1、天然药物化学实验须知（一）实验要求（二）实验室规则（三）实验室安全注意事项（四）实验报告格式实验一 药用植物化学成分的提取一 实验目的 1 了解天然药物成分的分析方法2 掌握预实验的实验技术二 实验原理：1 单项预试法：寻找特定成分。2 系统预试法：在未知情况下对可能含有的各类成分进行全面检查。三 实验步骤：1 制备样品试液（1）石油醚提取液 挥发油、油脂、甾醇三萜（2）乙醇提取液 黄酮内酯、生物碱、酚类香 醇、萜类内酯、强心苷、鞣质、有机酸（3）水提取液 氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、皂苷有机酸2 选择合适的展开系统3 薄层层析 取长春花粉末20g,加70%乙醇150ml加热回流0.5h,抽滤
2、，滤液减压浓缩至浸膏。展开系统：氯仿：甲醇=10：1实验 二 薄层层析及中药成分预实验一 实验目的：1 了解薄层层析的原理及应用。2 掌握薄层层析的实验技术。二 实验原理薄层色谱即TLC，属固液吸附色谱，利用吸附剂（硅胶）对不同组分吸附能力的差异，从而达到分离目的的方法。三 TLC的应用1 可用于判断两个化合物是否相同。2 可用于确定混合物中含有的组分数。3 可用于为柱色谱选择合适的展开剂。4 可跟踪有机反应。4 实验步骤1 点样：画出起点线，即距离薄层板一端约1cm处。2 展开：浸入深度0.5cm,待展开剂前沿离顶端1cm处，取出用铅笔画出展开剂前沿。展开剂：氯仿：石油醚=5：1 显色：（1
3、）紫外灯；（2）碘缸；（3）5%硫酸乙醇溶液4 计算比移值 Rf=原点距斑点中心距离/原点距展开剂前沿距离思考题：1、在混合物的薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？2、展开剂的的高度若超过了点样线对实验结果有何影响？3、对一个未知混合物如何选择展开剂？实验三 硅胶柱层析一 实验目的 1、了解硅胶柱层析的原理。2、掌握硅胶柱层析的技术。二 实验原理 硅胶柱层析属吸附色谱，是利用吸附剂硅胶对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂洗脱，以使组分分离。三 实验步骤1 装柱 湿法：量取一定量体积的洗脱剂（V0），倒入色谱柱中，然后，将硅胶放置于烧杯中，加入一定量的洗脱剂搅拌至无气泡，加入柱内，并将活塞打
4、开，一边沉降一边加，直到加完硅胶，仍使洗脱剂流滴一段时间，使色谱柱中高于硅胶的溶剂几乎全部留入接收瓶中，正确计量接收器中的溶剂量（V1），计算色谱柱的保留体积（V0-V1）2 上样 干法：称取一定量硅胶（色谱柱中硅胶量的10%），置于蒸发皿中，用滴管慢慢加入样品溶液，用滴管慢慢加入样品溶液，边加边搅拌，待硅胶已完全被样品溶液湿润时，在水浴锅上蒸除溶剂，蒸除溶剂后的吸附有样品的硅胶在1000C加热除去水分，3 洗脱 样品加完后打开活塞放出液体至柱面相同时，加入洗脱剂至液面高出柱面约10cm,在柱面上加入一个小滤纸片，再加2cm厚的硅胶，再加一团脱脂棉。洗脱剂：石油醚：乙酸乙脂：=3：1 洗脱收集
5、：每份洗脱液按30ml收集 显色合并：槐米粗粉（槐米粗粉（40g）置置1000ml烧杯中，加水烧杯中，加水600ml，搅拌，搅拌下加入石灰乳，调下加入石灰乳，调pH89，加热至微，加热至微沸，保持沸，保持30分钟，趁热抽滤。分钟，趁热抽滤。残渣残渣滤液滤液在在6070下用浓盐酸调下用浓盐酸调pH45，静置，静置1小时，抽滤小时，抽滤沉淀（粗品芦丁）沉淀（粗品芦丁）滤液滤液粗品芦丁粗品芦丁将沉淀悬浮于蒸馏水中，加将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸热煮沸15min，趁热，趁热 抽滤抽滤残渣残渣滤液滤液在在6070下用浓盐酸调下用浓盐酸调pH45，静置，静置1小时，抽滤小时，抽滤芦丁精品芦丁精品2、芦丁
6、的鉴定、芦丁的鉴定 1、大黄中总蒽醌成分的提取分离、大黄中总蒽醌成分的提取分离大黄粗粉大黄粗粉100g置置1000ml 圆底烧瓶中，加入圆底烧瓶中，加入95%乙醇乙醇250ml，回流提取回流提取2hr，趁热抽滤，趁热抽滤醇液醇液药渣药渣加入加入95%乙醇乙醇200ml，回流提取，回流提取1.5hr，趁热抽滤趁热抽滤醇液醇液药渣药渣乙醇提取液乙醇提取液静置冷却，抽滤静置冷却，抽滤滤液滤液 减压回收乙醇至糖浆状，将浓减压回收乙醇至糖浆状，将浓缩物转移至缩物转移至250ml三角瓶中三角瓶中 乙醇总提物乙醇总提物放冷，加入乙醚放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇冷浸，振摇20将将乙醚液倾入乙醚液倾入500
7、ml三角瓶中三角瓶中 乙醚层乙醚层浸膏浸膏40ml乙醚乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次丙酮冷浸三次（每次15）乙醚层乙醚层浸膏浸膏乙醚总提液乙醚总提液2、游离蒽醌的分离、游离蒽醌的分离乙醚总提液乙醚总提液5%NaHCO3水溶液萃取水溶液萃取3次，每次次，每次40、30、30ml，至水层颜色变浅，至水层颜色变浅 乙醚层乙醚层碱水层碱水层5%Na2CO3水溶水溶液萃取液萃取3次，每次，每次次40、35、35ml碱水层碱水层乙醚层乙醚层2%NaOH水溶液萃取水溶液萃取3次，次，每次每次30ml，乙醚层乙醚层碱水层碱水层滴加滴加HCl酸化，静置沉淀，抽酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，干燥滤，水洗至中
8、性，干燥 沉淀沉淀I，大黄酸，大黄酸 酸化，抽滤酸化，抽滤水洗，干燥水洗，干燥 沉淀沉淀大黄素大黄素 酸化，抽滤酸化，抽滤水洗，干燥水洗，干燥 沉淀沉淀大黄素甲醚、大黄酚大黄素甲醚、大黄酚 3、蒽醌类化合物的检识、蒽醌类化合物的检识（1）薄层鉴别）薄层鉴别 吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶 展开剂：石油醚展开剂：石油醚-正己烷正己烷-苯苯-甲酸乙酯甲酸乙酯-甲醇甲醇-水水 （25：75：5：35：6：25）显显 色：紫外灯下观察，斑点为黄色色：紫外灯下观察，斑点为黄色（2）呈色反应）呈色反应 滴加滴加2%NaOH水溶液，观察颜色变化水溶液，观察颜色变化 滴加滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化
