1、生 化 培 训(理论讲解)(一)生化分析仪的原理、结构 入射光透射光比色杯光学传感器量程表灯泡滤光片单波长的光生化试剂检测依据的原理：LambertBeer定律：吸光度的变化与样品浓度成正比。A=KCLA 吸光度 K 摩尔消光系数C摩尔浓度 L吸收杯的内径长度（cm）0.3m1mm800nm380nm10nm0.1nm伦琴射线射线 （X射线）紫外线 可见光 红外线 微波 无线电波1m=103mm=106m=109nm特康生化分析仪用到的波长：8个波长：340nm、405nm、450nm、510nm、546nm、578nm、620nm、660nm9个波长：340nm、405nm、450nm、51
2、0nm、546nm、578nm、620nm、660nm、690nm波长波长的选择可见绿色带黄深黄桔红深红深紫青紫紫蓝蓝色带绿绿色带蓝深绿无色紫外光，不可见200400深紫深红桔红深黄绿色带黄暗绿绿色带蓝蓝色带绿紫蓝青紫被测溶液颜色光的颜色750800610750595610560580580595500560490500480490435480400435波长(nm)生化分析仪的种类1、连续流动式(流动比色池):（技术已淘汰）2、离心式:（技术已淘汰）3、分立式生化分析仪：模仿手工操作，把试剂和样本加在比色杯中，搅拌，比色后抽出反应液并清洗。生化分析仪的结构1、软件操作系统；2、加样系统；3、
3、恒温系统；4、光学系统；5、搅拌装置；6、清洗系统；7、纯水供应方式。1、软件操作系统编辑检测项目的参数执行测试功能查询测试结果打印报告单诊断仪器故障 2、加样系统：试剂臂、样品臂试剂针：用于从试剂瓶中吸取试剂加入到比色杯中。样品针：用于从样品杯中吸取样品加入到比色杯中。3、比色槽恒温系统：水浴：优点：温度恒定，不易受环境温度影响。缺点：升温缓慢，维护麻烦，需经常换水，加防腐剂。空气浴：优点：升温迅速，不需维护。缺点：温度易受环境温度影响。4、光学系统1）光源2）分光方式3）单色器4）比色杯5）光导纤维6）光电转换器1）光源：卤钨灯）光源：卤钨灯2）分光方式）分光方式（现在都是使用后分光）：（
4、现在都是使用后分光）：前分光：检测光先经过单色器，再经过比色杯。后分光：检测光先经过比色杯，再经过单色器。2）单色器：）单色器：光栅和滤光片光栅优点：波长数量不受限制，吸光度更精确。缺点：成本高，不易维修。滤光片优点：成本低，维修方便。缺点：波长数量受到一定限制，一般不超过10个波长。3）比色杯）比色杯固定式比色杯：可循环使用优点：比色杯反复使用，降低成本，杯空白可以检测并保留在电脑里。操作方便，无需操作人员添加比色杯。缺点：如果清洗不好，会造成交叉污染。一次性比色杯：优点：没有交叉污染，耗水量低，不需要清洗系统，仪器制造简单。缺点：增加检测成本，操作麻烦，需人工添加比色杯，比色杯使用后废弃，
5、造成更多的垃圾，不利于环保。4）光导纤维：传递光 8个波长：1个光孔分成8束光纤。9个波长：1个光孔分成9束光纤。5）光电转换器：将光信号转换成电信号5、搅拌装置搅拌棒：作用是混匀反应液和样品。1）有的机型采用独立搅拌系统。如KY-300等2）有的机型没有搅拌棒，采用试剂样品针来回抽吸反应液的方式混匀。如KY-1906、清洗系统一次性比色杯不需清洗。固定式比色杯一般采用8段清洗步骤。7、纯水供应方式纯水桶：用水量不大的情况下。由用户采购市售纯水。制水机：用水量较大的情况下才使用。由用户采购或厂家指定配套制水机。（二）、生化分析仪的测量方法反应方向吸光度上升吸光度下降吸光度时间2.0001.00
6、00一点终点法t1使用该法的测试项目有：使用该法的测试项目有：TP、ALB、TBili、DBili、GLU单、单、UA单、单、TC单、单、TG单单吸光度时间2.0001.0000两点终点法t2t1使用该法的测试项目有：使用该法的测试项目有：GLU双、双、UA双、双、TC双、双、TG双、双、HDL-C、LDL-C吸光度时间2.0001.0000两点法t2t1使用该法的测试项目有：使用该法的测试项目有：吸光度下降：吸光度下降：BUN吸光度上升：吸光度上升：CRE吸光度时间2.0001.0000速率法t1 t2 tn使用该法的测试项目有：使用该法的测试项目有：吸光度下降：吸光度下降：ALT、AST
7、吸光度上升：吸光度上升：ALP、GGT、CK、AMY、LDH（三）、生化常规检测项目及临床意义生化试剂根据临床意义分类：（1）、肝功能系列（2）、糖尿病系列（3）、肾功能系列（4）、血脂系列（5）、心肌酶谱系列（6）、胰腺系列（1）肝功能系列）肝功能系列1.丙氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶、谷丙）：ALT、GPT【常规检测项目】参考值范围：040U/LALT大量存在于肝脏中，血清中含量极少，如果肝脏损伤，ALT会大量释放入血清中。2.天冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶、谷草）：AST、GOT【常规检测项目】参考值范围：034U/LAST大量存在于肝脏及心肌中，血清中含量极少，如果肝脏损伤或心肌损伤，A
8、ST就会大量释放入血清中3.碱性磷酸酶：ALP、AKP【常规检测项目】参考值范围：42141U/L血清中的ALP主要来自于肝脏和骨骼，当肝脏受损或骨骼疾病时，ALP会大量释放入血清中。升高：肝脏损伤。降低：较少见，慢性肾炎、贫血。4.-谷氨酰转移酶：-GT、GGT【常规检测项目】参考值范围：050U/L血清中的-GT主要来自肝脏，如果肝脏损伤，-GT会大量释放入血清中。升高：肝脏损伤。5.总胆红素：TB、T.Bili、TBIL【常规检测项目】（总胆红素直接胆红素间接胆红素）参考值范围：成人：220mol/L 新生儿：20200mol/L正常情况下，胆红素在体内产生后，由肝细胞通过摄取、转化和结
9、合来清除胆红素，使胆红素在血清中维持一个较低的水平，如果肝细胞发生病变，不能有效清除胆红素，则胆红素会在血清中升高。6.直接胆红素（结合胆红素）：DB、D.Bili、DBIL【常规检测项目】参考值范围：成人：06mol/L升高：肝脏损伤。7.总蛋白：TP【常规检测项目】（总蛋白白蛋白球蛋白）参考值范围：6083 g/L总蛋白包括：白蛋白、前白蛋白、蛋白酶、糖蛋白、结合珠蛋白、巨球蛋白、铜蓝蛋白、转铁蛋白、C-反应蛋白。升高：常见于脱水、多发性骨髓瘤造成总蛋白合成增加、慢性肝脏疾病等。降低：常见于肾脏疾病、肝功能衰竭。8.白蛋白：ALB【常规检测项目】参考值范围：3753 g/L白蛋白由肝实质细
10、胞合成，在体内起着极其重要的作用:运输作用、维持渗透压、缓冲酸碱、营养蛋白。下列情况会造成白蛋白降低：1）白蛋白合成不足：主要见于肝脏疾病，营养不良。2）白蛋白丢失：肾病、肠道疾病、烧伤及渗出性皮炎。3）白蛋白分解代谢增加：外科手术、创伤、炎症。白蛋白含量的绝对值上升的情况是不存在的。测值升高主要是脱水或血液浓缩。（2）、糖尿病系列）、糖尿病系列9.葡萄糖 GLU【常规检测项目】参考值范围：3.895.83 mmol/L血糖是指血液中的糖，在正常人血液中主要是葡萄糖。在多种激素的调节下，血糖浓度维持在一定范围内。降低血糖的激素有：胰岛素。升高血糖的激素有：胰高血糖素、肾上腺素、皮质醇、生长激素
11、。所以分泌上述激素的器官发生病变时，就会造成血糖浓度超出范围。升高：发生于糖尿病、静脉输入含葡萄糖液体。降低：可见于胰岛瘤、胰岛素用药、禁食。（3）、肾功能系列）、肾功能系列10.尿素（urea）、尿素氮（BUN）【常规检测项目】参考值范围：2.56.3 mmol/L尿素是人体蛋白质代谢的终末产物，血清中的尿素可全部从肾小球滤过，当肾小球病变影响滤过率时，就会造成血清中尿素升高。升高：见于肾功能障碍。降低：很少见，见于严重肝病。11.肌酐：CRE、Cr【常规检测项目】参考值范围：50120 mol/L肌酐是肌酸的终末代谢产物，肌酸是在肾脏中合成。血浆中的肌酐由肾小球滤过，当肾脏发生病变时，就会
12、引起肌酐浓度的变化。升高：见于肾功能衰竭。降低：见于进行性肌萎缩。12.尿酸：UA【常规检测项目】参考值范围：0.120.43 mmol/L尿酸是嘌呤代谢的终末产物，嘌呤代谢紊乱、能量代谢异常及肾脏对尿酸的排泄障碍都会引起尿酸浓度的变化。升高：可见于肾功能障碍、痛风。降低：可见于使用肾上腺皮质激素后。（4）、血脂系列）、血脂系列13.胆固醇：TC、CHOL、CHO【常规检测项目】参考值范围：3.15.96 mmol/L 脂类代谢紊乱由原发性（遗传缺陷），继发性（糖尿病、肾脏疾病等）引起。常见现象是TC和TG升高。升高：原发性高胆固醇血症、动脉粥样硬化。降低：贫血、甲亢、营养不良14.甘油三脂(
13、甘油磷酸氧化酶法双试剂)：TG【常规检测项目】参考值范围：0.401.81mmol/L升高：见于原发性高脂血症、肥胖症、冠心病降低：见于甲亢15.高密度脂蛋白胆固醇(直接法)：HDL-C【常规检测项目】参考值范围：1.171.91mmol/LHDL-C有清除胆固醇的作用。升高：摄取酒精、适当运动可引起高密度脂蛋白胆固醇升高，(HDL-C)/TC24.8对动脉粥样硬化有保护作用。下降：是心血管疾病的危险因素。冠状动脉疾病、高脂血症、抽烟、肥胖、糖尿病、肝疾患的疾病时有反映。16.低密度脂蛋白胆固醇(直接法)：LDL-C【常规检测项目】参考值范围：03.36mmol/L升高：是动脉粥样硬化性疾病，
14、特别是冠心病的危险因素。（5）、心肌酶谱系列）、心肌酶谱系列 17.肌酸激酶：CK【常规检测项目】参考值范围：男：26174 U/L 总CK活性主要见于骨骼肌，其它还有心肌、胃肠道和脑组织。这些组织受损时会导致血清肌酸激酶水平升高：如肌肉萎缩症，心肌梗塞、急性脑血管意外等。18.乳酸脱氢酶：LDH【常规检测项目】参考值范围：114240 U/L心肌受损时会引起血清 LDH 水平升高。（6）、胰腺系列）、胰腺系列19.淀粉酶试剂：AMY【常规检测项目】参考值范围：140 U/L淀粉酶大量存在于胰脏中，急性胰腺炎会造成AMY释放入血清中。（四）标本的采集、处理及保存 标本的采集：抽取静脉血。血液化
15、学成分常受饮食影响而变动，故空腹采血才有代表性。紧急及特殊危重病人可根据需要随时采血。血糖、甘油三酯、肝功必须用空腹血。标本的处理：采血后注入干燥、洁净试管中，待血液凝固后，上清液就是血清。如果使用血浆，那就需要加入适量抗凝剂后再离心取上清液。标本的保存：标本放入冰箱中冷藏可保存1个星期。也可将血清吸出放入冰箱冷冻，可保存1个月。（五）生化分析仪的评价1、仪器故障率低。2、重复性好（光源信号值稳定、吸样重复性好、交叉污染小、携带污染小）。3、吸光度准确。4、分析速度快。5、试剂通道数多，样品位数量多。6、软件界面友好、操作简单、易学易用。7、仪器易维护保养。8、维修方便，零配件通用性强、容易更
16、换。（六）生化试剂的评价1、试剂稳定性好。2、有合适的灵敏度和线性范围。3、正向反应：试剂空白吸光度低。4、反向反应：试剂空白吸光度高。5、试剂空白变化率低。6、终点法反应速度快。7、批间差小。（七）生化单双试剂的区别1、单试剂优点：使用简单方便，只占用一个试剂位。缺点：对于试剂的技术水平而言，很多试剂无法做成单试剂，目前的单试剂稳定性也比双试剂稳定性差。2、双试剂优点：稳定性好、排除干扰方面强于单试剂。缺点：是占用两个试剂位，试剂针需吸取两次，影响检测速度，由于试剂针的防污染功能会使试剂R1和R2不成比例的消耗，造成R1剩余。（八）标准液和质控物（1）标准液1、终点法和两点法的试剂盒中必须放
17、入标准液（总胆和直接标准液是一个例外）。速率法试剂盒可以不放标准液。标准液的值为一个，以所标示的值参与计算。2、国产标准液：试剂厂家自己配制的标准液、卫生部临检中心提供的标准液。3、进口标准液：Roche公司生产的综合标准液，c.f.a.s(自动系统校准物)。（2）质控物1、所有的检测项目都需要质控物来验证试剂是否失效。质控物的值是一个范围，包括靶值、1SD的范围，2SD的范围。把质控物当作血清样品检测，检测结果与质控物的说明书比较，检测结果必须在2SD的范围内，否则需查找原因后重新检测。2、国产质控物：中生质控、长征质控等。3、进口质控物：罗氏质控Roche、朗道质控Randox、伯乐质控BIO-RAD等。思考题：1、不同厂家的标准液和质控物能够搭配使用吗？2、如果检测结果不正常，如何判断是仪器问题还是试剂问题？
