1、苦楝皮化学成分及生物活性研究目录致谢药动学实验研究细胞毒实验研究化学成分研究研究进展及立项依据苦楝皮简介苦楝皮简介苦楝皮为楝科楝属植物苦楝苦楝皮为楝科楝属植物苦楝（MeliaMelia azedarachazedarach L.L.）的干）的干燥根皮及树皮，味苦，性寒，燥根皮及树皮，味苦，性寒，有毒有毒，具有杀虫、疗癣等功效，具有杀虫、疗癣等功效，常用于游风热毒、风疹恶疮等常用于游风热毒、风疹恶疮等症。苦楝在我国大部分地区均症。苦楝在我国大部分地区均有分布。有分布。苦楝皮的研究进展及立项依据苦楝皮的研究进展及立项依据研研究究进进展展苦楝皮化学成分三萜（柠檬苦素类）三萜（柠檬苦素类）酚性化合物酚
2、性化合物生物碱类生物碱类 甾醇类甾醇类苦楝皮药理作用杀虫杀虫抑菌抑菌抗肿瘤抗肿瘤抗病毒抗病毒镇痛抗炎镇痛抗炎 立立项项依依据据 近年来，国内外学者对苦楝的药理活性做了大量近年来，国内外学者对苦楝的药理活性做了大量的研究工作，而对其化学成分的研究并不完善，因的研究工作，而对其化学成分的研究并不完善，因此有必要对苦楝皮的化学成分进行系统的研究，为此有必要对苦楝皮的化学成分进行系统的研究，为进一步开发和利用提供帮助。进一步开发和利用提供帮助。苦楝皮中主要的活性成分为三萜类，尤以柠檬苦苦楝皮中主要的活性成分为三萜类，尤以柠檬苦素类化合物生物活性最高。因此系统分离此类化合素类化合物生物活性最高。因此系统
3、分离此类化合物并且初步研究此类化合物的药理活性及其药代动物并且初步研究此类化合物的药理活性及其药代动力学规律。力学规律。目录结论药动学实验研究细胞毒实验研究化学成分研究研究进展及立项依据苦楝皮化学成分研究苦楝皮化学成分研究u提取分离提取分离流程图化合物结构一览u化合物结构解析化合物XII结构解析化合物II结构解析提取分离流程图提取分离流程图Dried bark of Melia azedarach L.（40 kg）95%EtOH（2 h3）Whole ExtractSuspended in H2O,extracted fractionallyExtracted with petroleum
4、ether Extracted with CHCl3 Extracted with EtOAc Extracted with n-BuOHPetroleum ext.EtOAc ext.n-BuOH ext.CHCl3 ext.XIII XIV XV XVI 实验中应用硅胶柱层析、实验中应用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱柱层析，层析，ODS柱层析，制备薄层和重结晶等技术，柱层析，制备薄层和重结晶等技术，从苦楝皮中分离出从苦楝皮中分离出16个化合物。个化合物。根据化合物的理化性质，运用根据化合物的理化性质，运用IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱方法，并参考文献报等
5、波谱方法，并参考文献报道的谱学数据，鉴定出道的谱学数据，鉴定出16个化合物的结构，其中个化合物的结构，其中1个化合物（紫色标记）为属内首次分离，个化合物（紫色标记）为属内首次分离，4 4个化合个化合物物(蓝色标记蓝色标记)首次从该植物中分离得到。首次从该植物中分离得到。小结小结苦楝皮化学成分研究苦楝皮化学成分研究u提取分离提取分离流程图化合物结构一览u化合物结构解析化合物XII结构解析化合物VII结构解析 CH3(CH2)28COOH melissic acid fraxinellone kulactone methyl kulonate-sitosterol isosclerone dubi
6、one B kulinone azedarachol isotoosendanin succinic 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde CH3(CH2)26CH2OH argyroside daucosterol kulonic acid 1-octacosanol 苦楝皮化学成分研究苦楝皮化学成分研究u提取分离提取分离流程图化合物结构一览u化合物结构解析化合物IV结构解析化合物II结构解析l白色粉末（石油醚-丙酮）lmp:104106lESI-MS(m/z)：485M+H+，507M+Na+（正离子检测）；483M-H-（负离子检测），分子量484。化合物I结构
7、解析5.30(1 H,dd,J=3.21 Hz,6.36 Hz)5.05(1 H,m),3.97(1 H,dd,J=5.87 Hz,J=7.88 Hz)2.75(1 H)2.59(1 H)放大 0.82(3 H,s)1.00(3 H,s)1.03(3 H,s)1.11(3 H,s)1.26(3 H,s)1.57(3 H,s)1.67(3 H,s)1H-NMR谱1 3 7 16 17 20 24 25 2.75(1 H,td,J=5.53 Hz,14.55 Hz,14.54 Hz)2.59(1 H,td,J=3.99 Hz,10.42 Hz,10.45 Hz)1H-NMR谱 144.7,132.
8、4,123.4,118.5 177.6 216.5 13C-NMR谱8个个CH2基团基团 7个个CH基团基团 DEPT谱 51.6 3.70(s)177.6 COOCH3 HSQC谱methyl kulonate 分子式：C31H48O4 l白色针状结晶（石油醚-丙酮）lmp:107110lESI-MS(m/z)：4872M+Na+，233M+H+（正离子检测）；231M-H-（负离子检测），分子量232。化合物II结构解析7.47(s)7.44(s)6.35(d,J=0.7Hz)2.13(s)0.86(s)两个甲基4.88(s)连氧的基团 放大 1H-NMR谱8 9 11 12 20 21
9、22 23 14 15 1.45(1H,td,J=2.9Hz,11.9Hz)2.28(1H,dd,J=19.8Hz,6.6Hz)1.731.89(m)1H-NMR谱143.4,139.8,120.6,108.6 148.6,127.4169.913C-NMR谱fraxinellone分子式：C14H16O3 目录结论药动学实验研究细胞毒实验研究化学成分研究研究进展及立项依据六种样品对体外肿瘤传代细胞株六种样品对体外肿瘤传代细胞株细胞毒作用的试验观察细胞毒作用的试验观察 观察六种样品对体外肿瘤传代细胞株BEL7402（人肝癌）、H460（人肺癌）、SGC-7901（人胃癌）3种细胞的细胞毒作用。
10、组 别不同浓度样品（g/ml）对细胞抑制率（%）IC50(g/ml）1001010.10.01苦楝皮萜酮57.153.244.921.716.18.57苦楝萜酸 甲酯45.744.144.16.7-2.822.41苦楝萜酮 内酯45.941.040.49.74.041.19 南岭楝酮B46.746.146.020.714.022.58苦楝酸51.349.949.518.413.410.32异川楝素52.151.141.124.324.08.57CDDP73.772.871.964.941.00.037DMSO（0.8%）0-表1 6种样品体外对BEL7402（人肝癌）的细胞毒作用(n=3)组
11、别不同浓度样品（g/ml）对细胞抑制率（%）IC50(g/ml)1001010.10.01苦楝皮萜酮58.345.945.737.25.46.29苦楝萜酸甲酯51.241.938.433.710.727.98苦楝萜酮内酯47.147.040.037.913.319.12南岭楝酮B36.133.532.226.63.6-苦楝酸61.039.136.418.511.721.4异川楝素 59.952.548.337.9-8.44.1CDDP74.868.864.553.853.80.01DMSO(0.8%)0-表2 6种样品体外对H460（人肺癌）的细胞毒作用(n=3)组 别不同浓度样品（g/ml）
12、对细胞抑制率（%）IC50(g/ml)1001010.10.01苦楝皮萜酮62.140.139.137.737.26.08苦楝萜酸甲酯46.441.940.132.87.429.8苦楝萜酮内酯36.530.829.220.711.5-南岭楝酮B40.835.829.927.227.1-苦楝酸50.639.819.09.89.6-异川楝素59.357.038.925.94.39.25CDDP80.666.965.157.721.60.28DMSO（0.8%）0-表3 6种样品体外对SGC-7901（人胃癌）的细胞毒作用(n=3)通过得到的抑制率及IC50，可以看出6种样品中，苦楝皮萜酮和异川楝素
13、分别对人胃癌SGC7901、人肺癌H460和人肝癌BEL7402细胞株均有一定细胞毒作用。苦楝萜酸甲酯、苦楝萜酮内酯、南岭楝酮B、和苦楝酸对3种细胞有抑制生长作用。结论 目录结论药动学实验研究细胞毒实验研究化学成分研究研究进展及立项依据 中药药物代谢动力学研究对阐明和揭示中药药效物质基础和作用机制，设计及优选中药给药方案，促进中药新药研发、剂型改进及质量控制，均具有重要意义。基于液相色谱质谱联用法（LC/MS/MS）的特点和实际应用的需要，拟进行以下实验研究：分别建立测定大鼠血浆中的苦楝萜酸甲酯和异川楝素的的快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法，对两种化合物在大鼠体内的药代动力学进行了初步研究。健
14、康健康SD-雄性大雄性大鼠，鼠，6只只 禁食禁食12 h12 h自由饮水自由饮水灌胃给药灌胃给药 眼球后隐静脉丛取血眼球后隐静脉丛取血LC/MSn测定血药浓度测定血药浓度离心，离心，分离血浆分离血浆不同时间点采血不同时间点采血方法学确证 专属性 标准曲线和线性范围 方法精密度与准确度 提取回收率 样品稳定性注：以上LLOQ均表示浓度低于定量下限单剂量灌胃给药苦楝萜酸甲酯(100 mgkg-1)和异川楝素(200 mgkg-1)后，大鼠血浆平均血药浓度.大鼠灌胃给药苦楝萜酸甲酯平均血浆浓度-时间曲线及参数大鼠灌胃给药异川楝素平均血浆浓度-时间曲线及参数利用液相色谱串联质谱技术，分别建立了专属、灵敏、快速的定量分析方法，用于大鼠血浆中苦楝萜酸甲酯、异川楝素的测定，并成功地应用于药物动力学研究。为苦楝皮的开发及利用提供更好的理论基础。小结小结
