免疫增殖性疾病及其免疫检测课件.ppt

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1、2022-8-1检验本科1免疫增殖性疾病及免疫增殖性疾病及其免疫检测其免疫检测2022-8-1检验本科2第一节 免疫增生性疾病的概念及分类一、概念 免疫增殖病(免疫增殖病(immunoproliferative diseasesimmunoproliferative diseases,IPDIPD)主要是指免疫器官、免疫组织或免疫细胞(淋)主要是指免疫器官、免疫组织或免疫细胞(淋巴细胞、单核巴细胞、单核-巨噬细胞)异常增生(良性或恶性)巨噬细胞)异常增生(良性或恶性)所引起的疾病,多属于血液病范围。所引起的疾病,多属于血液病范围。这类疾病的表现有免疫功能异常及免疫球蛋白质这类疾病的表现有免疫功

2、能异常及免疫球蛋白质和量的变化。和量的变化。2022-8-1检验本科3二、分类二、分类 IPD包括良性和恶性增殖两大类。包括良性和恶性增殖两大类。目前主要是按增殖细胞表面标志分类目前主要是按增殖细胞表面标志分类 1、浆细胞增生:免疫球蛋白异常增生性疾病、浆细胞增生:免疫球蛋白异常增生性疾病2、淋巴细胞恶性增生:淋巴细胞白血病和淋、淋巴细胞恶性增生:淋巴细胞白血病和淋巴瘤巴瘤3、网质细胞异常增殖:何杰金氏病、网质细胞异常增殖:何杰金氏病2022-8-1检验本科4 免疫球蛋白异常增生性疾病免疫球蛋白异常增生性疾病是指由于是指由于浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白异浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白

3、异常增生造成机体病理损伤的一组疾病。常增生造成机体病理损伤的一组疾病。免疫球蛋白多克隆增殖:指血清中两个免疫球蛋白多克隆增殖:指血清中两个克隆以上的浆细胞同时增生,体内多种克隆以上的浆细胞同时增生,体内多种Ig异常增高和异常增高和/或尿中出现游离轻链或重链的或尿中出现游离轻链或重链的病理现象。多为良性反应性增殖或继发某病理现象。多为良性反应性增殖或继发某一疾病。一疾病。2022-8-1检验本科5 免疫球蛋白的单克隆增殖:是由免疫球蛋白的单克隆增殖:是由单株浆细增殖所引起的理化性质十单株浆细增殖所引起的理化性质十分均一的分均一的Ig增高所致的疾病。多呈增高所致的疾病。多呈恶性发展趋势,故免疫球蛋

4、白异常恶性发展趋势,故免疫球蛋白异常增生性疾病多专指单克隆免疫球蛋增生性疾病多专指单克隆免疫球蛋白异常增生的疾病。白异常增生的疾病。2022-8-1检验本科6第二节第二节 免疫增生性疾病的免疫损伤机制免疫增生性疾病的免疫损伤机制一、浆细胞异常增殖一、浆细胞异常增殖 浆细胞异常增殖通常是指单克隆浆细浆细胞异常增殖通常是指单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。多肽链亚单位合成异常。浆细胞异常增殖是内因与外因相互作浆细胞异常增殖是内因与外因相互作用的结果。用的结果。2022-8-1检验本科7二、正常体液免疫抑制二、正常体液免疫抑制IL

5、-4启动休止期启动休止期B细胞进入细胞进入 DNA合成期;合成期;IL-5促进促进B细胞继续增殖细胞继续增殖IL-6促进促进B细胞分化为浆细胞。细胞分化为浆细胞。抑抑制制 浆细胞瘤患者体内浆细胞瘤患者体内IL-6水平异常增高,水平异常增高,可抑制可抑制IL-4的产生,从而抑制了整个体液的产生,从而抑制了整个体液免疫反应过程。免疫反应过程。2022-8-1检验本科8 另外,浆细胞瘤细胞可以分泌另外,浆细胞瘤细胞可以分泌大量的无抗体活性的免疫球蛋白,大量的无抗体活性的免疫球蛋白,封闭细胞表面的封闭细胞表面的Fc受体,影响对其受体,影响对其他生物信息的接收,并可阻断他生物信息的接收,并可阻断B细细胞

6、的增殖,发育和影响抗原提呈。胞的增殖,发育和影响抗原提呈。2022-8-1检验本科9三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理损伤三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理损伤 大量产生无正常免疫功能的单克隆大量产生无正常免疫功能的单克隆型免疫球蛋白或其片段,可以沉积于组型免疫球蛋白或其片段,可以沉积于组织,造成组织变性和淋巴细胞浸润,导织,造成组织变性和淋巴细胞浸润,导致相应器官的功能障碍;因其血浆浓度致相应器官的功能障碍;因其血浆浓度过高而导致血液粘稠度增加,产生一系过高而导致血液粘稠度增加,产生一系列直接或间接的病理损害。列直接或间接的病理损害。2022-8-1检验本科10四、溶骨性病变四、溶骨性病变

7、浆细胞瘤大多伴有溶骨性破坏,所浆细胞瘤大多伴有溶骨性破坏,所以也称骨髓瘤。以也称骨髓瘤。溶骨性破坏是由于骨质形成细胞调溶骨性破坏是由于骨质形成细胞调节功能紊乱的结果。患者体内原发性的节功能紊乱的结果。患者体内原发性的高水平高水平IL-6是使破骨细胞数量增多和功是使破骨细胞数量增多和功能亢进的重要因子。能亢进的重要因子。2022-8-1检验本科11第三节第三节 单克隆免疫球蛋白增殖病单克隆免疫球蛋白增殖病 该病突出的特点是患者血清中存在异常该病突出的特点是患者血清中存在异常增多的单克隆蛋白(增多的单克隆蛋白(M M蛋白),其在类别、亚蛋白),其在类别、亚类、类、H H链、链、L L链抗原结构等方

8、面完全相同,但链抗原结构等方面完全相同,但多无免疫活性,又称副蛋白。多无免疫活性,又称副蛋白。本周蛋白(本周蛋白(Bence-Jones Bence-Jones proteinprotein)为过量合成的为过量合成的或或型轻链,型轻链,游离存在于血清中,可从患者尿中排出。游离存在于血清中,可从患者尿中排出。2022-8-1检验本科12一、多发性骨髓瘤一、多发性骨髓瘤 多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生的多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生的恶性肿瘤,也称浆细胞瘤,因其引起骨恶性肿瘤,也称浆细胞瘤,因其引起骨破坏而得名,还经常伴有贫血,肾功能破坏而得名,还经常伴有贫血,肾功能损害和免疫功能障碍。损害和免疫功能

9、障碍。发病机制:不明发病机制:不明2022-8-1检验本科13 临床特征(临床特征(预后不良)预后不良)1、骨质破坏:骨髓瘤、骨质破坏:骨髓瘤C增生、浸润破坏骨组织增生、浸润破坏骨组织骨质疏松、溶骨改变骨质疏松、溶骨改变骨痛、骨折;骨痛、骨折;2、贫血:骨髓损害、贫血:骨髓损害贫血、粒贫血、粒C和血小板和血小板,出血;出血;3、感染;、感染;4、肾功能损害;、肾功能损害;5、其他组织损害(、其他组织损害(NS)。)。2022-8-1检验本科14 免疫学特征免疫学特征1 1、血清中有大量的、血清中有大量的M M蛋白,蛋白,IgG30gIgG30gL L、IgA10gIgA10gL L、IgM10

10、gIgM10gL L、IgD2.0gIgD2.0gL L、IgE2.0gIgE2.0gL L或尿中有本周蛋白(或尿中有本周蛋白(2.0g2.0g24h24h尿);尿);2 2、骨髓中有大量不成熟的浆细胞(、骨髓中有大量不成熟的浆细胞(15%15%),),组织活检证实有浆细胞瘤;组织活检证实有浆细胞瘤;3 3、正常的、正常的IgIg水平明显水平明显。2022-8-1检验本科15 诊断标准诊断标准 免疫学特征免疫学特征3项中具备项中具备2项即可诊断;但项即可诊断;但IgM或或IgD除具备免疫学特征除具备免疫学特征1、2项外,还须项外,还须有多处溶骨性损害。有多处溶骨性损害。确诊为多发性骨髓瘤后,还

11、要进一步作确诊为多发性骨髓瘤后,还要进一步作免疫学检查分型。免疫学检查分型。MM不同类型不同类型 发生率发生率IgG型最常见(型最常见(50%)、)、IgA型型次之(约次之(约2025%)、)、IgD型少见(约型少见(约12%)、)、IgE型、型、IgM型罕见。型罕见。2022-8-1检验本科16二、巨球蛋白血症二、巨球蛋白血症 以分泌以分泌IgMIgM的浆细胞恶性增殖为病的浆细胞恶性增殖为病理基础的疾病,病因不明。理基础的疾病,病因不明。临床特征临床特征1、老年发病;、老年发病;2、淋巴结、淋巴结-肝肝-脾肿大为其特征;脾肿大为其特征;3、有不明原因贫血及出血倾向;、有不明原因贫血及出血倾向

12、;4、粘滞过高综合征。、粘滞过高综合征。2022-8-1检验本科17 免疫学特征免疫学特征1、血清中有单克隆、血清中有单克隆IgM含量含量,一般,一般10g/L,为其特点;为其特点;2、红细胞正色素性贫血、白细胞和血小板、红细胞正色素性贫血、白细胞和血小板减少;减少;3、骨髓中有淋巴细胞样浆细胞浸润;、骨髓中有淋巴细胞样浆细胞浸润;4、血清相对粘度、血清相对粘度,4;5、本周蛋白尿(、本周蛋白尿(1030%患者可有,常为患者可有,常为)。)。2022-8-1检验本科18三、重链病三、重链病 是由于浆细胞发生突变和异常增是由于浆细胞发生突变和异常增生,致使血清和尿中出现大量游离的生,致使血清和尿

13、中出现大量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致的疾病。的疾病。根据重链的不同可进一步进行免根据重链的不同可进一步进行免疫分型,以疫分型,以、型为多见。型为多见。2022-8-1检验本科19四、轻链病四、轻链病 是突变的单克隆浆细胞产生大量轻链,是突变的单克隆浆细胞产生大量轻链,血浆中轻链含量异常增加,增加的轻链从肾血浆中轻链含量异常增加,增加的轻链从肾脏排泄或沉积于肾脏和其他内脏组织引起淀脏排泄或沉积于肾脏和其他内脏组织引起淀粉样变性。粉样变性。临床特点临床特点1、发病的年龄轻;、发病的年龄轻;2、以发热、贫血,严重、以发热、贫血,严重肾功能损害(肾功能损害(

14、型)为特点;型)为特点;3、多数有溶骨、多数有溶骨性损害。性损害。4、有淀粉样变性。、有淀粉样变性。2022-8-1检验本科20 免疫学特征免疫学特征1、血清中异常轻链水平、血清中异常轻链水平,轻链蛋白,轻链蛋白/型比值明显异常,正常型比值明显异常,正常Ig水平水平或明或明显显;2、尿中和血清中可检出同类型的轻链、尿中和血清中可检出同类型的轻链片段;片段;3、本周蛋白尿。、本周蛋白尿。2022-8-1检验本科21表表1 四种浆细胞疾病的比较四种浆细胞疾病的比较疾病疾病 多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤 巨球蛋白血症巨球蛋白血症 重链病重链病 轻链病轻链病性别性别 男男60%男男80%男男100%男男5

15、0%视力障碍视力障碍 淋巴结肿大淋巴结肿大 少见少见 多见多见 多见多见 多见多见肝脾肿大肝脾肿大 少见少见 多见多见 多见多见 少见少见溶骨性改变溶骨性改变 多见多见 少见少见 不见不见 少见少见肝功能损害肝功能损害M蛋白种类蛋白种类 IgG、A、D或或E IgM 重链重链 轻链轻链诊断后平诊断后平均生存期均生存期2年年 4年年 1年年2年年1年年2022-8-1检验本科22五、良性单克隆丙种球蛋白血症五、良性单克隆丙种球蛋白血症 是指血清中出现高是指血清中出现高IgIg水平,但无临床症状,水平,但无临床症状,往往因其他疾病就诊时发现血中有往往因其他疾病就诊时发现血中有M M蛋白,但蛋白,但

16、其并不呈进行性增加。其并不呈进行性增加。约有约有1 14 4左右的良性单克隆丙种球蛋白血左右的良性单克隆丙种球蛋白血症在症在1010年左右的时间里转变成恶性单克隆丙种年左右的时间里转变成恶性单克隆丙种球蛋白增多疾病,如果血中或尿中出现本周蛋球蛋白增多疾病,如果血中或尿中出现本周蛋白很可能是危险信号。白很可能是危险信号。2022-8-1检验本科23表表2 恶性与良性单克隆丙球病的鉴别诊断恶性与良性单克隆丙球病的鉴别诊断恶性单克隆丙种球蛋白病恶性单克隆丙种球蛋白病 良性单克隆丙种球蛋白良性单克隆丙种球蛋白病病症状症状 骨髓瘤或淋巴瘤的症状骨髓瘤或淋巴瘤的症状 无症状或原有基础疾病的症状无症状或原有

17、基础疾病的症状贫血贫血 几乎都出现几乎都出现 一般无,但可因其他疾病而伴发一般无,但可因其他疾病而伴发骨损害骨损害 溶骨性损害很普遍溶骨性损害很普遍 除转移性骨疾病外不常见除转移性骨疾病外不常见骨髓象骨髓象 浆细胞浆细胞10,形态正常或异常,形态正常或异常 浆细胞浆细胞10,形态一般正常,形态一般正常M蛋白蛋白 常高于常高于20g/dl,随病情而增高,随病情而增高 低于低于20g/dl,较稳定,较稳定正常正常Ig 降低降低 增高或正常增高或正常 游离轻链游离轻链 常出现在血清和尿中常出现在血清和尿中 一般呈阴性一般呈阴性2022-8-1检验本科24第四节第四节 免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测

18、免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测 包括定性实验和定量实验,实包括定性实验和定量实验,实验结果对于临床诊断与鉴别诊断、验结果对于临床诊断与鉴别诊断、观察治疗效果和判断预后具有重要观察治疗效果和判断预后具有重要的临床价值。的临床价值。2022-8-1检验本科25一、血清区带电泳一、血清区带电泳 是测定是测定M M蛋白的一种定性实验,常采蛋白的一种定性实验,常采用乙酸纤维素膜和琼脂糖电泳两种方法。用乙酸纤维素膜和琼脂糖电泳两种方法。M M蛋白在电泳后出现于蛋白在电泳后出现于-区带中,区带中,不同类型的不同类型的M M蛋白电泳后所处位置不同。蛋白电泳后所处位置不同。2022-8-1检验本科26 正常人

19、血清正常人血清区带较宽而且着色较淡,扫区带较宽而且着色较淡,扫描图显示一低矮蛋白峰。(图描图显示一低矮蛋白峰。(图1-A)单克隆丙种球蛋白增高时常在单克隆丙种球蛋白增高时常在区,呈现区,呈现浓密狭窄的蛋白带,经扫描显示为高尖蛋白浓密狭窄的蛋白带,经扫描显示为高尖蛋白峰(高:宽峰(高:宽2:1)。(图)。(图1-B、C)多克隆丙种球蛋白增高时,多克隆丙种球蛋白增高时,区带宽而浓区带宽而浓密,扫描图显示为宽大的蛋白峰。密,扫描图显示为宽大的蛋白峰。(图(图1-D)低丙种球蛋白血症时低丙种球蛋白血症时区无区带。区无区带。(图(图1-E)2022-8-1检验本科27注意区别:注意区别:1、溶血标本:血

20、红蛋白形成的、溶血标本:血红蛋白形成的位区带。位区带。2、陈旧血清:聚合、陈旧血清:聚合IgG形成的近原位窄区带。形成的近原位窄区带。3、含类风湿因子的血清:位于、含类风湿因子的血清:位于区中间的细区中间的细区带。区带。遇可疑情况应做免疫电泳等分析加以区遇可疑情况应做免疫电泳等分析加以区别。别。2022-8-1检验本科28二、免疫电泳二、免疫电泳 免疫电泳是将区带电泳和免疫双向扩散免疫电泳是将区带电泳和免疫双向扩散相结合的一项技术。相结合的一项技术。血清标本先行区带电泳分成区带,继而血清标本先行区带电泳分成区带,继而用特定的抗血清进行免疫扩散,阳性样本的用特定的抗血清进行免疫扩散,阳性样本的M

21、蛋白将在适当的部位形成异常沉淀弧,根蛋白将在适当的部位形成异常沉淀弧,根据抗血清的种类、电泳位置及沉淀弧的形状据抗血清的种类、电泳位置及沉淀弧的形状可以对可以对M蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链作蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链作出判定。出判定。2022-8-1检验本科29 一般多用抗一般多用抗IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、和和轻链等轻链等5 5种抗血清进行实验,用抗正常种抗血清进行实验,用抗正常人血清作为对照。人血清作为对照。M M蛋白所形成的沉淀线或沉淀弧较宽,蛋白所形成的沉淀线或沉淀弧较宽,呈凸现出的弓形或船形。呈凸现出的弓形或船形。(图(图2)(图)(图3)2022-8-1检验本科

22、30注意:注意:1 1、抗原(血清)浓度过高,沉淀弧带靠近抗、抗原(血清)浓度过高,沉淀弧带靠近抗体槽,影响分析。体槽,影响分析。2 2、M M蛋白的四级结构影响轻链抗原决定簇与抗蛋白的四级结构影响轻链抗原决定簇与抗体结合:在血清中加入体结合:在血清中加入2-2-巯基乙醇(巯基乙醇(10l10lmlml)处理。)处理。3 3、轻链分子量小,扩散快,应每隔、轻链分子量小,扩散快,应每隔1010分钟观分钟观察一次结果。察一次结果。2022-8-1检验本科31三、免疫固定电泳三、免疫固定电泳 是血清区带电泳加免疫沉淀反应的一是血清区带电泳加免疫沉淀反应的一项定性实验。是一种分类鉴定方法。项定性实验。

23、是一种分类鉴定方法。血清行区带电泳后,分别在电泳条上血清行区带电泳后,分别在电泳条上加入不同类型的单克隆抗体,相应的抗原加入不同类型的单克隆抗体,相应的抗原将与抗体在某一区带形成抗原抗体复合物,将与抗体在某一区带形成抗原抗体复合物,经漂洗和染色可清晰地显示出抗原抗体反经漂洗和染色可清晰地显示出抗原抗体反应带。(图应带。(图4)2022-8-1检验本科32四、血清免疫球蛋白定量四、血清免疫球蛋白定量 对免疫球蛋白及轻链作定量分析。对免疫球蛋白及轻链作定量分析。可用单向免疫扩散法(可用单向免疫扩散法(RID)、)、免疫比浊免疫比浊法或法或 ELISA法。法。若某一类型免疫球蛋白明显高出正常值,若某

24、一类型免疫球蛋白明显高出正常值,应考虑血清中有应考虑血清中有M蛋白的存在,应进一步作亚蛋白的存在,应进一步作亚型分析及轻链检测。型分析及轻链检测。2022-8-1检验本科33五、尿中轻链蛋白的检测五、尿中轻链蛋白的检测 即本周蛋白。即本周蛋白。1 1、加热沉淀法:、加热沉淀法:PH5.0PH5.0,40-6040-60时发时发生沉淀,生沉淀,90-10090-100时沉淀溶解。时沉淀溶解。2 2、免疫电泳、免疫电泳 常用方法为直接定量测定,可对常用方法为直接定量测定,可对尿中尿中和和链作定量分析。链作定量分析。2022-8-1检验本科34六、免疫球蛋白增生性疾病的六、免疫球蛋白增生性疾病的 实

25、验检测应用原则实验检测应用原则 当临床上怀疑浆细胞恶性病变时,按下列当临床上怀疑浆细胞恶性病变时,按下列程序进行控制:程序进行控制:1、血清区带电泳分析发现异常球蛋白区带;、血清区带电泳分析发现异常球蛋白区带;2、Ig定量检测或尿本周蛋白定性检测,为初筛定量检测或尿本周蛋白定性检测,为初筛试验;试验;3、对阳性者宜作免疫电泳或免疫固定电泳作分、对阳性者宜作免疫电泳或免疫固定电泳作分类鉴定;类鉴定;2022-8-1检验本科354、进一步作、进一步作Ig的亚型定量测定和血清及尿的亚型定量测定和血清及尿中轻链定量及比值计算等测定作为确证试验;中轻链定量及比值计算等测定作为确证试验;5、良性与恶性区别

26、:良性免疫球蛋白增生、良性与恶性区别:良性免疫球蛋白增生者,其轻链含量者,其轻链含量与重链一同与重链一同,为,为1:1,比,比值无明显异常;恶性增生者轻链与重链比不值无明显异常;恶性增生者轻链与重链比不一致,轻链比值也可发生异常改变;一致,轻链比值也可发生异常改变;6、还要结合骨髓和影像学、病理学检测作、还要结合骨髓和影像学、病理学检测作出正确诊断。出正确诊断。2022-8-1检验本科36掌握:掌握:免疫增殖病的概念及分类;免疫增殖病的概念及分类;免疫球蛋白病常用的检测方法(血清免疫球蛋白病常用的检测方法(血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量测定、免蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量测定、免疫球蛋白的分

27、类鉴定及其他检测方法)。疫球蛋白的分类鉴定及其他检测方法)。熟悉:熟悉:单克隆丙种球蛋白的临床免疫单克隆丙种球蛋白的临床免疫学特征学特征 常见的免疫球蛋白增殖病常见的免疫球蛋白增殖病了解:免疫增殖性疾病的免疫损伤机制了解:免疫增殖性疾病的免疫损伤机制2022-8-1检验本科37正常人正常人白蛋白白蛋白 1 2 IgG型浆细胞骨髓瘤型浆细胞骨髓瘤AB2022-8-1检验本科38CD原发性巨球蛋白血症原发性巨球蛋白血症多克隆丙种球蛋白血症多克隆丙种球蛋白血症2022-8-1检验本科39图图1 血清蛋白区带电泳和扫描图谱示意图血清蛋白区带电泳和扫描图谱示意图E低丙种球蛋白血症低丙种球蛋白血症2022

28、-8-1检验本科40图图2 IgA型骨髓瘤免疫电泳图型骨髓瘤免疫电泳图ABDEFC孔中为血清标本,槽中孔中为血清标本,槽中为抗血清,箭头所指为为抗血清,箭头所指为M蛋白蛋白A、抗正常人血清、抗正常人血清B、抗、抗IgG血清血清C、抗、抗IgA血清血清D、抗、抗IgM血清血清E、抗、抗血清血清F、抗、抗血清血清2022-8-1检验本科41 BCDEF图图3 IgG型骨髓瘤伴型骨髓瘤伴型本周蛋白尿免疫电泳图型本周蛋白尿免疫电泳图上孔中为尿液,下孔中上孔中为尿液,下孔中为血清标本,槽中为抗为血清标本,槽中为抗血清,箭头所指为血清,箭头所指为M蛋白蛋白B、抗、抗IgG血清血清C、抗、抗IgA血清血清D、抗、抗IgM血清血清E、抗、抗血清血清F、抗、抗血清血清2022-8-1检验本科42图图4 IgA型型M蛋白的免疫固定电泳结果图蛋白的免疫固定电泳结果图 IgG IgA IgM

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