1、项目三水体中细菌指标的检测项目三水体中细菌指标的检测任务一任务一 样品的采集和样品的采集和保存保存生物监测生物监测样品的采集样品的采集样品的保存样品的保存一、水样的采集一、水样的采集 1.采水容器采水容器 采样瓶：具磨口玻塞的采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶广口瓶 采样瓶的洗涤采样瓶的洗涤 采样瓶的灭菌采样瓶的灭菌:160170干热灭菌干热灭菌2h，或用高压蒸汽，或用高压蒸汽灭菌器，灭菌器，121灭菌灭菌15min2.采样步骤及注意事项采样步骤及注意事项(1)去氯和高浓度重金属：去氯和高浓度重金属：去重金属：去重金属：500mL采样瓶加入采样瓶加入1mL15%EDTA-Na2溶液溶液去氯：
2、去氯：500mL采样瓶加入采样瓶加入0.3mL10%Na2S2O3溶液溶液;一、水样的采集一、水样的采集(2)采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面1015cm处采集处采集（3）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器（4）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最大，放水）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最大，放水35min，用酒精灯火焰灼烧约，用酒精灯火焰灼烧约3min
3、灭菌，再放水灭菌，再放水1min,1min,然后采样然后采样（5）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品先采集细菌学检验样品（6）采样完毕，做好记录）采样完毕，做好记录 二、样品保存二、样品保存 采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学检验。一般从取样到检验不宜超过检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应，否则应保存在保存在10以下，但不得超过以下，但不得超过6h 项
4、目三水体中细菌指标的检测项目三水体中细菌指标的检测任务二任务二 细菌总数细菌总数测定测定生物监测生物监测细菌总数测定的意义测定方法及步骤测定方法及步骤 （地表水）（地表水）菌落计数计算和报告任务二 细菌总数的测定 细菌总数：指细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于水样在营养琼脂培养基中，于37培养培养48h后，所生长细菌菌落的总数后，所生长细菌菌落的总数。一、细菌总数测定的意义一、细菌总数测定的意义 可以作为水体有机污染程度的指标可以作为水体有机污染程度的指标 生活饮用水的细菌总数生活饮用水的细菌总数lmL不得超过不得超过100个个污染程度污染程度重污染河段重污染河段中污染河段中污染河段
5、轻污染河段轻污染河段未污染河段未污染河段细菌总数细菌总数10万个万个/ml以上以上10万个万个/ml以下以下1万个万个/ml以下以下100个个/ml以下以下室内空气质量标准室内空气质量标准2500caf/m3 （撞击法）（撞击法）任务二 细菌总数的测定二、测定方法及步骤二、测定方法及步骤（地表水）（地表水）1.稀释水样稀释水样2.接种水样接种水样3.培养：培养：37下倒置培养下倒置培养24h24h测定方法：平皿计数法测定方法：平皿计数法任务一 细菌总数的测定水样1mL1mL1mLckck10-110-110-210-210-310-31mL1mL1mL1mL1mL1mL三、菌落计数三、菌落计数
6、 3748h9mL无菌水无菌水103102101任务二 细菌总数的测定四、计算和报告计数结果四、计算和报告计数结果 10-110-210-3细菌总数（个/mL)156215213246822640261321856150308无法计数354731928104无法计数30312任务二 细菌总数的测定例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数/CFUmL-1报告方式/CFUmL-110-110-210-31234561 3652 7602 890无法计算27无法计算1642952711 650113052046605135121.62.216 40037 75027 100513 00
7、027030 50016 000或1.610438 000或3.810427 000或2.7104510 000或5.1105270或2.710231 000或3.1104四、计算和报告计数结果四、计算和报告计数结果 如何测定自来水或饮用水中的细菌总数？如何测定自来水或饮用水中的细菌总数？项目三水体中细菌指标的检测项目三水体中细菌指标的检测任务三任务三 总大肠菌群的总大肠菌群的测定测定生物监测生物监测测定的意义总大肠菌群的特征总大肠菌群的特征测定方法计算和报告任务三 水中总大肠菌群的测定总大肠菌群总大肠菌群:指一群在指一群在37 培养培养24h能发酵乳能发酵乳糖、产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰
8、氏阴性糖、产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。的无芽孢杆菌。主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。总大肠菌群数：每升水样中所含有的大肠菌群数。总大肠菌群数：每升水样中所含有的大肠菌群数。【补充环境标准补充环境标准】生活饮用水生活饮用水:总大肠菌群数每总大肠菌群数每100mL不得检出不得检出水源水：水源水：只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，总大肠菌群只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，总大肠菌群平均每升不超过平均每升不超过 1000个个 经过净化处理及加氯消毒后供作生
9、活饮用的水源水，总大经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用的水源水，总大肠菌群平均每升不得超过肠菌群平均每升不得超过10000个个 地下水质量标准地下水质量标准：、类类3个个/L；100个个/L；100个个/L 任务三 水中总大肠菌群的测定一、测定意义一、测定意义 作为水体受粪便污染的指标。作为水体受粪便污染的指标。二、总大肠菌群的特征二、总大肠菌群的特征 v在在37 下培养下培养24h可使乳糖发酵，并产酸产气可使乳糖发酵，并产酸产气 v是革兰氏阴性无芽孢杆菌是革兰氏阴性无芽孢杆菌 v在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落 任务三 水中总大肠菌群的测定三
10、、测定方法三、测定方法（一）多管发酵法（一）多管发酵法(1)生活饮用水生活饮用水 初发酵试验初发酵试验 平板分离平板分离 复发酵试验复发酵试验 阳性管接种在伊红美兰培养阳性管接种在伊红美兰培养基上，基上，37培养培养1824h，挑选典型特征的菌落，涂片、挑选典型特征的菌落，涂片、革兰氏染色、镜检革兰氏染色、镜检 原水样原水样各10mL3724hG-G+3718-24h3724h各各10mL双料乳糖蛋白胨培养液双料乳糖蛋白胨培养液根据阳性管的数目查表求出根据阳性管的数目查表求出大肠菌群数大肠菌群数5个10mL管中阳性管数最可能数（MPN）02.212.225.139.2416.0516用用5个个
11、10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN）任务三 水中总大肠菌群的测定(2)水源水：将水样作水源水：将水样作1：10稀释稀释 3724h乳糖蛋白胨各乳糖蛋白胨各10mL双料乳糖蛋白胨各双料乳糖蛋白胨各10mL水样1mL各1mL各1mL各10mL10-13724h9mL无菌水无菌水任务三 水中总大肠菌群的测定(3)地表水和废水：水样应作地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释或更高的稀释 MPN值值=MPN指数指数 mlml接种量最大的一管）（10任务三 水中总大肠菌群的测定（二）四管发酵法（以轻度污染者为例）
12、（二）四管发酵法（以轻度污染者为例）初发酵试验初发酵试验 平板分离平板分离 复发酵试验复发酵试验 革兰氏染色革兰氏染色+_+10mL水样水样25mL225mL无菌无菌水水1mL1mL1mL10-11mL10-23724h3718-24h+G-G-G+3724h查表查表任务三 水中总大肠菌群的测定（三）滤膜法（三）滤膜法 滤膜是一种微孔薄膜（孔径滤膜是一种微孔薄膜（孔径0.45m）过滤水样过滤水样 滤膜及滤器的灭菌滤膜及滤器的灭菌 过滤装置安装过滤装置安装 水样量的选择水样量的选择 过滤水样过滤水样 任务三 水中总大肠菌群的测定培养培养 结果观察和报告结果观察和报告 挑选典型特征的菌落进行革兰氏
13、染色、镜检；挑选典型特征的菌落进行革兰氏染色、镜检；染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌再接种于乳糖蛋白胨培染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌再接种于乳糖蛋白胨培养液中，经养液中，经37培养培养24h，产酸产气者则判为总大肠菌，产酸产气者则判为总大肠菌群阳性群阳性 3724h任务三 水中总大肠菌群的测定水中总大肠菌群的测定计数滤膜上生长的大肠菌群菌落总数，根据过计数滤膜上生长的大肠菌群菌落总数，根据过滤的水样量计算滤的水样量计算1L水样中总大肠菌群数水样中总大肠菌群数。总大肠菌群数总大肠菌群数(个个/L)=mL过滤水样菌落数滤膜上生长的大肠杆菌1000滤膜上菌落数以滤膜上菌落数以2060个个/片较为适宜片较为适
14、宜 项目三水体中细菌指标的检测项目三水体中细菌指标的检测任务四任务四 粪大肠菌群的粪大肠菌群的测定测定生物监测生物监测测定的意义测定方法任务四 水中粪大肠菌群的测定水中粪大肠菌群的测定粪大肠菌群:在44.5温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群。一、一、测定意义测定意义 更准确地反映出水质受粪便污染的情况更准确地反映出水质受粪便污染的情况 地表水环境质量标准：地表水环境质量标准：序号类类类类类粪大肠菌群（个/L）2002000100002000040000污染物排放标准：污染物排放标准：污水类型污水类型一级标准一级标准二级标准二级标准三级标准三级标准医院、兽院及医疗机构含病医院、兽院及医疗机
15、构含病原体污水原体污水50010005000传染病、结核病医院污水传染病、结核病医院污水1005001000二、测定方法（多管发酵法二、测定方法（多管发酵法）任务四 水中粪大肠菌群的测定水中粪大肠菌群的测定1.1.初发酵试验初发酵试验 水样水样1mLEC培养液培养液各1mL各1mL各10mL10-13724h44.5 24h-+2.复发酵复发酵+-倒管有气泡为阳性倒管有气泡为阳性任务四 水中粪大肠菌群的测定水中粪大肠菌群的测定根据发酵阳性管的数目查MPN表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值 项目三水体中细菌指标的检测项目三水体中细菌指标的检测任务五任务五 总大肠菌群、
16、粪大肠菌总大肠菌群、粪大肠菌群的快速群的快速测定测定生物监测生物监测测定的意义测定方法任务五任务五 水中总大肠菌群、粪大肠菌群的快速测定水中总大肠菌群、粪大肠菌群的快速测定本方法适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液，以及其他行业(如餐饮业、食品加工等)排入地表水中的污水，快速测定总大肠菌群或粪大肠菌群。一、方法原理一、方法原理应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC(红四碳唑红四碳唑)还原成不可
17、逆还原成不可逆的甲臢的甲臢(Formazane)产生红色色素，即大肠菌在纸片培产生红色色素，即大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落，菌落周围产生黄圈是大肠菌分解乳养基上呈红色菌落，菌落周围产生黄圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。糖产酸使指示剂变色的结果。二、方法和步骤二、方法和步骤用采水器或其他灭菌器采集水样用采水器或其他灭菌器采集水样500mL放入灭菌瓶内，放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的废水，需加如果是经加氯处理的废水，需加15%硫代硫酸钠硫代硫酸钠5mL除除去余氯。去余氯。二、水样采集二、水样采集任务五任务五 水中总大肠菌群、粪大肠菌群的水中总大肠菌群、粪大肠菌群的快速测定快速测定 水样水样1mL10-1各各10mL各各1mL各各1mL55.5mL总大肠菌群总大肠菌群37下培养下培养18-24h粪大肠菌群粪大肠菌群44.5下培养下培养18-24h任务五任务五 水中总大肠菌群、粪大肠菌群的水中总大肠菌群、粪大肠菌群的快速测定快速测定阳性阳性任务五任务五 水中总大肠菌群、粪大肠菌群的水中总大肠菌群、粪大肠菌群的快速测定快速测定根据发酵阳性管的数目查根据发酵阳性管的数目查MPN表，按总大肠表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水样中总大肠菌群数菌群的计算方法计算每升水样中总大肠菌群数和粪大肠菌群数。和粪大肠菌群数。感谢观看！
