1、生化药品质量分析生化药品质量分析范慧红范慧红中检所生化药品及基因工程药物室中检所生化药品及基因工程药物室 2010-3第1页，共29页。生化药品特点 2010版药典收载生化药品情况 生化药品质控特点 肝素钠和胸腺肽评价性抽验质量分析第2页，共29页。一般系指从动、植物及微生物中提取、分离、纯化、或用生物化学半合成或用现代技术制得的具有生物化学活性的一类用于临床治疗的药物。氨基酸及其衍生物 肽与蛋白 酶与辅酶 核苷酸及其衍生物 多糖 脂类 组织提取的多组分生化药物生化药品的定义与分类生化药品的定义与分类第3页，共29页。中国药典2010版二部生化药品标准（品种)汇总类别2005版标准（品种）20
2、10版标准（品种）增加标准（品种）增长%删除氨基酸及其衍生物 43（21）50（25）7（4）13.7%核苷酸及其衍生物 43（9）51（10）7（1）13.7%酶与辅酶 28（11）33（13）5（2）15.2%多肽、蛋白 24（10）28（13）4（3）40.3%4多糖 15（5）18（6）3（1）16.7%脂 类2（1）4（2）2（1）40.0%1总数 154（57）185（69）68（12）15.1%5第4页，共29页。氨基酸及其衍生物-2010版药典品种全，包含国内外所有氨基酸类产品。临床应用方便，制剂系列化。固体制剂：片、胶囊、颗粒、散、口含片；溶液制剂：口服溶液、滴眼液、注射液、
3、冲洗液等。增订、修订和统一内容、与国外同类标准接轨。增订：检查项中统一用TLC检查其它氨基酸项；有关物质检查：HPLC法。修订：含量测定、非水滴定、比色法，及HPLC法。第5页，共29页。核苷酸及其衍生物-2010版药典 临床上是主治病毒疾患，部分治疗心血管及脑损伤、缺氧等疾病。如阿糖胞苷、利巴韦林、阿昔洛韦、更昔洛韦、泛昔洛韦。微生物发酵或半合成，化学结构清楚、成分明白、质量标准完善。2010版核酸类药物品种较齐，制剂较全，少的2-3种标准；多的7-8种，最高为12种之多。如利巴韦林产品有12种：固体制剂（5种）：原料、片、口含、胶囊、颗粒；液体制剂（7种）：滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射剂
4、、氯化钠注射剂、葡萄糖注射剂、注射用。增订的项目：在检查项中有：有关物质，异常毒性、渗透压、残留溶媒。修订的项目：含量均匀度、热原修订为细菌内毒素、含测方法、TCL分离度、溶液澄清度和颜色用法、用量、注射途径、注射速度。第6页，共29页。酶与辅酶-2010版药典酶和辅酶是我国生化药物中发展比较快的一类，建国以来有长足的进步。凡国外药典有的本届药典都已载入。大部分是从生物体的某些组织中提取、纯化和精制；少部分是从微生物经发酵、破壁、再从发酵液中提取、纯化和精制而得。酶是蛋白质，具有生物活性，提取和纯化过程中，既要保持活性，又要得率高，在质量指标的制定中始终密切注意其酶的总活性、比活力和纯度的关系
5、。而且每种酶均有自身的特点。增修订内容：检查项有溶液的颜色、高分子物质检查、有关物质安全性普遍增加异毒，细内，微生物限度、无菌、过敏。第7页，共29页。多肽、蛋白-2010版药典 蛋白质就是由许多氨基酸残基组成的多肽链。一般以51个氨基酸残基，分子量为5733的胰岛素划分，高于此分子量为蛋白，小于为肽。合成多肽：成份清楚、结构明确，是近年来生化药中崛起的新品种、新技术、高水平、高质量的产品，如重组人胰岛素和重组人生长激素。大部分与国际接轨，修订的项目较全，如新增的生长抑素。从脏器提取的激素、肽，因工艺粗、纯度差、杂质多、质量差、安全性没法保障从药典中删去，尽管临床仍很需要。如垂体后叶粉、注射液
6、、缩宫素溶液、甲状腺粉。第8页，共29页。多糖-2010版药典品种来源类别剂型右旋糖酐20发酵血浆代用品原料右旋糖酐20葡萄糖注射液右酐20、葡萄糖血浆代用品注射剂右旋糖酐20氯化钠注射液右酐20、氯化钠血浆代用品注射剂右旋糖酐 40发酵血浆代用品粉剂右旋糖酐 40葡萄糖注射液右酐40、葡萄糖血浆代用品注射剂右旋糖酐 40氯化钠注射液右酐40、氯化钠血浆代用品注射剂右旋糖酐 70发酵血浆代用品原料右旋糖酐 70葡萄糖注射液右酐70、葡萄糖血浆代用品注射剂右旋糖酐 70氯化钠注射液右酐70、氯化钠血浆代用品注射剂右旋糖酐铁络合物抗贫血药原料右旋糖酐铁片右酐铁抗贫血药片剂右旋糖酐注射液右酐铁抗贫血
7、药注射剂肝素钠猪、牛肠粘膜抗凝血药原料肝素钠注射液肝素钠抗凝血药注射剂肝素钠乳膏肝素钠抗凝血药软膏硫酸软骨素钠猪喉骨、鼻中骨、气管降血脂及镇痛药原料硫酸软骨素钠片硫酸软骨素钠降血脂及镇痛药片剂硫酸软骨素钠胶囊硫酸软骨素钠降血脂及镇痛药胶囊剂第9页，共29页。脂类-2010版药典 前列地尔，注射用前列地尔 多烯酸乙酯软胶囊 采用新的质控指标使多烯酸乙酯的质量与EP，JP一致。第10页，共29页。存在问题：缺乏原材料的来源要求及质控标准缺乏提取物溶液的质控标准各企业的生产工艺差异较大缺乏病毒工艺验证缺乏专属性的鉴别项目缺乏有效性的检测指标（如活性测定）含量没有上限组织提取的多组分生化药物组织提取的
8、多组分生化药物第11页，共29页。组织提取的多组分生化药物组织提取的多组分生化药物建议：1、由于多组分生化药注射剂的组成、质量与原材料和制备工艺密切相关，因此质量标准难以进行全面控制，建议将原材料、中间体及原液的质量要求及工艺过程收入终产品质量标准，以尽可能控制起始原料、制备工艺对终产品的组成和含量的影响，实现全过程控制。2、多组分肽注射剂的组分复杂，难以确定其有效成分，建议增加活性测定，通过活性测定指标来反映产品的有效性。3、有多家企业生产、同时执行相同的标准的品种，建议统一生产工艺。4、参照中药的指纹图谱，开展多组分生化药品的反相特征图谱研究，通过特征图谱来鉴别产品真伪及确保产品的批与批之
9、间的一致性。第12页，共29页。生化药品质控特点 原材料质量控制 培养或提取过程的质量控制 纯化工艺过程的质量控制 制剂工艺过程的质量控制 终产品的质量控制 对生产全过程进行质量分析与控制对生产全过程进行质量分析与控制第13页，共29页。生化药品中的生物测定和安全性检查采用生物测定的约20品种约占总数的28%（酶与辅酶，多肽、蛋白、少数多糖）包括：在体生物测定、体外生物测定安全性检查-覆盖几乎所有生化药品有待改进的品种：肝素纳：效价测定仍沿用兔全血法和羊血浆法USP新版已改为理化测定分光光度法，测定抗Fa和抗Fa取代生物测定 本实验室参加了WHO组织的针对这一替代方法的肝素钠6th IS的国际
10、协作标定，为肝素纳的理化测定替代生物测定积累经验硫酸鱼精蛋白：EP6.0已经、USP即将采用滴定法以分光光度法测试终点，理化测定取代了生物测定第14页，共29页。安全性检查试验（无菌、微生物限度、热原、细菌内毒素、异常毒性、降压物质、过敏等）考虑生化药来源于人、动物组织，或通过发酵而得产品成分复杂、有关物质成分有的不明确来源、工艺等任何环节的微小变化可能会引发不可预测的不良反应少量生化药注册上市的历史过程复杂，其安全性和有效性尚不确切我国GMP实施的现状近年来药害事件的教训2010版对生化药终产品严格质量控制、采取更严厉措施 除2005版原有指标外，原标准没有的大部分都增修订生物安全检查项第1
11、5页，共29页。安全性检查试验-制法要求、特殊安全性检查编号编号品种品种乙肝表面抗原乙肝表面抗原制法要求制法要求1肝素钠本品应从检疫合格的猪或牛肠粘膜中提取，生产过程均应符合现行版GMP要求。生产工艺要经病毒灭活验证，并能去除有害的污染物，生产过程中应确保不被外来物质污染。2胰岛素本品应从检疫合格猪的冰冻胰脏中提取，生产过程均应符合现行版GMP要求。3糜蛋白酶应从检疫合格的牛或猪胰提取，生产过程均应符合现行版GMP要求。4尿促性素+本品应从健康人群的尿中提取，生产过程应符合现行版GMP要求，本品在生产过程中需经适宜的工艺方法处理，以使任何病毒如肝炎病毒和人免疫缺陷病毒等灭活。5绒促性素+如上6
12、尿激酶+本品应从健康人群的尿中提取，生产过程应符合现行版GMP要求，本品在生产过程中需经60加热10h，以使病毒灭活。7乌司他丁+如上第16页，共29页。肝素钠注射液；胸腺肽注射液和注射用胸腺肽评价性抽验质量分析介绍评价性抽验质量分析介绍第17页，共29页。肝素钠注射液背景：肝素是高度硫酸化的糖胺聚糖，为抗凝血药，主要从猪的肠粘膜中提取得到。自上世纪三十年代应用于临床，已经使用了七十多年；我国是肝素生产大国，为肝素原料的主要出口国。肝素产品是一大类产品，包括肝素钠（钙）、低分子肝素钠（钙）、类肝素等等。一直以来，我国的肝素产品存在着原料出口而制剂进口的问题；2008年年初，美国百特公司生产的肝
13、素钠注射液在美国发生了严重的不良反应；对我国的肝素钠注射液进行评价性抽验，可以更好的了解我国肝素钠注射液的生产情况和质量情况，对新的检验检测技术进行研究，可以提高我国肝素的检验检测水平，与国际接轨。这对推动我国肝素产业的发展有深远的意义。第18页，共29页。法定检验小结：按法定标准检验，发现样品在可见异物、pH值、装量等方面的一些问题，在一定程度上反映产品质量。但目前的法定标准缺乏专属性鉴别反应、杂质检查方法及对辅料的检查方法等，所以还不能全面反映和控制产品质量。肝素钠注射液第19页，共29页。探索性研究：1、离子色谱法检查有关杂质2、毛细管电泳法检查有关杂质3、体积排阻色谱法检查样品纯度4、
14、反相色谱法检查防腐剂苯酚含量5、旋光度测定检查样品纯度6、微量生色底物法测定抗FXa和抗FIIa活性7、渗透压测定考察处方及工艺稳定性肝素钠注射液第20页，共29页。通过质量分析发现的主要问题：通过质量分析发现的主要问题：质量标准方面质量标准方面（1）法定检验标准缺乏专属的鉴别反应,有关物质检查,对辅料的检查。（2）抗凝效价不能完全反映样品中含有杂质的情况，建议使用抗FXa因子和抗Fa因子效价。（3）建议修订药典pH值限度，从“5.58.5”修订为“5.58.0”。（4）建议修订装量检查限度，从“不少于标示量”修订为“2.0ml2.2ml”肝素钠注射液第21页，共29页。肝素钠注射液原材料原材
15、料 部分批次样品中含有较高含量的多硫酸软骨素和硫酸皮肤素。生产工艺生产工艺（1）对可见异物的控制不够，出厂检验时可见异物存在漏检现象。（2）样品批间差异较大，质量稳定性不够。（3）同一个企业产品有的批次含苯酚，有的不含苯酚，生产工艺有一定的随意性。处方处方 生产企业的处方不统一，处方合理性还有待探讨。包装包装 有的企业安瓿包装纸盒不够牢固，安瓿破损率较高。第22页，共29页。建议：1.肝素钠注射液标准修订增加杂质检查方法增加防腐剂检查增加渗透压检查修订pH值检查限度修订装量检查限度修订效价测定方法为底物法2.规范肝素钠注射液的生产工艺和处方3.注重对肝素原料的质量控制（粗品、精品)4.继续肝素
16、的质量研究工作杂质分析、结构分析（核磁、离子色谱法单糖组成、游离和结合硫酸根含量等）、分子量与分子量分布测定等工作肝素钠注射液第23页，共29页。胸腺肽背景：胸腺肽是从健康猪或牛胸腺中提取的分子量小于10000道尔顿的的混合多肽类药物；具有调节人体细胞免疫功能的作用，能促进T淋巴细胞成熟。用于各种原发性或继发性T细胞缺陷、各种细胞免疫功能低下的疾病和肿瘤的辅助治疗；临床上常用的制剂有：胸腺肽注射液、注射用胸腺肽，临床上使用：皮下或肌肉注射、静脉滴注；目前在临床用药的过程中胸腺肽注射剂还存在过敏等不良反应，该品种的质量及其标准还有待于进一步提高和完善；对胸腺肽注射剂进行评价性抽验，可以更好地了解
17、我国胸腺肽注射剂的生产和质量情况，发现存在的问题，进一步提高药品质量和进一步完善质量标准。第24页，共29页。胸腺肽 胸腺肽是从健康猪或小牛胸腺组织提取的分子量小于10000道尔顿的混合多肽，其中的多肽数量多达数十种，主要包括：胸腺肽家族：1 10、其中胸腺肽胸腺肽1 1为一个含有28氨基酸残基的多肽。胸腺肽家族：1 10 其他胸腺激素：胸腺体液因子（THF）、血清胸腺因子（FTS）、胸腺生成素等 其中胸腺生成素为一个含有49个氨基残基的多肽，胸腺五肽胸腺五肽是胸腺生成素 肽段的一部分，即位于胸腺生成素活性部位的 第3236位氨基酸序列。胸腺肽具有调节和增强人体细胞免疫功能的作用，其体内生物学
18、活性是胸腺产生的众多肽类激素的综合作用结果。胸腺肽注射剂在我国临床应用已有20多年的历史，2000年以前该品种执行的标准为地方标准，由于各种制剂的生产工艺，标准不同，产品质量及临床疗效也有较大的差异。直到2000年将该品种的地方标准上升为国家标准后，情况逐渐好转。第25页，共29页。胸腺肽法定检验小结：目前执行的国家药品标准基本可行，但部分检验项目尚存在问题：胸腺肽溶液的鉴别（1）中加入的硫酸铜溶液量太多，导致蓝色过剩掩盖双缩脲反应的紫红色。注射用胸腺肽标准的鉴别（1）中由于规格不同，供试品溶液的浓度会产生较大的差异，导致显色反应具有较大的差异。胸腺肽1的检查方法专属性较差等。第26页，共29
19、页。胸腺肽探索性研究：1、降压物质检查 2、胸腺肽1测定方法比较及胸腺肽1含量 与活性关系研究 3、特征图谱分析 4、溶液的澄清度与颜色检查 5、无菌检查方法学验证第27页，共29页。胸腺肽建议日常监管中重点对所使用的原材料胸腺进行监督检查，如胸腺的来源及质量情况，从源头保证产品的安全性。建议下一步进行工艺考察并统一生产工艺，建立原材料质控标准，并将原材料质控标准及制法收入终产品质量标准，以尽可能控制起始原料、制备工艺对终产品的组成和含量的影响，实现全过程控制。建议进一步完善质量标准，增加安全性检测项目（如降压物质检查）和产品的专属性鉴别项目（如特征图谱），保证该产品的安全性及不同生产企业生产的药品质量的相似性。第28页，共29页。谢谢 谢谢！第29页，共29页。
