1、 蔬菜中蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留量快速检测农药残留量快速检测 酶抑制率法酶抑制率法(分光光度法分光光度法)天马行空官方博客：http:/ T=It/I0，而lgT称为吸光度A，即 lgT=lgI0/It 入射光入射光 I0透射光透射光 It测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横为横坐标，吸光度（坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为一曲线，此曲线即为吸收光谱吸收光谱。不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光不同浓度的同一
2、物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光度随浓度增大而增大。度随浓度增大而增大。在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。天马行空官方博客：http:/ Visual Spectroscopy0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示I0It参比参比样品样品bCTIIAtlglg0入射光入射光 I0透射光透射光 It原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定
3、吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。试剂试剂lpH8.0缓冲溶液 分别取11.9g无水磷酸氢二钾与.g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。l显色剂 分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4冰箱中保存。l底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4冰箱中保存备用。l乙酰胆碱酯酶 根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化A0值应控制在0.3以上。摇匀后置4冰箱中保存备用。主要仪器主要仪器分光光度计,常量天平分析步骤样品处理：选取有代表
4、性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，振荡12min，倒出提取液,静置35min,待用。对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37 C放置15min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3 min的吸光度变化值A0样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值At结果计算 抑制率(%)=(A0-At)/A0100式中：A0对照溶液反应3min吸光度的变化值；At样品溶液反应3min吸光度的变化值；结果判定 l结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。l当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时,表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。l阳性结果的样品需要重复检验2次以上。天马行空官方博客：http:/
