1、第八章第八章 食品中食品中其它致病菌的检验其它致病菌的检验 第二节第二节 食品中蜡样芽孢杆菌的检验食品中蜡样芽孢杆菌的检验一、生物学特性一、生物学特性 （一）、形态与染色 革兰氏阳性大杆菌，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，周身鞭毛，有动力。用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢 荧光染色的铜绿假单胞杆菌和蜡样芽孢杆菌一、生物学特性一、生物学特性（二）、培养特性1、需氧，最适生长3032.2、在肉汤中混浊生长，有菌膜或壁环，振摇易乳化。3、在普通琼脂平板上，菌落灰白色,不透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。4 4、在血平板上，菌落呈浅灰色，不透明
2、，、在血平板上，菌落呈浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。似白色毛玻璃状，有溶血环。5 5、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落呈粉红色（表示不发酵甘露醇）呈粉红色（表示不发酵甘露醇）,周围周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）（三）、生化反应（三）、生化反应1、能分解GLU，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产酸不产气。2、不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨醇，木糖3、H2S（-），尿素酶试验（-）卵磷脂酶（+），VP试验（+），液化明胶，胨化中乳。（三）、生化反应（三）、生化反应 麦芽糖：阳性（三）、生化反应（三）、生化反应 甘露醇：阴
3、性（三）、生化反应（三）、生化反应 木糖：阴性（三）、生化反应（三）、生化反应 尿素酶试验：阴性未接种接种（四）、抵抗力（四）、抵抗力1 1、耐热；、耐热；2 2、对抗菌素的敏感性。、对抗菌素的敏感性。二、流行病学二、流行病学（一）、细菌分布 蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多生熟食品中常见。已从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及各种甜点等。在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的主要原因；在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。二、流行病学二、流行病学（一
4、）、细菌分布（一）、细菌分布 以前调查各种食品514件，发现本菌：日本1641件中有193件阳性，阳性率11.8%11.8%；国内480件中有221件阳性，阳性率46%46%；乳制品阳性率77%77%；水果、干果阳性率8.1%8.1%；肉制品阳性率26%26%。（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况1、季节性强：（610月）夏秋季为高峰期2、中毒发病率高：60%60%100%100%，集团中爆发，与葡萄球菌相似3、中毒与性别、年龄无关：4、潜伏期长短与中毒症状相关：呕吐症 0.50.55h5h，发病 腹泻 8h8h后后5、污染源：主要泥土，灰尘，通过昆虫，
5、不洁用具，工作人员传播，原料也有.6、常见中毒食品：乳类食品，肉类，米饭，淀粉类食品，甜点心，凉拌蔬菜，水果，色拉。国内：与淀粉质食品相关多，7、临床症状：（1）呕吐型（2）腹泻型三、微生物检验三、微生物检验（一）检验程序（一）检验程序 检样检样 稀释处理稀释处理镜检镜检 平板分离平板分离菌落计数菌落计数 培养特性观察培养特性观察 报告结果报告结果 生化试验生化试验 证实试验证实试验 三、微生物检验三、微生物检验（二）操作步骤：1、菌数测定 以无菌操作将检样25g(ml),用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-110-5的稀释液。取各稀释液0.1ml，接种在两个选择性培养基甘露醇卵黄多孢菌素（
6、MYP）琼脂培养基上，用L形涂棒涂布于整个表面，置361恒温箱培养 12-20h后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇），周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计算后从中选取5个此种菌落做证实试验。三、微生物检验三、微生物检验 操作步骤：2、分离试验 取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置37培养12-20h，挑取可疑的蜡状芽胞杆菌菌落接种于肉汤和营养琼脂作成纯培养，然后做证实试验。3 证实试验（1）镜检观察形态（2）培养特性（3）生化性状及分型三、微生物检验三、微生物检验（三）结果报告 根据证实为蜡状芽胞杆菌的菌落数计算出该
7、平板上的菌落数，然后乘以稀释倍数，即得每g(ml)样品中所含蜡状芽孢杆菌数。如MYP平板上的可以菌落为25个，取5个鉴定，证实为四个，乘上稀释倍数（104），再乘上1g(ml)检样数（取的是0.1ml样)，则N=25*4/5*104*10=2*106 报告每个g(ml)检样中含蜡状芽胞杆菌的数量（个/个g(ml)结果报告或MYPMYP检样25克生化试验菌落计数0.1ml镜检镜检挑可疑菌落血平板或血平板或营养琼脂营养琼脂或思考题思考题 1、引起蜡样芽胞杆菌食物中毒的常见食物有哪些，什么条件下可引起蜡样芽胞杆菌食中毒。2、蜡样芽胞杆菌的形态与染色特性如何。3、蜡样芽胞杆菌在普通营养琼脂和甘露醇卵黄多粘菌琼脂平板上生长的菌落特征如何？4、写出蜡样芽胞杆菌检验的基本程序
