1、第1页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainAPIAPI系统系统-构成构成:试条由特別选择的生化反应小管试条由特別选择的生化反应小管 APIAPI试条有多种类试条有多种类 各有相应的数据库各有相应的数据库 所有生化结果以同时间一并阅读所有生化结果以同时间一并阅读第2页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainAPI系统系统 试条由试条由10,20,50.测试组成不等测试组成不等 结果：鉴定百分率结果：鉴定百分率 基本单位：条目（基本单位：条目（Taxa)-种种(Pseudomonas Aeruginosa)-生物型号生
2、物型号(E.Coli 1)-属属(Salmonella Spp.)-一群菌种一群菌种(Aeromonas hydrophilia/cavicie)所引用的分类学跟国际认可的一样所引用的分类学跟国际认可的一样-International Journal of Systematic Bacteriology 资料库整个系统的心脏资料库整个系统的心脏第3页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train优点：优点：-标准化，简易化标准化，简易化-在制造过程中，进行质控在制造过程中，进行质控-FDA标准标准-用家可用用家可用ATCC菌种进行质控菌种进行质控-系统化系统化-
3、操作简易操作简易-快速报告快速报告-20年经验，拥有菌种资料年经验，拥有菌种资料25000，鉴定系，鉴定系统的发源生化测试统的发源生化测试750-1500文献文献第4页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train第5页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌氧化酶氧化酶+非肠道菌鉴定非肠道菌鉴定API 20NE肠道杆菌鉴定肠道杆菌鉴定API 20E氧化酶氧化酶-第6页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌触酶触酶 -触酶触酶+短
4、小脱色含有异染颗粒短小脱色含有异染颗粒slight discoloration(granulations)短球杆菌短球杆菌延长状杆菌延长状杆菌细小不透光菌落细小不透光菌落20-25C 有动力有动力37C 无动力无动力李斯特菌鉴定李斯特菌鉴定API Listeria乳酸菌鉴定乳酸菌鉴定API 50CHL棒状杆菌鉴定棒状杆菌鉴定API Coryne大体积产芽孢杆菌大体积产芽孢杆菌芽孢菌鉴定芽孢菌鉴定API 50CHB第7页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train第8页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train革兰氏阳性球菌革
5、兰氏阳性球菌凝固酶凝固酶葡萄球菌鉴定葡萄球菌鉴定API STAPH触酶触酶-触酶触酶+金黄色萄葡球菌金黄色萄葡球菌溶血溶血链球菌鉴定链球菌鉴定API STREP+-第9页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train-在细菌学里最普遍的染色方法在细菌学里最普遍的染色方法步骤步骤G(G()G(G()-染色前，所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色第10页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train-原原 理理-传统方法传统方法H2O
6、22H2O+O2接接 解解 酶酶玻片法玻片法试管法试管法第11页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train-原原 理理:TMPD氧化氧化 TMPD氧氧 化化 酶酶(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺甲基一对一苯撑二胺)l货号货号:55922l纸片纸片:浸泡饱和浸泡饱和TMPDl储存储存:2-8C于暗处于暗处l有效期有效期:1年年l组成组成:2x30片小瓶装片小瓶装 纸片纸片l货号货号:70460l储存储存:2-30C于暗处于暗处l组成组成:1个小瓶个小瓶 液体试剂液体试剂(深紫色深紫色)(透明透明)第12页，共32页。7/29/2022H:marcoindust
7、ryapi train第13页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train试剂方法试剂方法:-用用2个试管载个试管载1-2ml无菌水无菌水-第一管为阴性对照第一管为阴性对照:加一滴加一滴OX试剂试剂-第二管为测试管第二管为测试管:加可疑菌落然加可疑菌落然后再加二滴后再加二滴OX试剂试剂-比较二支管的颜色比较二支管的颜色:阴性对照阴性对照:透明透明,浅紫色浅紫色 结果结果:OX(-):透明透明,浅紫色浅紫色OX(+):紫色紫色,深紫色深紫色第14页，共32页。生化鉴定生化鉴定容易使用容易使用第15页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryap
8、i trainAPI结果结果原理：原理：-生化结果组合跟资料库內的典型条目生化结果组合跟资料库內的典型条目(Taxa)作出比较作出比较-经计算後，经计算後，鉴定百比率（鉴定百比率（%Id）机会率，指示出不同菌）机会率，指示出不同菌类的比较类的比较 T值（值（T index）=指示出在同一個菌类的相似程度指示出在同一個菌类的相似程度第16页，共32页。生化鉴定生化鉴定可靠及具创意的选择可靠及具创意的选择最典型最典型生化普生化普菌种菌种 XT 值值资料库资料库生化结果生化结果 (菌种菌种 X)(菌種菌種X)第17页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainAPI
9、结果结果跟据跟据T值及值及%Id的组合，作出评语：的组合，作出评语：(i)Excellent Identification%Id 99.9及及T0.75(ii)Very good Identification%Id 99.9及及T0.75(iii)Good Identification%Id 90.9及及T0.25(iv)Acceptable Identification%Id 80.0及及T0(v)Doubtful profile其中一个其中一个生化反应出现严重违反典型生化结生化反应出现严重违反典型生化结果果第18页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trai
10、nAPI 20E/Rapid 20E-肠道杆菌科肠道杆菌科细菌在环境中及动物产品中非常普细菌在环境中及动物产品中非常普遍，其中部份遍，其中部份(沙门氏、耶尔森氏沙门氏、耶尔森氏)是致病菌是致病菌-API 20E是常规鉴定中的标准是常规鉴定中的标准-其他新鉴定系统比较的金标准其他新鉴定系统比较的金标准-方便使用，方便使用，4或或24小时出报告小时出报告第19页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainl 先做氧化酶试验，氧化酶为阴性时接种先做氧化酶试验，氧化酶为阴性时接种API 20E,API 20E,氧化酶为阳性时接种氧化酶为阳性时接种API API 20N
11、E20NE试剂条试剂条l塑料培养盒中加水塑料培养盒中加水5 5 ml,ml,放入试剂条，记录标本资料。放入试剂条，记录标本资料。l 取取1 1个个1mm1mm 大小，大小，1824hr1824hr菌龄的菌落，分散于菌龄的菌落，分散于5ml5ml悬浮液（悬浮液（2015020150）中，使达）中，使达0.5 0.5 Mac Mac Farland Farland 浊度。浊度。l小心沿内壁加菌悬液到微量生化杯中。其中：有小心沿内壁加菌悬液到微量生化杯中。其中：有U U形框标记的项目形框标记的项目(CITCIT、VPVP、GEL)GEL)，将菌液加满；有下划线标记的将菌液加满；有下划线标记的(ADH
12、ADH、LDHLDH、ODCODC、H H2 2S S、UREURE、)，加好菌悬液加好菌悬液后，用无菌液体石蜡封口。后，用无菌液体石蜡封口。l剩余的菌液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。剩余的菌液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。l盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。l孵育盒放入孵育盒放入3737摄氏度温箱培养摄氏度温箱培养2424小时。小时。第20页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train一、若一、若GLU（葡萄糖）为阳性，则记录葡萄
13、糖）为阳性，则记录GLU的结果，在的结果，在TDA、IND、VP孔中孔中加入相应的附加试剂，加入相应的附加试剂，1分钟内读取分钟内读取TDA、IND的结果，的结果，510分钟内读分钟内读取取VP的结果。同时读并记录取其它反应的结果，用生化鉴定结果组的结果。同时读并记录取其它反应的结果，用生化鉴定结果组成一个成一个7位数编码。位数编码。二、若二、若GLU(葡萄糖葡萄糖)为阴性，但有多于为阴性，但有多于2个的反应呈阳性，则按上述方法读取个的反应呈阳性，则按上述方法读取并记录结果。并记录结果。三、若三、若GLU（葡萄糖）为阴性（非发酵菌），且其它呈阳性的反应不多于葡萄糖）为阴性（非发酵菌），且其它呈
14、阳性的反应不多于2个，则不要加试剂，放回温箱中再培养个，则不要加试剂，放回温箱中再培养 24 hr后后按第一条的方法读取结按第一条的方法读取结果。同时用次代培养物接种果。同时用次代培养物接种2个个API OF培养基证实葡萄糖代谢类型；培养基证实葡萄糖代谢类型；接种接种1个个API M培养基观察动力；划线接种培养基观察动力；划线接种MacConkey平板。培养平板。培养24hr后将后将其结果记录到其结果记录到API 20E报告单，与生化鉴定结果一起得到一个报告单，与生化鉴定结果一起得到一个9位数编位数编码。码。第21页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train
15、l ONPG：淡黄色淡黄色黄色为阳性，无色为阴性。黄色为阳性，无色为阴性。l ADH、LDC、ODC、URE以苯酚红为指示剂，橙色以苯酚红为指示剂，橙色红色为阳性红色为阳性，黄色为阴性。，黄色为阴性。l CIT：管口处出现兰色为阳性，黄色管口处出现兰色为阳性，黄色绿色为阴性。绿色为阴性。l H2S：黑色为阳性，无色黑色为阳性，无色浅灰色为阴性。浅灰色为阴性。l TDA、IND、VP加试剂后出现红色为阳性加试剂后出现红色为阳性,不出现红色为阴性。不出现红色为阴性。l GEL：黑色素扩散为阳性，不扩散为阴性。黑色素扩散为阳性，不扩散为阴性。l GLUARA为糖类的酸化反应，指示剂溴百里香酚兰显黄色
16、为阳性，为糖类的酸化反应，指示剂溴百里香酚兰显黄色为阳性，蓝、绿色为阴性。蓝、绿色为阴性。第22页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainl GLU为阴性时，记录其结果，并在为阴性时，记录其结果，并在GLU孔中按先后顺序分别加一滴孔中按先后顺序分别加一滴NIT 1和和NIT 2试剂，出现红色时试剂，出现红色时 NO2 2为阳性，为阳性，N2为阴性；不出现红色为阴性；不出现红色时，加少许时，加少许Zn粉，此时出现红色，则粉，此时出现红色，则NO2 2为阴性，为阴性，N2为阳性。为阳性。l 有动力，有动力，MOB为阳性，无动力则为阴性。为阳性，无动力则为阴性。
17、l 麦康凯平板上生长，麦康凯平板上生长，McC为阳性，不生长为阴性为阳性，不生长为阴性l OF培养管下部变色为发酵型，培养管下部变色为发酵型，OF-F为阳性，下部不变色为阳性，下部不变色OF-F为阴性；为阴性；OF培养管上部变色为发酵型，培养管上部变色为发酵型，OF-O为阳性，上部不变色为阳性，上部不变色OF-O为阴性为阴性第23页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainAPI 20NE-非发酵非发酵G(-)G(-)杆菌存在杆菌存在于空气、水及表面于空气、水及表面-部份细菌（如绿脓假单胞菌）为致病菌部份细菌（如绿脓假单胞菌）为致病菌-试条主要由传统生化反应
18、及同化反应小管试条主要由传统生化反应及同化反应小管 所组所组成成-6464条目条目(Taxa)(Taxa)-非发酵非发酵G(-)G(-)杆菌的标准鉴定方法杆菌的标准鉴定方法第24页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainl 先做氧化酶试验，阳性者接种先做氧化酶试验，阳性者接种API 20NEAPI 20NE。l 塑料培养盒中加水塑料培养盒中加水5 5 ml,ml,放入试剂条，记录标本资料。放入试剂条，记录标本资料。l 取取1824hr1824hr菌龄的菌落，分散于菌龄的菌落，分散于mlml盐水（盐水（20040）中，使达）中，使达0.5 0.5 MacFa
19、rland MacFarland 浊度（浊度（A A液）。液）。l 取取A A液液200 ul(200 ul(滴），加入滴），加入AUXAUX培养液中，小心混匀避免产生培养液中，小心混匀避免产生气泡，制成同化试验接种液（气泡，制成同化试验接种液（B B液）。液）。l 用用A A液按液按API 20EAPI 20E相同的方法接种生化试验杯孔（相同的方法接种生化试验杯孔（NONO3 3PNPGPNPG其中，其中，GLUGLU，ADH,UREADH,URE用液体石蜡封口）用液体石蜡封口）第25页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainl 用用B B液接种同化试验
20、杯孔液接种同化试验杯孔(下面有三条红线者）。使液面与杯口平齐下面有三条红线者）。使液面与杯口平齐B B液黏度很大，特别注意不要使菌悬液堵住杯口，形成大的气泡，影液黏度很大，特别注意不要使菌悬液堵住杯口，形成大的气泡，影响反应结果。响反应结果。l 严格无菌操作，避免空气中的杂菌污染同化试验严格无菌操作，避免空气中的杂菌污染同化试验l 剩余的剩余的A A液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。液可用于涂玻片、染色，接种于非选择性平板做次代培养。l 盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反盖好孵育盒盖，放置几分钟，观察每个微量杯都应呈阴性反应的颜色。应的颜色。l 孵育盒放入孵
21、育盒放入3030摄氏度温箱培养摄氏度温箱培养2424小时。小时。第26页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train同化试验项目接种要求同化试验项目接种要求-接种液面接种液面与杯口平齐，太多或不足会造成错误结果。与杯口平齐，太多或不足会造成错误结果。第27页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train一生化试验：一生化试验：l 不要打开塑料培养盒盖，先读取从不要打开塑料培养盒盖，先读取从GLU到到PNPG的生化试验结果并记录之的生化试验结果并记录之l在在NO3杯孔中按先后次序分别加入一滴杯孔中按先后次序分别加入一滴NIT1和和
22、NIT2试剂，出现红色试剂，出现红色NO3为阳为阳性不出现红色时，加少许性不出现红色时，加少许Zn粉，此时出现红色，则粉，此时出现红色，则NO3 3为阴性，分钟为阴性，分钟内不出现红色，则内不出现红色，则NO3 3阳性阳性l TPR杯孔中加一滴杯孔中加一滴James试剂，立即出现红色为阳性不出现红色为阴性试剂，立即出现红色为阳性不出现红色为阴性二同化试验：二同化试验：l从杯口上方往下看，红线模糊或菌悬液变浑浊，表明有菌生长，为阳性否则从杯口上方往下看，红线模糊或菌悬液变浑浊，表明有菌生长，为阳性否则，为阴性，为阴性l 偶有弱生长者可记录为或偶有弱生长者可记录为或第28页，共32页。7/29/2
23、022H:marcoindustryapi train三在报告单上做出一个位数编码，查编码手册或三在报告单上做出一个位数编码，查编码手册或API LAB软件软件四如果，查不到编码，或给出提示四如果，查不到编码，或给出提示“IDENTIFICATION NOT VALID BEFORE 48-HR INCUBATION”,立即用液体石蜡将立即用液体石蜡将NO3和和TRP封口封口继续培养小时继续培养小时,再读结果而再读结果而NO3 和和TRP要记录培养要记录培养24小时小时的结果的结果第29页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi trainAPI STAPH-凝固酶阴
24、性葡萄球菌于环境污染中常见凝固酶阴性葡萄球菌于环境污染中常见-其中以金黃葡萄球菌为代表其中以金黃葡萄球菌为代表-以以Kloos and Schleifer ClassificationKloos and Schleifer Classification为基础为基础-试条由传统方法及发酵反应小管组成试条由传统方法及发酵反应小管组成-2222个条目个条目(葡萄球菌及微球菌葡萄球菌及微球菌)第30页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train(i)(i)附加试验附加试验第第21-21-溶葡萄球菌素溶葡萄球菌素(lysostaphin(lysostaphin，LSTR
25、)LSTR)用纸片法做用纸片法做目的目的:确认微球菌确认微球菌 经常抗药经常抗药 (+)(+)其他葡萄球菌其他葡萄球菌 LSTR(-)LSTR(-)(ii)(ii)阅读结果阅读结果 (发酵试验发酵试验)PHPH指示剂指示剂:Phenol Red(Phenol Red(酚红酚红)阳性阳性:红变黄红变黄 -阴性对照阴性对照:小杯小杯 O O -阳性对照阳性对照:小杯小杯 GLU(GLU(葡萄球菌均阳性葡萄球菌均阳性)橙色结果橙色结果:-在在2 2个阳性中间个阳性中间:阴性结果阴性结果-在在2 2个阴性中间个阴性中间:阳性结果阳性结果-在小管在小管(红色红色)底部出现黄或橙底部出现黄或橙:阳性结果阳性结果第31页，共32页。7/29/2022H:marcoindustryapi train演讲完毕，谢谢观看！第32页，共32页。
