1、地中海贫血诊断检查地中海贫血诊断检查 地中海贫血概况地中海贫血概况v地中海贫血（地中海贫血（Thalassemia）于1925年由Cooley和Lee首先描述，最早发现于地中海区域，当时称为地中海贫血，国外亦称海洋性贫血。这是一类由于常染色体遗传性缺陷，引起珠蛋白链合成障碍，使一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏，因而红细胞易被溶解破坏的溶血性贫血。我国自然科学名词审定委员会建议本病的名称为珠蛋白生成障碍性贫血。地中海贫血概况地中海贫血概况v定义：地中海贫血是遗传性慢性溶血性贫定义：地中海贫血是遗传性慢性溶血性贫血；血；v本质特征：由于珠蛋白基因的缺失或点突本质特征：由于珠蛋白基因的缺失或点突变
2、使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几变使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种种合成减少合成减少或或不能合成不能合成(mRNAmRNA,但肽链结但肽链结构正常构正常)，导致血红蛋白的组分改变，导致血红蛋白的组分改变，肽肽链失平衡链失平衡，导致导致RBCRBC寿命缩短及过早破坏寿命缩短及过早破坏所致的所致的慢性溶贫慢性溶贫。地中海贫血概况地中海贫血概况地贫：地贫：珠蛋白基因缺失或缺陷使珠蛋白基因缺失或缺陷使珠珠蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成蛋白链的合成受到部分或完全抑制，造成链链的合成减少，过剩的的合成减少，过剩的链聚合成四聚体，在红链聚合成四聚体，在红细胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过细
3、胞内沉积，使红细胞变形性降低，不易通过微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的微循环及脾窦与脾索间的基膜而造成红细胞的过度破坏。过度破坏。地中海贫血概况地中海贫血概况地贫：地贫：珠蛋白基因突变导致珠蛋白基因突变导致珠蛋白链珠蛋白链合成受到部分或完全抑制，过剩的合成受到部分或完全抑制，过剩的链聚链聚合成不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，合成不稳定的四聚体，在红细胞内沉积，造成无效造血和红细胞的过度破坏。造成无效造血和红细胞的过度破坏。地贫地域分布地贫地域分布v地中海贫血多见于黑人(黑人中25%至少有一个基因缺陷)，地中海贫血多见于地中海地区或东南亚。v我国以广东、广西、海南、四川、重庆等省区发病率
4、较高，在北方较为少见。Thalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一中国南方不同高发地中国南方不同高发地区人群携带率区人群携带率 1 23%中国南方地中海贫血人群携带率中国南方地中海贫血人群携带率 地区地区携带率携带率(%)(%)地贫地贫 地贫地贫 广东广东 8.53 2.54 广西广西 14.95 6.78 四川、重庆四川、重庆 1.92 2.18 台湾台湾 4.20 1.10 香港香港 5.02 3.41地贫的危害性地贫的危害性地贫纯合子：致死性出生缺陷地贫纯合子：致死性出生缺陷重型重型 地贫地贫:胎儿水肿综合征胎儿水肿综合征 早产死胎或
5、出生前后死亡早产死胎或出生前后死亡 可导致严重产科并发症可导致严重产科并发症 无理想治疗方法无理想治疗方法重型重型 地贫地贫 出生后出生后1 1年内发病年内发病 多于未成年前因严重贫血而夭折多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗可维持输血和去铁治疗可维持,代价昂贵代价昂贵致残 地贫的病因地贫的病因v人类珠蛋白人类珠蛋白基因的遗传缺陷基因的遗传缺陷所至所至;v人类人类珠蛋白基因簇位于珠蛋白基因簇位于11p15.511p15.5。点突点突变变（少数为缺失）（少数为缺失）地贫；地贫；v人类人类珠蛋白基因簇位于珠蛋白基因簇位于16pter-p13.316pter-p13.3。缺失缺失（少数为点突
6、变）（少数为点突变）地贫；地贫；地贫的遗传方式v 常染色体隐性遗传病常染色体隐性遗传病v 若夫妻为同型地中海型贫血的携带者，每次怀孕，其子女有1/4的机会为正常，1/2的机会为带因者，另1/4的机会为重型地中海型贫血患者，因此，在遗传咨询及产前诊断方面，这是非常重要的疾病地贫的分类地贫的分类v根据遗传缺陷导致不同的肽链根据遗传缺陷导致不同的肽链（等）合成障碍通常将等）合成障碍通常将地贫分为地贫分为、和、和四四个类型，以个类型，以和和地贫最常见。地贫最常见。地贫临床类型地贫临床类型v临床上将地贫分为轻、中、重三个临床类型。临床上将地贫分为轻、中、重三个临床类型。v(1)轻型：轻度贫血或无症状，一
7、般在调查家族史时轻型：轻度贫血或无症状，一般在调查家族史时发现。发现。v(2)中间型：轻度至中度贫血，患者大多可存活至成中间型：轻度至中度贫血，患者大多可存活至成年。年。v(3)重型：出生数日即出现贫血、肝脾肿大进行性加重型：出生数日即出现贫血、肝脾肿大进行性加重，黄疸，并有发育不良，其特殊表现有：头大、重，黄疸，并有发育不良，其特殊表现有：头大、眼距增宽、马鞍鼻、前额突出、两颊突出，其典型眼距增宽、马鞍鼻、前额突出、两颊突出，其典型的表现是臀状头，长骨可骨折。的表现是臀状头，长骨可骨折。骨骼骨骼改变是骨髓改变是骨髓造造血功能血功能亢进、骨髓腔变宽、皮质变薄所致。少数患亢进、骨髓腔变宽、皮质变
8、薄所致。少数患者在者在肋骨肋骨及脊椎之间发生胸腔肿块，亦可见胆石症、及脊椎之间发生胸腔肿块，亦可见胆石症、下肢溃疡。常见并发症有急性心包炎、继发性下肢溃疡。常见并发症有急性心包炎、继发性脾功脾功能亢进能亢进、继发性、继发性血液病血液病。缺失型贫缺失型贫-v静止型(地贫2，缺失1)v标准型(缺失型地贫1，缺失2)v中间型(Hb H 病，缺失3)v重型(Hb Barts 胎儿水肿综合征，缺失4)。非缺失型非缺失型地贫地贫-v中间型(Hb CS型Hb H 病)v中间型(Hb QS型Hb H 病)地贫地贫临床分型临床分型地贫临床分型地贫临床分型 重型重型地贫：又叫地贫：又叫HbBartsHbBarts
9、水肿综合征，水肿综合征，4 4个个基因都缺失了基因都缺失了(-(-SEASEA/-/-SEASEA)，在孕，在孕后期或出生后即死亡。后期或出生后即死亡。地贫临床分型地贫临床分型中间型中间型地贫：缺失地贫：缺失3 3个个基因基因(-/-SEA)或缺或缺2 2个个基因另有一个基因另有一个基基因突变因突变(T T/-SEA)，又叫又叫HbHHbH病，电泳大多可病，电泳大多可见见HbHHbH区带。区带。HbHb大多在大多在 T T60-100g/L60-100g/L左右。左右。轻型轻型地贫：缺失地贫：缺失2 2个个基因基因(/(/-SEA)(-/-)或或2 2个个基基因突变因突变(T T/T T)T
10、T T或缺或缺1 1个个基因另有一个基因另有一个基因突变基因突变(-/-)，又叫又叫地贫地贫1 1。轻度贫血。轻度贫血或不贫血。或不贫血。地贫临床分型地贫临床分型静止型静止型地贫：缺失地贫：缺失1 1个个基因基因(/(/-)或或1 1个个基因突变基因突变(/(/T T)又叫又叫地贫地贫2 2，不会贫血。，不会贫血。T T地贫临床分型地贫临床分型v轻型轻型地贫：地贫：贫血在贫血在100g/L100g/L以上，杂合子以上，杂合子 地贫。地贫。v中间型中间型地贫：地贫：Hb60-100g/LHb60-100g/L之间。双重杂合之间。双重杂合 子或杂合子地贫。子或杂合子地贫。v重型重型地贫：地贫：Hb
11、Hb在在60g/L60g/L以下。纯合子地贫或以下。纯合子地贫或 双重杂合子地贫。双重杂合子地贫。v静止型静止型地贫：不贫血，杂合子地贫。地贫：不贫血，杂合子地贫。地贫基因的遗传缺陷地贫基因的遗传缺陷(1)(1)v地贫地贫多为基因缺失所致。根据基因缺失多多为基因缺失所致。根据基因缺失多寡将寡将地贫分为地贫分为4 4种类型：种类型：正常正常:共共4个基因个基因 地贫地贫2 2：缺失一个基因；：缺失一个基因；地贫地贫1 1：缺失：缺失2 2个基因；个基因；HbHHbH病病 ：缺失：缺失3 3个基因；个基因；HbBartHbBart,s s胎儿水肿综合症胎儿水肿综合症：缺失所有：缺失所有4 4个个
12、基因；基因；常见的常见的地贫基因缺陷地贫基因缺陷1)1)v正常正常:/v东南亚缺失型（东南亚缺失型（-SEA)-SEA)：-/-/(地贫1)v右侧缺失型（右侧缺失型（-3.7-3.7）:-/-/(地贫2)vv左侧缺失型（左侧缺失型（-4-4。2 2）：）：-/-/(地贫2)常见的常见的地贫基因缺陷地贫基因缺陷2)2)地贫的点突变（较少见）地贫的点突变（较少见）：HbC.SHbC.S(2 2 基因编码第基因编码第142142终止密码子突变终止密码子突变););HbQS(HbQS(2 2基因第基因第125125密码子的三联碱基突变密码子的三联碱基突变););地贫基因的遗传缺陷地贫基因的遗传缺陷(2
13、)(2)v地贫多为地贫多为基因的点突变所致。有些点突变使基因的点突变所致。有些点突变使链链完全不能生成，称完全不能生成，称0 0地贫；有些突变仅使地贫；有些突变仅使链生成链生成减少，称减少，称+地贫。据此可将地贫。据此可将地贫分为：地贫分为：+/0 0/；+/+；+/0 0；0 0/0 0；中国常见的中国常见的地贫基因缺陷地贫基因缺陷 地贫基因突变地贫基因突变 地贫基因突变类型共地贫基因突变类型共2727种；种；广西、百色市常见的广西、百色市常见的地贫基因突变类型：地贫基因突变类型：CD41-42(-TTCT);CD17(A-T);-28(A-G);CD41-42(-TTCT);CD17(A-
14、T);-28(A-G);IVS-654(C-T);CD71-72(+A)IVS-654(C-T);CD71-72(+A)等。前二者等。前二者 占占71%71%。地贫的基因缺失地贫的基因缺失：少见；：少见；临床表现和实验室检查临床表现和实验室检查v轻型地贫轻型地贫包括包括2 2、1 1、+/或或0 0/地贫杂合子等。临床上几乎无症状；地贫杂合子等。临床上几乎无症状；MCVMCV和（或和（或)MCH,RBC)MCH,RBC脆性脆性，新生，新生儿脐血儿脐血HbBartHbBart,s s含量含量1%-15%1%-15%之间（之间（2 2、1 1）或肽链分析或肽链分析链链+（地贫地贫1 1）、血红蛋白
15、）、血红蛋白分析分析HbAHbA2 2(+/或或0 0/地贫杂合子地贫杂合子)；家系调查其父母中一方或双方为家系调查其父母中一方或双方为或或地地贫杂合子；此型无需治疗。贫杂合子；此型无需治疗。v中间型中间型包括包括HbHHbH病、病、+/+、+/0 0、0 0/0 0合并合并地贫等。婴儿期以后渐出现地贫等。婴儿期以后渐出现贫血，为小细胞低色素性中度贫血，地贫貌贫血，为小细胞低色素性中度贫血，地贫貌-+-+，肝脾轻至中度肿大；，肝脾轻至中度肿大；MCVMCV和（或和（或)MCH,RBC)MCH,RBC脆性脆性，HbHb电电泳可见泳可见HbHHbH和和/或或HbBartHbBart,s s区带（区
16、带（HbHHbH病）、病）、HbFHbF 区带增浓区带增浓HbFHbF%之间（之间（地贫）；父母双方均为地贫）；父母双方均为或或地贫的杂合子；地贫的杂合子；v重型地贫重型地贫 HbBartHbBart,s s胎儿水肿综合症（重型胎儿水肿综合症（重型地贫）地贫）：严重的孕毒症；流产、死产或产后不久死亡，严重的孕毒症；流产、死产或产后不久死亡，胎儿水肿，大胎盘，胎儿水肿，大胎盘，HbBartHbBart,s s含量含量（80%80%）；）；重型重型地贫地贫：包括包括+/+、+/0 0、0 0/0 0；地贫貌；地贫貌+，小细胞低色素性，小细胞低色素性重度贫血（生后重度贫血（生后3 3个月出现），肝个
17、月出现），肝脾肿大明显，体格发育迟晚；铁超负脾肿大明显，体格发育迟晚；铁超负荷荷器官功能障碍如心衰等器官功能障碍如心衰等;少年早少年早夭夭;MCV,RBCMCV,RBC脆性脆性，HbHb电泳可见电泳可见HbFHbF 区带增浓区带增浓HbFHbF，%；父母双方；父母双方均为均为地贫的杂合子；地贫的杂合子；诊断诊断v临床特点实验室检查父母调查临床特点实验室检查父母调查阳性基因分析阳性基因分析地中海贫血检查地中海贫血检查1.1.血细胞分析血细胞分析2.2.红细胞脆性试验红细胞脆性试验3.3.血红蛋白分析血红蛋白分析4.4.地贫基因检测地贫基因检测 第1-31-3项为筛查项目项为筛查项目地中海贫血初筛
18、检查地中海贫血初筛检查v1.1.血细胞分析血细胞分析vMCV 80fl 和（或）和（或）MCH 27pg,则高度怀则高度怀疑为地贫疑为地贫;平均红细胞体积（平均红细胞体积（MCVMCV）80fl80fl为地为地贫表型阳性，贫表型阳性，地贫和中间型、轻地贫和中间型、轻型型地贫和部分静止型地贫和部分静止型地贫基因地贫基因携带者均为阳性，携带者均为阳性，但有部分静止型但有部分静止型地贫基因携带者是正常的。地贫基因携带者是正常的。地中海贫血初筛检查地中海贫血初筛检查v2.红细胞脆性试验红细胞脆性试验v红细胞渗透脆性试验阳性（红细胞渗透脆性试验阳性（ROFT;0.60):即可怀疑为地贫即可怀疑为地贫;红
19、细胞脆性试验在基层单位可用，但在红细胞脆性试验在基层单位可用，但在有血细胞分析仪的单位就不应该单用于有血细胞分析仪的单位就不应该单用于地贫筛查，地贫筛查，此项检测误漏诊率高，此项检测误漏诊率高，且英且英美地贫筛查指南中均没有此项目。美地贫筛查指南中均没有此项目。地中海贫血初筛检查地中海贫血初筛检查v3.3.血红蛋白分析血红蛋白分析vHbA2 3.5%,则为则为地贫基因携带者地贫基因携带者vHbFHbF:中间型和重型中间型和重型地明显增高地明显增高v新生儿脐血新生儿脐血HbBartsHbBarts定量：定量：HbBartsHbBarts达达1%-1%-2%2%为为 静止型静止型地贫基因携带者地贫
20、基因携带者 ，HbBartsHbBarts达达5%-15%5%-15%为轻型为轻型地贫地贫 ，HbBartsHbBarts达达25%25%为为HbHHbH病病。地中海贫血确诊试验地中海贫血确诊试验v地贫诊断基因芯片地贫诊断基因芯片v地贫基因诊断条膜地贫基因诊断条膜(反向点杂交反向点杂交)/一管法多重一管法多重PCRvASO寡核苷酸探针点杂交寡核苷酸探针点杂交vDNA测序测序DNA诊断技术诊断技术 多重多重PCR（multiplex PCR）等位基因特异性性寡核苷酸杂交等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO）反向点杂交反向点杂交（RDB）变性高效液相色谱（变性高效液相色谱（DHPLC）基于基于微孔
21、板微孔板(microtiter well-based)高通量检测高通量检测 实时实时PCR(real-time PCR)单管多重单管多重PCRPCR-ASOGenotypeFather CDs41-42(CTTT)/N MotherIVS-2-654(C T)/N FetusCDs41-42 /IVS-2-654Normal control N /N 鉴别诊断鉴别诊断v缺铁性贫血遗传性球形红细胞增多症缺铁性贫血遗传性球形红细胞增多症传染性肝炎或肝硬化传染性肝炎或肝硬化预防预防v地贫地贫宣教宣教v地贫地贫筛查筛查v遗传遗传咨询咨询、风险率计算风险率计算、建议、建议;v地贫杂合子间的婚配应进行地贫
22、高危胎儿的地贫杂合子间的婚配应进行地贫高危胎儿的产前诊断产前诊断地贫的人群筛查地贫的人群筛查v育龄妇女育龄妇女(或孕妇或孕妇)的筛查的筛查v新生儿筛查新生儿筛查v学生等群体的筛查学生等群体的筛查产前诊断产前诊断v产前诊断的指征及告知和知情同意产前诊断的指征及告知和知情同意v产前诊断的取材产前诊断的取材:绒毛绒毛/羊水羊水/脐带血脐带血/外周血外周血或宫或宫 颈液胎儿细胞颈液胎儿细胞v产前诊断的流程及其采用的方法产前诊断的流程及其采用的方法地贫的婚前或产前筛查原则地贫的婚前或产前筛查原则1.1.地贫高发区夫妻双方要做地贫筛查。地贫高发区夫妻双方要做地贫筛查。2.2.血液学表型结合分子诊断，必要时
23、进行家系血液学表型结合分子诊断，必要时进行家系 分析，综合各种检查结果才能得出结论。分析，综合各种检查结果才能得出结论。3.3.表型与基因诊断结果有不相符时，要谨慎处表型与基因诊断结果有不相符时，要谨慎处理，需用其它分子诊断方法进一步分析理，需用其它分子诊断方法进一步分析。地贫的产前诊断流程:v产科筛查产科筛查MCV 80fl和和MCH 27pg Hb 分析分析遗遗传咨询传咨询:vHbA2(-Thal)HbA2 或或链阳性链阳性(thal(thal-)-)v一方一方HbA2正常正常,另一方另一方HbA2正常方进行正常方进行基因分基因分析析;v一方一方链阳性链阳性,另一方另一方链阴性链阴性阴性方
24、阴性方进行进行基基因分析因分析;-v一方一方HbA2正常正常,另一方另一方HbA2双方进行双方进行基因分基因分析析;v如夫妇双方为同类型地贫如夫妇双方为同类型地贫 抽羊水进行地贫的基抽羊水进行地贫的基因分析因分析 告知结果告知结果*地贫筛查后哪些情况地贫筛查后哪些情况需做地贫基因检测？需做地贫基因检测？1.Hb正常或轻度下降，MCV下降和（或）MCH下降，但电泳没有阳性发现的（HbA2检测误差，轻型或静止型地贫），要做地贫基因检测。2.夫妇双方一方确定为（）地贫，另一方做地贫基因。地贫的基因分析局限性地贫的基因分析局限性1.由于分子诊断技术本身的局限性，地贫基因诊断的误诊及漏诊率约2%。地贫的基因分析局限性地贫的基因分析局限性2.只能检测三种常见的缺失型（-SEA、a3.7、a4.2）地贫基因。不能检出非缺失（点突变）地贫。诊断准确率约98%。地贫的基因分析局限性地贫的基因分析局限性v3.只能检测17种国内常见的地贫基因。（41-42M，654M，-28M，-71-72M，17M，bEM，31M，27/28M，IVS1-1M，43M，-32M，-29M，-30M，14-15M，CAP，IntM，IVS1-5M）诊断准确率约98%。地贫的基因分析局限性地贫的基因分析局限性v4.标本有母体细胞污染时会影响结果的准确性。
