沉淀而损失；淀而损失；3 3）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或直接用重量法测定。直接用重量法测定。复方益母草口服液中水苏碱的含量测定复方益母草口服液中水苏碱的含量测定利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。分有机碱生成难溶于水的配合
18、物与其它杂质分离。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n蒸馏法蒸馏法原理：利用某些被测成分具有挥发性原理：利用某些被测成分具有挥发性,收集馏出液进行含量测定收集馏出液进行含量测定.目前以水蒸气蒸馏法应用较多。目前以水蒸气蒸馏法应用较多。1 1）可分为共水蒸馏法（即直接加热法）、通水蒸汽蒸馏法和）可分为共水蒸馏法（即直接加热法）、通水蒸汽蒸馏法和水上蒸馏法。如中药制剂中的挥发油，某些小分子生物碱（麻黄水上蒸馏法。如中药制剂中的挥发油，某些小分子生物碱（麻黄碱、槟榔碱）及丹皮酚等，都可用蒸馏法提取和分离净化。碱、槟榔碱）及丹皮酚等，都可用蒸馏法提取和分离
19、净化。2 2）为了使挥发性成分更完全地蒸馏出来，有时也可用盐析作）为了使挥发性成分更完全地蒸馏出来，有时也可用盐析作用，即在蒸馏液中加入一定量的无机盐，常用用，即在蒸馏液中加入一定量的无机盐，常用NaCl NaCl、NaSO4NaSO4、MgSO4MgSO4等。等。例例 六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定 取本品约取本品约2g，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约约450ml，置，置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度。量瓶中，加水稀释至刻度。274nm波长处波长处测定吸收度测定吸收度。v直接萃取法直接萃取法v原理：利用试样中
20、被测成分与干扰成分在有机溶剂中的原理：利用试样中被测成分与干扰成分在有机溶剂中的溶解溶解度不同度不同，通过多次萃取来达到分离净化的目的。，通过多次萃取来达到分离净化的目的。萃取剂的选择萃取剂的选择 如苯、氯仿或乙醚、乙酸乙酯、如苯、氯仿或乙醚、乙酸乙酯、正正丁醇等丁醇等多次萃取（多次萃取（3-43-4次）次）调整水相酸度，提取有机酸、有机碱调整水相酸度，提取有机酸、有机碱(非离子化非离子化)第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n液液萃取法液液萃取法常用的是有机溶剂常用的是有机溶剂直接萃取法直接萃取法和和离子对萃取法离子对萃取法。BH+（水相）+In-
21、(水相)BH+In-（水相）BH+In-（有机相）适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取（生物适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取（生物碱）碱）水相酸度的控制 离子对试剂的选择v离子对萃取法离子对萃取法原理：在适当原理：在适当pH中，某些有机酸（碱）性物质形成的离子与带相反电荷的离子中，某些有机酸（碱）性物质形成的离子与带相反电荷的离子定量地结合成为弱极性的离子对，易溶于有机溶剂，使之萃取分离。定量地结合成为弱极性的离子对，易溶于有机溶剂，使之萃取分离。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n液液萃取法液液萃取法溴百里酚蓝溴百里酚蓝溴甲酚绿溴甲酚绿n
22、分离的原理：分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱凝胶色谱n按操作方式：按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱柱色谱、薄层色谱、纸色谱n微柱色谱，微柱色谱，也称固相萃取或液也称固相萃取或液固萃取（固萃取（LSELSE）柱的大小：长柱的大小：长5 515cm15cm，内径，内径0.50.51cm 1cm 第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法当目标当目标物与填料极性相似物与填料极性相似时，样品流过柱后，目标物在填料上有时，样品流过柱后，目标物在填料上有较好的较好的保留保留，而极性与填料相差较远
23、的杂质直接流出，再用适当，而极性与填料相差较远的杂质直接流出，再用适当洗脱液把目标物洗脱、收集，分析；或使洗脱液把目标物洗脱、收集，分析；或使杂质保留杂质保留于柱上，直接于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。洗脱被测成分进行测定。中药制剂教研室n硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝 n键合相硅胶键合相硅胶 n大孔树脂大孔树脂 n聚酰胺聚酰胺 n硅藻土、纤维素硅藻土、纤维素 n离子交换树脂离子交换树脂 第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法柱色谱常用的柱色谱常用的填料填料 第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色
24、谱法色谱法硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝 硅胶作用机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用。非极性或极性低的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。特点：特点：通常适于通常适于酸性和中性物质酸性和中性物质的分离；如分离的分离；如分离碱碱性物质性物质，可在展开剂中，可在展开剂中加入少量稀碱。加入少量稀碱。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法硅胶、氧化铝硅胶、氧化铝 氧化铝分离机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用碱性氧化铝碱性氧化铝适于适于碱性和中性物质碱性和中性物质的分离的分离酸性氧化铝酸性氧化铝适于分析适于
25、分析酸性和中性物质酸性和中性物质中性氧化铝能将中性氧化铝能将黄酮类黄酮类成份吸附在柱上，可用于生成份吸附在柱上，可用于生物碱、苷的分离。物碱、苷的分离。八宝坤顺丸八宝坤顺丸中国药典中国药典20052005年版一部，年版一部，P311P311 对照品溶液的制备 取芍药苷芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，剪碎，取约2g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，通过中性氧化铝柱（100200目，2g，内径1cm，用50
26、%甲醇湿法装柱），收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至近刻度，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液10ul与供试品溶液10 15ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每丸含白芍以芍药苷计，不得少于2.6mg。中药制剂教研室第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法键合相硅胶键合相硅胶 借助化学反应方法将固定液的官能团键合在硅胶的表借助化学反应方法将固定液的官能团键合在硅胶的表面而构成面而构成键合相硅胶键合相硅胶。有机硅烷与硅胶表面化学键合反应，形成的有机硅烷与硅胶表面化学键合反应，形成的-Si-O-
27、Si-O-Si-C-Si-C-键是对溶剂、热和化学稳定的结构。键是对溶剂、热和化学稳定的结构。常用的有十八烷基键合相键合相硅胶（简称常用的有十八烷基键合相键合相硅胶（简称C18C18或或ODSODS）第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法大孔树脂大孔树脂极性大孔树脂极性大孔树脂：为丙稀酰胺聚合物，：为丙稀酰胺聚合物，对极性化合对极性化合物有相对强的吸附力物有相对强的吸附力非极性大孔树脂非极性大孔树脂：为苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，：为苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，对对非极性水溶性成分有吸附力非极性水溶性成分有吸附力特点：表面积大，传质速率较高，
28、具有不同的极性特点：表面积大，传质速率较高，具有不同的极性及适于吸附较大分子及适于吸附较大分子测定复方归芪剂中的黄芪甲苷测定复方归芪剂中的黄芪甲苷用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用30%乙醇洗脱乙醇洗脱黄芪甲苷。黄芪甲苷。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法聚酰胺聚酰胺机制：主要通过与溶质机制：主要通过与溶质形成氢键而产生吸附作用形成氢键而产生吸附作用用于用于含酚、酸、醌含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离。类药物样品液的净化分离。测定黄酮时，用样品的乙醇提取液上聚酰胺柱，水洗去部分杂质，测定黄酮时，
29、用样品的乙醇提取液上聚酰胺柱，水洗去部分杂质，以以95%乙醇洗脱总黄酮后测定。乙醇洗脱总黄酮后测定。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法硅藻土、纤维素硅藻土、纤维素 亲水性填料亲水性填料机制：机制：分配作用分配作用应用：多以水基质液为固定相，与水不混溶的有机应用：多以水基质液为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相，较亲脂的成分从固定相转移到流动溶剂为流动相，较亲脂的成分从固定相转移到流动相，而被洗脱。相，而被洗脱。萃取率较高（一般大于萃取率较高（一般大于80%80%），），无浓集作用，但洗脱剂用量较大（一般大于无浓集作用，但洗脱剂用量较
30、大（一般大于5ml5ml）第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法离子交换树脂离子交换树脂 特点：可除去样品中的离子，防止组分分解，特点：可除去样品中的离子，防止组分分解，用于萃取样品液中可解离化合物用于萃取样品液中可解离化合物弱酸性药物：中性和碱性条件下用阴离子交弱酸性药物：中性和碱性条件下用阴离子交换树脂柱，水及有机溶剂洗脱后，酸性溶液换树脂柱，水及有机溶剂洗脱后，酸性溶液洗目标成分洗目标成分例 益母草流浸膏中盐酸水苏碱的鉴别 取本品10 ml，水浴蒸干，残渣加水10ml使溶解，加稀盐酸调节pH值至12，加在强酸性阳离子交换树脂柱（73
31、2Na-型，内径0.9cm，柱长12cm）上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以2mol/L氨溶液40ml洗脱，收集洗脱液作为供试品溶液。离子型化合物离子型化合物NOO第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n色谱法色谱法离子交换树脂离子交换树脂 n湿化消化湿化消化 强酸腐蚀强酸腐蚀 A 硝酸硝酸高氯酸法高氯酸法 B 硝酸硝酸硫酸法硫酸法 C 硫酸硫酸-硫酸盐法硫酸盐法n干法消化干法消化 高温炽灼高温炽灼测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元素第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n消化法消化法n硝酸硝
32、酸-高氯酸法：高氯酸法：适用于血、尿、生物组织等生物样品和含适用于血、尿、生物组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏，经破坏后所得无机离子均为动植物药制剂的破坏，经破坏后所得无机离子均为高价态离高价态离子子，对含氮杂环类有机物破坏不够完全。，对含氮杂环类有机物破坏不够完全。n硝酸硝酸-硫酸法：硫酸法：适用于大多数有机物质的破坏，无机金属离适用于大多数有机物质的破坏，无机金属离子均氧化成子均氧化成高价态。高价态。与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采用此法。测定，不宜采用此法。n硫酸硫酸-硫酸盐法：硫酸盐法：经本法破坏所得金属离子，多为经本法破坏所得金属离
33、子，多为低价态低价态。常用于含砷或锑的有机样品的破坏。常用于含砷或锑的有机样品的破坏。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n消化法消化法湿法消化法湿法消化法 第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n消化法消化法干法消化法干法消化法 将有机物将有机物灼烧灰化灼烧灰化以达分解的目的，本法不适用于含以达分解的目的，本法不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机样品的破坏。易挥发性金属（如汞、砷等）有机样品的破坏。将适量样品置于坩锅中，常加无水将适量样品置于坩锅中，常加无水Na2CO3或轻质或轻质MgO等以助等以助灰化
34、，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉灰化，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全即可。中灼烧，使其灰化完全即可。第一节第一节 含量测定样品的处理含量测定样品的处理 样品的分离净化样品的分离净化n消化法消化法干法消化法干法消化法 应用本法时要注意以下几个问题：应用本法时要注意以下几个问题：1）灼烧温度在）灼烧温度在420以下，以免某些被测金属化合物的挥发。以下，以免某些被测金属化合物的挥发。2）检查灰化是否完全，可将灰分放冷后，加入稍过量的稀）检查灰化是否完全，可将灰分放冷后，加入稍过量的稀HCl-水（水（1:3）或硝酸）或硝酸-水（水（1:3）溶
35、液，振摇。若呈色或有不溶有）溶液，振摇。若呈色或有不溶有机物，可于水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼烧。机物，可于水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼烧。3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证分析方法验证的目的分析方法验证的目的 是证明采用的方法适合于相应的检测要求。是证明采用的方法适合于相应的检测要求。需验证的分析项目需验证的分析项目 鉴别试验、杂质检查、原料药及制剂中有效成分鉴别试验、杂质检查、原料药及制剂中有效成分含量测定及其它成分测定含量测定及其它成分测定
36、验证内容验证内容 准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性、准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性、检测限、定量限、检测限、定量限、指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，表示分析方法测量的正确性。用回收率（%）表示。方法：回收试验法 加样回收试验法 第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证准确度（accuracy）空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。%100AMR空白回收率u回收试验（化学药品）第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证准确度（准确度（accuracy）已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M
37、%100 APMRu加样回收试验（中药）加样回收试验（中药）第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证准确度（准确度（accuracy）规定的范围内，取同一浓度的供试品，用6个测定结果进行评价或设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9次测定结果评价 第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证准确度（准确度（accuracy）编号编号取样量取样量（ml）原有量原有量（g）加入量加入量（g）测得量测得量（g）回收率回收率（%）平均回收率平均回收率（%）RSD（%）高高13134.1137.808277.422104.0199.022.97高高23134.11
38、37.808266.54196.11高高33134.1137.808273.726101.32中中1289.491.868180.06698.69中中2289.491.868182.147100.96中中3289.491.868177.55495.96低低1144.745.93489.61297.78低低2144.745.93488.56695.50低低3144.745.93491.039100.88测定次数测定次数 取样量取样量（g）制剂中淫制剂中淫羊藿苷量羊藿苷量(mg)加入淫羊加入淫羊藿苷量藿苷量(mg)测得淫羊测得淫羊藿苷量藿苷量(mg)回收率回收率(%)RSD%10.1098 1.7
39、964 1.3088 3.0842 98.40 1.9%20.1013 1.6574 1.3088 2.9598 99.51 30.0985 1.6107 1.6360 3.1842 96.18 40.1071 1.7513 1.6360 3.4238 102.23 50.1022 1.6712 1.9632 3.6307 98.81 60.0986 1.6123 1.9632 3.5294 98.65 回收率回收率(%)=测得淫羊藿苷量测得淫羊藿苷量(mg)制剂中淫羊藿苷量制剂中淫羊藿苷量(mg)100%加入淫羊藿苷量加入淫羊藿苷量(mg)取已知含量的样品取已知含量的样品(16.361mg/
40、g)6份，每份约份，每份约0.1g，精密称定，置具塞锥形，精密称定，置具塞锥形瓶中，每份依次精密加入淫羊藿苷对照品溶液瓶中，每份依次精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.3272mg/ml)4、4、5、5、6、6ml，再加甲醇至，再加甲醇至100ml，照拟定的供试品制备方法制备加样回收供试品溶液，照拟定的供试品制备方法制备加样回收供试品溶液，精密吸取精密吸取10l注入色谱仪中，测定峰面积，按下式计算回收率，结果见下表。注入色谱仪中，测定峰面积，按下式计算回收率，结果见下表。系指在规定测试条件下，系指在规定测试条件下，同一均匀同一均匀供试品，经供试品，经多样取样测定所得结果之间接近的程度。多样取样测定
41、所得结果之间接近的程度。精密度是考察分析方法在不同的时间、操作人精密度是考察分析方法在不同的时间、操作人员、实验室，所获得结果之间的重现性和重复员、实验室，所获得结果之间的重现性和重复性。性。在药物分析中，常用在药物分析中，常用相对标准差（相对标准差（RSDRSD）表示。表示。第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证精密度（精密度（precision）偏差（偏差（d）：）：测量值与平均值之差测量值与平均值之差xxdi标准偏差（标准偏差（SDSD）12nxxSi相对标准偏差（相对标准偏差（RSD）也称变异系数（也称变异系数（CV）%100 xSRSD第二节第二节 含量测定方法的验证含量
42、测定方法的验证精密度（精密度（precision）q重复性(repeatability)q中间精密度（mid-precision)q重现性(reproducibility)第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证精密度（精密度（precision）定义：定义：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。要求：在规定的范围内，取同一浓度的供试品，至少测6次进行评价或设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9次测定结果评价第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证精密度（精密度（precision）编号编号取样量（取样量（ml）峰面积峰面积平均峰面积
43、平均峰面积 测得量（测得量（g）含量含量(g/ml)平均值平均值(g/ml)RSD(%)14.004.00894.21088894.21088898.50323896.357055896.357055182.093182.09345.5245.5244.701.0924.00867.93341867.21960867.576505867.576505176.246176.24644.0644.0634.00876.81049878.23889877.52469877.52469178.267178.26744.5744.5744.00885.51129883.42120884.46624588
44、4.466245179.678179.67844.9244.9254.00879.37677877.07513878.22595878.22595178.410178.41044.644.664.00875.81073877.34985876.58029876.58029178.076178.07644.5244.52取同一批号（取同一批号（20100701）的本品）的本品4 ml，精密量取，平行取，精密量取，平行取6份，依法制份，依法制成供试品溶液，分别量取成供试品溶液，分别量取20l各供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪各供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪测定，计算欧前胡素含量及相对标准
45、偏差，结果见表，表明方法重复性好。测定，计算欧前胡素含量及相对标准偏差，结果见表，表明方法重复性好。同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。已有重现性验证，不需验证中间精密度重现性只有在该分析方法将被法定标准采用时做第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证精密度（精密度（precision）实验次数实验次数 峰面积值峰面积值 平均峰面积值平均峰面积值RSD（%）1296661 295841.2 0.24 2295460 3295382 4295117 5296586 精密吸取淫羊藿苷对照品液精密吸取淫羊藿苷对照品液(23
46、.2g/ml)10l注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，连续进样连续进样5次，测得淫羊藿苷峰面积的相对标准偏差，结果见下表。次，测得淫羊藿苷峰面积的相对标准偏差，结果见下表。n指在其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。n反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力；n指该法用于复杂样品分析时是否受到相互干扰程度的度量。n常用阴性对照法。第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证专属性（专属性（specificity）A:阴性对照溶液色谱图；B:欧前胡素对照品溶液色谱图；C:供试品溶液色谱图min0510152025mAU010203040
47、50AB*DAD1 A,Sig=300,16 Ref=off(F:严教授22010072010072008.D)C第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证专属性（专属性（specificity）第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证线性线性(linearity)与范围与范围(range)设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。直接呈正比关系的程度。指达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适指达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间，用的高、低限浓度或量的区间，表示：表示：mg/Lmg/
48、L第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证线性线性(linearity)与范围与范围(range)线性与范围可通过绘制标准曲线来确定。线性与范围可通过绘制标准曲线来确定。n应为57，用浓度c对峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，r0.999n 确定样品浓度与峰面积/峰高是否呈线性关系n 确定线性的范围n 直线是否通过原点qqg)峰面积均值0.08106201.02885201.0119200.994900.24318605.17249609.8347614.496890.32424805.34619804.7837804.221250.486361211.54919
49、1211.23081210.912350.648481617.023321614.73281612.442380.810602006.691772006.55982006.42786第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证线性线性(linearity)与范围与范围(range)对照品进样量（g）0.0928 0.1856 0.2784 0.3712 0.464 色谱峰面积 126195 238932 366405 482771 603967 Y=1292438.5776X+3839.1000 r=0.9998 样品进样量在样品进样量在0.09280.464g范围内，淫羊藿苷峰面积范围
50、内，淫羊藿苷峰面积与进样量呈现良好的线性关系。与进样量呈现良好的线性关系。精密吸取淫羊藿苷对照品溶液精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(0.0464mg/ml)2、4、6、8、10l注入液相色谱仪，按拟定的色谱条件进行测定，记录峰面积，注入液相色谱仪，按拟定的色谱条件进行测定，记录峰面积，测定结果下表。测定结果下表。n指测定条件有小的变动时，测定结果不受影指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。响的承受程度，为常规检验提供依据。n如果条件要求苛刻，应在方法中写明第二节第二节 含量测定方法的验证含量测定方法的验证耐用性（耐用性（robustness）v 变动因素：测试液的
