1、1光镊测量光镊测量CENP-T/WCENP-T/W之间的相互作用力之间的相互作用力Optical Tweezers2Scattering forceGradient forcemanipulation and detection of sub-nanometer displacementsOur Setup3Calibration4Calibration5Feedback Control6等效半径法：信息熵法：Cenp-T and Cenp-W7动点是细胞有丝分裂分子机器的主要结构。过去研究发现CENP-T/W/S/X复合体可以形成新形式的核小体结构，成为动点的内层结构基础，其中CENP-T可
2、以伸展到内层动点外侧，形成外层动点和内层动点连接的基础。2014年DevelopCell文章指出CENP-T可以参与有丝分裂过程中的张力调控。在此基础上我们推测AuroraB激酶可以调节CENP-T/W之间的相互作用强弱，帮助蛋白复合体抵抗有丝分裂过程中微管产生的张力，并对有丝分裂过程中染色体错误配对的修复起到重要作用。Test Implementation8Coupling Method 为了实现这种方案，我们要先设计偶联方式将DNA与蛋白、微球连接在一起。首先我们PCR制备了一端连有biotin，一端连有巯基的DNA分子。让DNA上的巯基与交联剂BM(PEG)2反应，反应方式如下：BM(P
3、EG)2一端的马来西亚胺与DNA相连接，另一端与谷胱甘肽上的巯基反应，这样便可以在DNA的一端修饰上一个谷胱甘肽。DNA的另一端带有biotin，会与带有streptavidin的微球产生特异性偶联。然后使用这种微球到细胞裂解液中去捞取CENP-T/W，然后进行实验。Stretching Results10 A预拉伸的拉伸曲线 B拉伸曲线的蠕虫链拟合 C有力平台的拉伸曲线Stretching Results11 能拟合上且有平台能拟合上且有平台能拟合上但直能拟合上但直接断开接断开不能拟合上直不能拟合上直接断开（低力）接断开（低力）不能拟合上直不能拟合上直接断开（高力）接断开（高力）拟合后发现为
4、拟合后发现为多分子行为多分子行为数量数量42674断裂力断裂力41.1228.313.540.9340.68平台长度平台长度289-Further Discussion12因为CENP-T/W和组蛋白具有同源性，同时有文献表明组装在DNA上的核小体可以被20-40pN的外力所拉断（Bennink,Martin L.,et al.“Unfolding individual nucleosomes by stretching single chromatin fibers with optical tweezers.”Nature Structural&Molecular Biology 8.7(2001):606.），所以我们推测表格中低力断裂情形是蛋白与DNA发生了相互作用。因为蛋白在DNA上结合的实际位置不定，所以实际的DNA长度也不确定，因此曲线无法用理论拟合。这种情况的曲线一共有6 条，平均断裂力13.5 pN，占50%。我们还要补充一些实验数据，提供更充分的数据；二来就是要对比磷酸化过后、非磷酸化的蛋白之间相互作用强度的变化，从而得到磷酸化对于有丝分裂的调控作用。
