1、原位杂交产品知识介绍原位杂交产品知识介绍原位杂交 vs 免疫组化n原位杂交：核酸水平，碱基互补配对n免疫组化：蛋白水平，抗原抗体反应n杂交更具特异性原位杂交的应用原位杂交的应用n没有好的抗体没有好的抗体n核酸量远多于蛋白核酸量远多于蛋白n蛋白为分泌型蛋白为分泌型n抗体背景高度着色抗体背景高度着色探 针 主 要 类 型n双链DNA探针：如HPVn单链DNA探针：如EBERn寡核苷酸探针nRNA探针EBER原位杂交原理nEBER：EBV编码的小RNA，胞核内nEBER表达量很高，各期均可表达，最适用于临床诊断EBV感染n原理：单链DNA探针与小RNA杂交n定位：细胞核EBER的临床应用价值（一）n
2、诊断EBV感染性疾病，如：传染性单核细胞增多症、慢性活动性EBV感染 n协助诊断特殊部位肿瘤，如：鼻型NK/T细胞淋巴瘤，鼻咽癌n协助诊断免疫缺陷状态下的淋巴组织增生，如：器官移植后淋巴增生性疾患 n协助识别EBV阳性细胞，如：RS细胞协助临床诊断：EBER的临床应用价值（二）nEBV感染性疾病：抗病毒治疗，预后好n器官移植后淋巴增生性疾患：早期预后较好nEBV(+)的非霍奇金淋巴瘤比EBV(-)的预后差nEBV(+)的霍奇金淋巴瘤比EBV(-)的预后好或无显著差异n鼻型NK/T细胞淋巴瘤：预后很差协助了解预后和指导治疗：EBER原位杂交的主要过程n酶消化n变性：55Cn杂交：37Cn杂交：单
3、链DNA探针与RNA病毒互补配对n显色：细胞核着色图图1 传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症图图2 经典霍奇金淋巴瘤经典霍奇金淋巴瘤,RS细胞细胞（摘自周小鸽教授资料）（摘自周小鸽教授资料）目录 n背景知识n临床应用价值n原位杂交原理n市场定位和优势HPV产品的：一般介绍nHPV（Human Papilloma Virus，人乳头瘤病毒）：双链DNA病毒，110种以上nHPV可感染多种器官和组织nHPV主要分为皮肤型和生殖道粘膜型n男女生殖系统均可感染HPVn宫颈HPV感染最为常见，举例介绍 HPV与宫颈癌的关系与宫颈癌的关系（一）（一）nHPV主要分为高危、低危型n高危型高危型：16,
4、18,31,33,35,45,51,52,56,58,59,68,73,W123B，与宫颈癌关系密切n低危型：6,11等nHPV平均感染期为8个月，大多数感染可以自然消退。nHPV16,18最易感染，且感染期最长。HPV与宫颈癌的关系与宫颈癌的关系（二）（二）n宫颈癌的发生率在女性恶性肿瘤中排第第二二位，仅次于乳腺癌。n99.7%的宫颈癌患者体内存在HPV。n好发部位：宫颈鳞状上皮和柱状上皮的交界处。宫颈癌演变过程宫颈癌演变过程n尖锐湿疣，CIN I CIN II CIN III（重度非典型增生+CIS）早期浸润癌 浸润癌 n概念：nCIN：宫颈上皮内瘤，包括非典型增生和原位癌；病变 局限于上
5、皮细胞层内，未突破全层n CIN I：轻度非典型增生（病变不到上皮1/3）n CIN II：中度非典型增生（病变达到1/3，不到2/3）n CIN III：重度非典型增生（病变达到2/3，但未及全层）及原位癌nCIS：原位癌，病变累及全层，但未突破基底膜宫颈病变的治疗宫颈病变的治疗 病病 变变 名名 称称 治治 疗疗 方方 法法 重度宫颈炎 CIN I CIN II 激光 冷冻 LEEP 重度非典型增生 CIS 锥切 浸润癌 子宫全切术 放疗 化疗宫颈癌术后存活率宫颈癌术后存活率n宫颈浸润癌5年存活率：67%n宫颈早期浸润癌：90%n宫颈原位癌：100%结结 论论 HPV是宫颈癌的主要致病因素
6、是宫颈癌的主要致病因素 宫颈癌早期诊断、早期治疗意义重大宫颈癌早期诊断、早期治疗意义重大 对宫颈病变不同阶段的诊断，决定了临对宫颈病变不同阶段的诊断，决定了临床治疗方式、随诊方案床治疗方式、随诊方案目录 n背景知识n临床应用价值n原位杂交原理n市场定位和优势HPV产品的：宫宫 颈颈 癌癌 筛筛 查查n巴氏涂片（巴氏涂片（PAP涂片）涂片）nCCT（电脑辅助宫颈细胞学检测系统）nTCT（膜氏液基超薄细胞学检测系统）CCT、TCT都是都是PAP方法的改进方法的改进nHPV-DNA病毒学检测病毒学检测 TCT+HPV检测（检测（HC）n阴道镜下活检阴道镜下活检 即病理切片检查，严格说，已不属筛查范围
7、即病理切片检查，严格说，已不属筛查范围杂交捕获杂交捕获 vs 原位杂交原位杂交n杂交捕获(HC)：定性，分型，临床，筛查n原位杂交(ISH)：定性，定位，分型，病理，诊断nHC与ISH在应用上互补HPV原位杂交产品原位杂交产品的临床应用价值的临床应用价值n病因学诊断n协助病变分期n作为预测因素n指导疫苗应用目录 n背景知识n临床应用价值n原位杂交原理n市场定位和优势HPV产品的：HPV原位杂交的主要过程n微波修复：暴露核酸n变性：打开双链DNA探针、双链DNA病毒n杂交：单链DNA探针与单链DNA病毒互补配对n显色：细胞核着色操 作 要 点n微波高火，30分钟n变性95C，8分钟n杂交：37C
8、n杂交液与盖玻片大小匹配n条件匹配，充分洗涤尖锐湿疣尖锐湿疣，H P V通用型通用型（泰普试剂盒）（泰普试剂盒）尖锐湿疣，尖锐湿疣，HPV 6/11型型（泰普试剂盒）（泰普试剂盒）尖锐湿疣，尖锐湿疣，HPV 16/18（泰普试剂盒）（泰普试剂盒）宫颈癌，宫颈癌，HPV 16/18（泰普试剂盒）（泰普试剂盒）宫颈癌，宫颈癌，HPV 16/18（泰普试剂盒）（泰普试剂盒）目录 n背景知识n临床应用价值n原位杂交原理n市场定位和优势HPV产品的：市市 场场 定定 位位n目标科室：病理科n目标客户：病理医生n产品目的：协助病因诊断及病理分期产产 品品 类类 型型n高危型：16/18型n通用型（28种亚
9、型）n低危型：6/11型使使 用用 指指 导导（一）（一）n生殖道炎症与尖锐湿疣的鉴别诊断及预后生殖道炎症与尖锐湿疣的鉴别诊断及预后 选用：通用型（28种亚型）、16/18型、6/11型原位杂交 通用型（+）：尖锐湿疣 16/18型（+）：提示癌变趋向 6/11型（+）：病因诊断、提示预后使使 用用 指指 导导（二）（二）n尖锐湿疣、尖锐湿疣、CIN I、CIN II、CIN III 首选：16/18型原位杂交 参考：通用型原位杂交（避免漏诊）目的：16/18型阳性，可提高病变诊断级别使使 用用 指指 导导（三）（三）nCIS、宫颈癌、宫颈癌 首选：16/18型原位杂交或PCR分型 参考：通用
10、型原位杂交（HPV阳性，辅助诊断）原因：采用PCR分型，防止因原位杂交灵敏度不够而 可能导致的漏诊泰普泰普HPV原位杂交原位杂交 vs PCR宫颈癌组织：宫颈癌组织：n原位杂交：原位杂交：20例（）例（）nPCR：20例（）例（）（临床禁）（临床禁）n免疫组化：15例（）5例（）（北（北 医医 病病 理理 系系 提提 供）供）产品比较产品比较（HPV通用型通用型）公司名称公司名称 TIB Dako Panpath亚型亚型28 种种10种6种5,6,8,11,16,18,26,27,30,31,33,35,39,40,41,42,43,45,47,48,51,52,53,54,55,57,58,
11、596,11,16,18,3133,35,45,51,5216,18,6,11,3133规格（人份）规格（人份）20，50试剂150探针5040价格价格最适合中国市场最适合中国市场进口进口送货送货即即 时时等待等待我我 们们 的的 优优 势势n通用型产品覆盖面广(28种亚型)，包含HPV52/58型；n高危型灵敏度高；n微波修复，容易掌握；n除了普通规格外，还提供20人份的小规格产品，适合于科研及业务量不大的科室；n在保证质量的前提下，价格最具竞争力；n除了售后服务之外，还能够开展售前培训；n强有力的研发队伍，能够做到产品的不断完 善和升级；总总 结结n协助病理医生进行诊断n指导临床医生确定治疗方案n患者得到及时、最佳治疗联 系 方 式连瑞虹电话：010-80720191010-80720191转转607607 13366267257 13366267257谢谢！
