1、基本技能训练第一节常用仪器的使用方法技能训练分光光度计的使用1.标准色阶的准备1)分别准备六只50mL比色管，洗涤、编号。2)分别向六只比色管中准确移取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL 0.1mol/L的高锰酸钾标准溶液。3)定容。2.测定吸光度1)预热仪器。第一节常用仪器的使用方法2)仪器调零。3)分别测定六只比色管中溶液的吸光度并记录数据。3.绘制标准曲线1)以高锰酸钾含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，构建坐标系。2)根据各个比色管的高锰酸钾含量和测得的对应吸光度描点。3)过原点画一条直线，即为标准曲线。第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定技能训练.eps1)掌握食品中细菌总数
2、与大肠菌群测定的规范操作。2)依据相应的国家标准，独立、规范、熟练地完成全部相关检测项目；能够独立计算试验结果，在相关人员帮助下准确描述试验结果并编写合格的试验报告。仪器和试剂2.eps第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定表2-2-1序号技能训练项目名称国家标准依据1细菌总数的测定GB 4789220102大肠菌群的测定（大肠菌群MPN 计数法）GB 478932010第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定图2-2-1菌落总数的检验程序技能训练1细菌总数的测定1.检验程序2.样品的稀释第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定1)固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水
3、的无菌均质杯内，以800010000r/min转速均质12min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打12min，制成1 10的样品匀液。2)液体样品：用无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1 10的样品匀液。3)用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1 10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注入盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1 100的样品匀液。4)按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。第二节食品中
4、细菌总数与大肠菌群的测定5)根据对样品污染状况的估计，选择2个或3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液置于无菌平面皿内，每个稀释度做两个平面皿。6)及时将1520mL冷却至46的平板计数琼脂培养基(可放置于461恒温水浴箱中保温)倾注平面皿，并转动平面皿使其混合均匀。3.培养4.菌落计数5.结果与报告(1)菌落总数的计算方法第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定1)若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，则计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数，作为每克(毫升)样品中的菌落总数。2)若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜
5、计数范围内，则按式(2-2-1)计算。3)若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4)若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5)若所有稀释度(包括液体样品原液)的平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定6)若所有稀释度的平板菌落数均不在30300CFU之间，且其中一部分小于30CFU或大于300CFU，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。(2)菌落总数的报告1)当菌落数小
6、于100CFU时，按“四舍五入”的原则修约，以整数报告。2)当菌落数大于或等于100CFU时，第3 位数字采用“四舍五入”的原则修约后，取前两位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”的原则修约后，采用两位有效数字。3)若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。4)若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5)称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定图2-2-2大肠菌群MPN计数法检验程序1.检验程序2.样品的稀释第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定1)固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛
7、有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，以800010000r/min的转速均质12min；或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打12min，制成1 10的样品匀液。2)液体样品：用无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1 10的样品匀液。3)用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1 10 样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入盛有9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1 支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1 100 的样品匀液。第二节食品中细菌总数与大肠菌群的测定4)根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。3.初发酵试验4.复发酵试验5.大肠菌群最可能数(MPN)的报告
