1、第第 四四 章章药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证第1页，共80页。定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点 1样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法 2药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 3第2页，共80页。第一节第一节定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点 一、容量分析法一、容量分析法二、光谱分析法二、光谱分析法 三、色谱分析法三、色谱分析法 第3页，共80页。一、容量分析法一、容量分析法(一一)特点与适用范围特点与适用范围 (1)方法简便易行方法简便易行 (2)方法耐用性高方法耐用性高 (3)测定结果准确测定结果准确 (4)方法专属性差方法
2、专属性差 适用于原料药含量测定适用于原料药含量测定(二二)有关计算有关计算:1.滴定度与滴定度计算滴定度与滴定度计算2.含量计算含量计算 (1)直接滴定法 (2)间接滴定法 生成物滴定法 剩余量滴定法 将已知浓度滴定液滴加至被测药物溶液中将已知浓度滴定液滴加至被测药物溶液中,至至滴定终点滴定终点,根据滴定液的浓度根据滴定液的浓度,体积和滴定度体积和滴定度,计计算含量算含量.第4页，共80页。结果计算结果计算1、滴定度的计算、滴定度的计算aA+bB=cC+dD;cC+eE=fF+gG;滴定反应滴定反应 fF+hH=iI+lL aA hH MhamTm:滴定剂摩尔浓度；滴定剂摩尔浓度；M被测物摩尔
3、质量；被测物摩尔质量；a/h:反应摩尔比反应摩尔比第5页，共80页。2.含量测定含量测定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定法(1)(2)(3)第6页，共80页。(1)直接滴定法直接滴定法%100(%)WTV含量规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100100%(%)WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反应的原理,药物与滴定剂在反应中的摩尔比正确计算滴定度和百分含量 第7页，共80页。(2)生成物滴定法生成物滴定法%100%100100%(%)WFTVWTVWTV含量注意摩尔比的替换药物与A作用生成B,用滴定液滴定B百分含量计算方法与直接滴定法相同 第8页，
4、共80页。（3）回滴定（剩余滴定）（a）不做空白试验时百分含量计算）不做空白试验时百分含量计算（b）做空白试验时百分含量计算）做空白试验时百分含量计算%100)V%AWTFVFBBA（含量%100)V%0WFTVB（含量第9页，共80页。司可巴比妥钠含量测定:本品约0.1g,加水10ml溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml,再加盐酸5ml,放置15分钟,加碘化钾试液10ml,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,滴定的结果用空白试验校正 W=0.1022g;硫代硫酸钠滴定液 F=1.038;供试品消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml;空白23.21ml 第10页，共80页。滴
5、定度(mg/ml)01.1327.260111.0MbamT司可巴比妥钠M=260.27,与溴摩尔比为1:1%8.98%10010001022.001.13038.1)73.1521.23(%100)(%)2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量第11页，共80页。二、光谱分析法二、光谱分析法定义定义分类分类 利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法光谱分析法(flame photometry)第12页，共80页。三、色谱分析法三、色谱分析法特点与应用特点与应用分类分类：(1)高灵敏度高灵敏度:ng-g/ml(2)高专属性高专属性:选择性检测(3)高效能与高速度高效能
6、与高速度 复方制剂含量测定复方制剂含量测定的首选方法的首选方法：第13页，共80页。第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法一、不经有机破坏的前处理方法一、不经有机破坏的前处理方法 二、经有机破坏的前处理方法二、经有机破坏的前处理方法(一一)水解法水解法;(二二)还原法还原法(一一)干法破坏干法破坏;(二二)湿法破坏湿法破坏第14页，共80页。进行药物定量分析之前，一般都需进行药物定量分析之前，一般都需要对样品进行前处理。要对样品进行前处理。根据待测元素在药物分子中结合的根据待测元素在药物分子中结合的牢固程度，前处理方法各异。牢固程度，前处理方法各异。在分析含金属或含卤素、氮、硫
7、、磷在分析含金属或含卤素、氮、硫、磷等元素的有机药物前，需进行适当的样品等元素的有机药物前，需进行适当的样品前处理。前处理。第15页，共80页。含卤素有机药物系指药物分子结构含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。酸盐。第16页，共80页。一一、不经有机破坏的方法、不经有机破坏的方法 1.酸水解法酸水解法水难溶性含金属水难溶性含金属有机药物与矿酸有机药物与矿酸(盐酸盐酸)共热共热:回流回流有机结合的待测元素原子离解,转化为无机盐(离子)2.碱水解法碱水解法含卤
8、素有机药物含卤素有机药物(脂肪碳链脂肪碳链)与氢氧化钠与氢氧化钠溶液回流溶液回流:适用于适用于:结合不牢固的结合不牢固的 含金属或含卤素有机药物含金属或含卤素有机药物(一一)水解法水解法第17页，共80页。碘他拉酸测碘他拉酸测定定:氢氧化钠氢氧化钠试液与锌粉试液与锌粉回流后回流后,用硝用硝酸银滴定酸银滴定 回流回流碱性溶液中加锌粉回流,使碳-碘键还原转化为无机碘化物碘番酸碘番酸胆影酸胆影酸胆影葡胺注射液胆影葡胺注射液泛影酸泛影酸泛影酸钠泛影酸钠泛影葡胺注射液泛影葡胺注射液 适用于适用于:结合牢固的含碘有机药物结合牢固的含碘有机药物 (直接与芳环连接直接与芳环连接)(二二)还原法还原法第18页，
9、共80页。常见的含卤素有机药物常见的含卤素有机药物CCH3OHCH3CCl3三氯叔丁醇三氯叔丁醇CCl3Cl3C六氯对二甲苯六氯对二甲苯第19页，共80页。COOHIIINHCOCH3CH3CONH泛影酸泛影酸第20页，共80页。COOHIIINH C(CH2)4OC NHOCOOHIII胆影酸胆影酸第21页，共80页。COOHIIICONHCH3CH3CONH碘他拉酸碘他拉酸第22页，共80页。IH2NIICH2CHCOOHC2H5碘番酸碘番酸第23页，共80页。CHCH3(CH2)8COOCH2CH3I碘苯酯碘苯酯OCH2CH2CH2CH3COOCH2CH2N(C2H5)2IIHCl盐酸胺
10、碘酮盐酸胺碘酮第24页，共80页。HNNFNC2H5OCOOH诺氟沙星诺氟沙星第25页，共80页。OFFCH3HHOHCH3CCH2OCOCH3OOOCCH3CH3醋酸氟轻松醋酸氟轻松第26页，共80页。BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOH磺溴酞钠磺溴酞钠第27页，共80页。含卤素有机药物的分析含卤素有机药物的分析XXC适当的处理直接回流后测定法直接回流后测定法碱性或酸性还原后测定法碱性或酸性还原后测定法氧瓶燃烧分解后测定法氧瓶燃烧分解后测定法第28页，共80页。有机金属药物：有机金属药物：金属原子直接与碳原子以金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固共价键相连，结合比较
11、牢固 如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利第29页，共80页。CCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2K+3H2O酒石酸锑钾酒石酸锑钾第30页，共80页。Mg(C17H35COO)2硬脂酸镁硬脂酸镁CCHCCOOOFeO富马酸亚铁富马酸亚铁第31页，共80页。CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOO-SbOHOSbO-OCHCHCHCCHOOCH2-OOHOHONa39H2O葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠第32页，共80页。NHCONH2AsOOHHO卡巴胂卡巴胂HgOCOCH3醋酸苯汞醋酸苯汞第33页，共80页。OCH2COONaCONHCH2CHCH2HgOH
12、OCH3汞撒利汞撒利第34页，共80页。二、二、经有机破坏的方法经有机破坏的方法(一一)湿法破坏湿法破坏p 适用于含氮有机药物分适用于含氮有机药物分析的前处理析的前处理p 硫酸作为分解剂硫酸作为分解剂,氧化剂氧化剂(硝酸硝酸,高氯酸高氯酸)辅助分解剂辅助分解剂p 凯氏定氮法凯氏定氮法(二二)干法破坏干法破坏 高温炽灼法高温炽灼法 用于含卤素药物的鉴别用于含卤素药物的鉴别 无水碳酸钠无水碳酸钠,硝酸镁硝酸镁,氢氧化钙氢氧化钙,氧化锌等辅助灰化氧化锌等辅助灰化 2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法适用于适用于:含金属含金属,卤素卤素,氮氮,硫硫,磷等磷等 有机药物有机药物 (待测原子与碳原子结合牢固者待测原子
13、与碳原子结合牢固者)第35页，共80页。1.高温炽灼法高温炽灼法 高温灼烧灰化高温灼烧灰化 用于含卤素药物的鉴别用于含卤素药物的鉴别2.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法第36页，共80页。（1）氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法原理原理 氧瓶燃烧法：氧瓶燃烧法：将有机药物放入充满将有机药物放入充满氧气氧气的的密闭密闭燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质物质吸收吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定。检查或含量测定。第37页，共80页。NaClHClOClCN
14、aOH2 溶液点燃 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。的分析。本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析。用于微量样品的分析。第38页，共80页。（2）仪器与材料仪器与材料 仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、硬无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状状或网状第39页，共80页。称样用材料及称样称样用材料及称样A.固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸B.液体样品液体
15、样品 纸袋纸袋C.软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹第40页，共80页。氧气氧气吸收液吸收液A.作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态量地吸收并转变为一定的便于测定的价态第41页，共80页。B.吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫
16、酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液第42页，共80页。（3）操作方法）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。，立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。于铂丝下端的网内或螺旋处。第43页，共80页。样品的燃烧样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速
17、放入燃烧点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，待燃烧完瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，待燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗瓶塞，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。定。第44页，共80页。根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶
18、。ChP（2019）规定的燃烧瓶体积为）规定的燃烧瓶体积为500、1000或或2000ml三种，采用常量或半微量分析三种，采用常量或半微量分析注意事项：注意事项：第45页，共80页。待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 35mg（微量分析）（微量分析）150250ml 2030mg（半微量分析）（半微量分析）300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊结构或特殊结构的燃烧瓶的燃烧瓶第46页，共80页。正确选用燃烧瓶的目的在于：正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧足够的氧气中燃烧分解完全；有
19、利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。的可能性。第47页，共80页。测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶铂丝燃烧时起催化作用铂丝燃烧时起催化作用应同时做空白试验应同时做空白试验燃烧时要注意防爆燃烧时要注意防爆燃烧要完全燃烧要完全燃烧产生的烟雾完全被吸收燃烧产生的烟雾完全被吸收第48页，共80页。应用应用例例 磺溴酞钠的含量测定磺溴酞钠的含量测定 ChP(2019)BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOH第49页，共80页。BrBrBrBrOSOHHOSONaOOONaOOO燃烧分解燃烧分解O2
20、HBr+S2-+SO4+HBr+S2-NaBr+Na2SO4+H2O NaOH,H2O2第50页，共80页。含金属的有机药物：含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物合物 如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁亚铁第51页，共80页。需验证的项目需验证的项目验证的内容验证的内容准确度准确度防腐剂溶出度,释放度鉴别试验杂质检查含量测定第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 精密度精密度 专属性专属性 检测限检测限 重复性中间精密度重现性
21、第52页，共80页。一、准确度（一、准确度（accuracyaccuracy）：）：测量值与真实值接近的程度测量值与真实值接近的程度 表表 示示:回收率回收率 测定方法：回收试验测定方法：回收试验 加样回收试验加样回收试验第53页，共80页。（一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1、原料药、原料药 回收试验：回收试验：空白空白+已知量已知量A的对照品（或标准品）测的对照品（或标准品）测定，测定值为定，测定值为M100%MRA第54页，共80页。加样回收试验：加样回收试验：已准确测定药物含量已准确测定药物含量P的真实样品的真实样品+已知量已知量A的的对照品（或标准品）测定，测定值
22、为对照品（或标准品）测定，测定值为M。100%MPRA第55页，共80页。原料药原料药 （1）可用已知纯度的对照品或样品进行测定）可用已知纯度的对照品或样品进行测定（2）用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测）用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。定的结果进行比较。100%加入量测得量回收率第56页，共80页。2、制剂制剂（1）用含己知量被测物的各组分混合物进）用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。药对照品的方法。（2 2）如不能得到制剂的全部组分，可向制剂）如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中
23、加入已知量的被测物进行测定。中加入已知量的被测物进行测定。（3 3）另一个已建立准确度的方法比较结果。）另一个已建立准确度的方法比较结果。第57页，共80页。100%加入量本底量测得量回收率第58页，共80页。中药中药 分析的准确度一般用加样回收试验衡量。分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在中药回收率一般要求在95105%范围内范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90110%范围内。范围内。RSD一般在一般在3%以内。以内。第59页，共80页。（二）杂质定量测定的准确度（二）杂质定量测定的准确度 （1）可向原料药或制剂中加入已知量杂）可
24、向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。质进行测定。（2）如果不能得到杂质或降解产物，可用）如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。第60页，共80页。（三）数据要求（三）数据要求规定的范围内，至少用规定的范围内，至少用9次测定结果评价，次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。如制备三个不同浓度样品各测三次。第61页，共80页。二、精密度二、精密度1.重复性重复性p 同一分析人员连续测定所得结果的精密度;p 也称批内精密度或日内精密度 2.中间精密度中间精密度p 不同时间不同分不同时间不同分析人员用不同设备析人员用不同
25、设备测定结果之间的精测定结果之间的精密度密度p 批批/日间精密度日间精密度 3.重现性重现性 p 在不同实验室不在不同实验室不同人员测定结果之同人员测定结果之间的精密度间的精密度p 法定标准采用的分析法定标准采用的分析方法进行方法进行 v同一均匀供试品多次取样测定所得同一均匀供试品多次取样测定所得 结果之间的接近程度结果之间的接近程度 v标准偏差标准偏差(s,SD);相对标准偏差相对标准偏差(RSD)v数据要求同数据要求同“准确度准确度”定义定义第62页，共80页。偏差（d）：测量值与平均值之差idxx标准（偏）差（标准（偏）差（SD或或S）:21ixxSn100%SRSDx第63页，共80页
26、。三、专属性（specificity）:指有其他成分（杂质、降解物、指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性能准确测定出被测物的特性)。第64页，共80页。(一一)鉴别反应鉴别反应 空白,结构相似物或有关物质呈负反应(二二)含量与杂质测定含量与杂质测定 含杂质或降解产物的试样中各峰能获得分离v 在其他成分在其他成分(杂质杂质,降解产物降解产物,辅料等辅料等)可能可能 存在下存在下,方法能正确测定出被测物的特性方法能正确测定出被测物的特性v 鉴别鉴别,杂质检查和含量测定方法杂质检查和含量测定方法 定义定义与应用与应用第6
27、5页，共80页。四、四、检测限检测限（limit of detection，LOD）：）：药物能被检出的最低浓度药物能被检出的最低浓度(g/ml)测测 定定:信噪比法信噪比法(S:N=3:1)第66页，共80页。适用于可用目视法直接评价结果的适用于可用目视法直接评价结果的 分析方法分析方法,非仪器分析法非仪器分析法 鉴别的显色法鉴别的显色法;杂质检查的杂质检查的TLCl适用于能直观显示信号与基线噪声适用于能直观显示信号与基线噪声 水平的分析方法水平的分析方法,如如HPLC法法 l 信噪比信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或量时的相应浓度或量p 适用于不能直观比较信噪比的仪器适用于不能直观比较信
28、噪比的仪器 分析方法分析方法,如如UV-Vis法法 常用方法常用方法 1.目视法目视法 2.信噪比法信噪比法 3.标准偏差法标准偏差法 空样样空SACSfLOD33第67页，共80页。五、定量限五、定量限杂质和降解产物用定量方法研究时杂质和降解产物用定量方法研究时,应确定应确定LOQ LOQ的测定方法与的测定方法与LOD相同相同相应的系数相应的系数(倍数倍数)不同不同,如信噪比如信噪比S/N=10定量限定量限(limit of quantitation,LOQ)是指试样中被是指试样中被测物能被定量测定的最低量测物能被定量测定的最低量;第68页，共80页。六、线性六、线性范围系指方法适用的高低限
29、浓度或量的区间范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间在试验研究开始前确定验证的范围和方法在试验研究开始前确定验证的范围和方法在范围内应能达到一定精密度在范围内应能达到一定精密度,准确度和线性准确度和线性p线性系指在设计的线性系指在设计的“范围范围”内内,响应值响应值(y)与被与被测物浓度测物浓度(x)直接呈正比关系的程度直接呈正比关系的程度 y=ax+bp系列系列(n5)供试样品测定供试样品测定,以响应信号作为被测以响应信号作为被测物浓度的函数作图物浓度的函数作图p用最小二乘法进行线性回归用最小二乘法进行线性回归;或经数学转换后或经数学转换后再进行线性回归再进行线性回归第69页，共80页。七、
30、范围七、范围原料药原料药/制剂含量测定制剂含量测定:80%120%制剂含量均匀度检查制剂含量均匀度检查:70%130%溶出度或释放度检查溶出度或释放度检查:下限下限-20%上限上限+20%特殊元素含量测定特殊元素含量测定:下限下限-20%上限上限+20%杂质测定杂质测定:限度限度20%u涉及定量测定的项目均需对范围进行验证涉及定量测定的项目均需对范围进行验证如如:含量测定含量测定,含量均匀度含量均匀度,溶出度或释放度溶出度或释放度,特殊元素或特殊杂质的定量检查特殊元素或特殊杂质的定量检查第70页，共80页。八、耐用性八、耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时耐用性系指在测定条件有小的变动时,测
31、定结果不测定结果不受影响的承受程度受影响的承受程度;体现测定条件的体现测定条件的允许变动范围允许变动范围HPLC法典型因素有法典型因素有:流动相的组成和流动相的组成和pH值及值及流速流速,不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱,柱温等柱温等 GC法典型因素有法典型因素有:不同厂牌或批号的色谱柱不同厂牌或批号的色谱柱,固定固定相相,不同类型的担体不同类型的担体,柱温柱温,进样口和检测器温度进样口和检测器温度等等 第71页，共80页。九、验证内容的选择九、验证内容的选择 验证内容选择的一般原则验证内容选择的一般原则:非定量分析方法非定量分析方法 如鉴别如鉴别,杂质的限度检
32、查法杂质的限度检查法:验证验证“专属性专属性”,“检测限检测限”和和“耐用性耐用性”定量分析方法定量分析方法 如原料药或制剂的含量测定及含量如原料药或制剂的含量测定及含量均匀度均匀度,溶出度或释放度的测定方法溶出度或释放度的测定方法:除除“检测限检测限”和和“定量限定量限”外外,其余均验证其余均验证微量定量分析方法微量定量分析方法 如杂质的定量测定方法如杂质的定量测定方法:除除“检测限检测限”视情况而定外视情况而定外,其余均验证其余均验证第72页，共80页。检验项目和验证内容：项目项目内容内容鉴别鉴别杂质测定杂质测定含量测定含量测定及溶出量及溶出量测定测定定量定量限度限度准确度准确度精密度精密
33、度重复性重复性中间精密度中间精密度 专属性专属性检测限检测限 定量限定量限线性线性范围范围耐用性耐用性 已有重现已有重现性验证，性验证，不需验证不需验证中间精密中间精密度度 如一种方如一种方法不够专法不够专属，可用属，可用其他分析其他分析方法予以方法予以补充补充 视具体情况视具体情况予以验证予以验证第73页，共80页。各种含量测定方法对效能指标的要求各种含量测定方法对效能指标的要求 1.容量分析法：容量分析法：用原料药精制品用原料药精制品(含量含量99.5)或对照品考察方或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2；进行回收率试验。；进行回收率试验。
34、回收率一般在回收率一般在99.7100.3之间。之间。第74页，共80页。2.UV法：法：用适当浓度的精制品进行测定，其用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一一般不大于般不大于1。制剂的测定，回收率一般应在制剂的测定，回收率一般应在98102之之间。间。第75页，共80页。线性：线性：吸光度吸光度A一般在一般在0.20.7，浓度点，浓度点n5。用浓。用浓度度c对对A作线性回归处理，得一直线方程，作线性回归处理，得一直线方程，R应大于应大于0.999(n5)，方程的截距应近于零。，方程的截距应近于零。第76页，共80页。3.HPLC法：法：要求要求RSD2，回收率，回收率98102之间。之间。线
35、性范围：线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点用精制品配制一系列标准溶液，浓度点n应为应为57，用浓度，用浓度c对峰高对峰高h或被测物的响应值之或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，比进行回归处理，建立回归方程，R应大于应大于0.999，截距应趋于零。，截距应趋于零。第77页，共80页。专属性：专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除。除。第78页，共80页。生物样品分析时，常用生物样品分析时，常用RSD表示精密度，表示精密度，并可细分为批内（或日内）精密度及批间（并可细分为批内（或日内）精密度及批间（或日间）精密度。或日间）精密度。批内精密度：批内精密度：是同一次测定的精密度。是同一次测定的精密度。所得所得RSD应争取达到应争取达到5以内，但不能超以内，但不能超10。第79页，共80页。批间精密度：批间精密度：是不同次测定的精密度。是不同次测定的精密度。所得所得RSD应控制在应控制在15以内。以内。附录附录药物制剂人体生物利用度和生物等效药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则性试验指导原则规定一般规定一般RSD应小于应小于15%，在在LOQ附近附近RSD应小于应小于20%。第80页，共80页。
