1、实验二实验二温度、温度、pHpH值、激活值、激活剂和抑制剂和抑制剂对酶活剂对酶活性的影响性的影响及特异性及特异性一、实验目的一、实验目的1 1通过实验，观察温度、通过实验，观察温度、pHpH值、激活剂与值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。抑制剂对酶促反应速度的影响。2 2能运用所学的生化知识对实验结果进行能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。正确的分析。二、实验原理二、实验原理 利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pHpH、激、激动
2、剂和抑制剂对酶的活性影响。动剂和抑制剂对酶的活性影响。淀粉淀粉糊精糊精麦芽糖和葡萄糖麦芽糖和葡萄糖蓝蓝色色碘碘紫色紫色红色红色无色无色无色无色碘碘碘碘二、实验原理二、实验原理 u在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在温度在3737左右。温度过高，酶变性失活，酶促左右。温度过高，酶变性失活，酶促反
3、应速度下降，甚至停止。反应速度下降，甚至停止。u每种酶都有最适的每种酶都有最适的pHpH值，在最适值，在最适pHpH值时，酶的活值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pHpH均均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适酶的最适pHpH值为值为6.86.8。u氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。淀粉酶有抑制作用。三、实验材料三、实验材料u1.1%1.1%淀粉溶液淀粉溶液 取可溶性淀粉取可溶性淀粉1g,1g,加加5ml5ml蒸馏水蒸
4、馏水,调成糊状调成糊状,再加再加80ml80ml蒸馏水蒸馏水,加热并不断搅拌加热并不断搅拌,使其充分溶解使其充分溶解,放冷放冷,最后用蒸馏水稀释至最后用蒸馏水稀释至100ml100ml。u2.pH3.02.pH3.0缓冲液缓冲液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液205ml205ml，0.1mol/L0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液795ml,795ml,混合即成混合即成.u3.pH6.83.pH6.8缓冲液缓冲液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液772ml772ml，0.1mol/L0.1mol/L柠檬
5、酸溶液柠檬酸溶液228ml,228ml,混合即成混合即成.u4.pH8.04.pH8.0缓冲液缓冲液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液972ml972ml，0.1mol/L0.1mol/L柠檬酸溶液柠檬酸溶液28ml28ml混合即成混合即成.5.0.9%NaCl溶液溶液 6.1%CuSO4溶液溶液7.碘液碘液 9.试管架试管架 11.试管夹试管夹 12.滴管滴管 13.白瓷板白瓷板 14.恒温水浴箱恒温水浴箱 15.电炉电炉 16.烧杯烧杯【注意事项注意事项】1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果结果2.各管
6、反应时间应严格控制，保证一致。各管反应时间应严格控制，保证一致。四、实验方法四、实验方法 稀释唾液制备稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼用水漱口，含蒸馏水咀嚼2 2分钟分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀粉酶（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太
7、快，则减少稀释唾液的用量）太快，则减少稀释唾液的用量）煮沸唾液的制备煮沸唾液的制备 取上述唾液约取上述唾液约5ml5ml，放入沸水中，放入沸水中煮沸煮沸5 5分钟，取出备用。分钟，取出备用。（一）温度对酶促反应速度的影响（一）温度对酶促反应速度的影响管管 号号 123缓冲液（缓冲液（pH6.8）20滴滴20滴滴20滴滴1%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温预温温度预温温度 0 37 37预温预温5分钟后取出，继续向各管加入相应唾液分钟后取出，继续向各管加入相应唾液稀释唾液稀释唾液10滴滴1
8、0滴滴 煮沸唾液煮沸唾液10滴滴把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴10分钟，加碘分钟，加碘2滴滴水浴温度水浴温度 03737结果与分析结果与分析 取白瓷板一块，向各凹分别加取白瓷板一块，向各凹分别加1 1滴碘液，每滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从隔半分钟用滴管或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液向各管加碘液1 1滴，摇匀观察颜色变化滴，摇匀观察颜色变化(切切记勿摇动记勿摇动)
9、。摇匀再观察。摇匀再观察。（二）（二）pH对酶促反应速度的影响对酶促反应速度的影响管号管号1231%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴pH5.0缓冲液缓冲液10滴滴pH6.8缓冲液缓冲液10滴滴pH8.0缓冲液缓冲液10滴滴稀释唾液稀释唾液5滴滴5滴滴5滴滴把三支管摇匀，然后放至把三支管摇匀，然后放至 37水浴水浴10分钟，加碘分钟，加碘2滴摇匀滴摇匀结果与分析结果与分析 将各管混匀，放进将各管混匀，放进3737水浴箱水浴箱中保温。中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加取白瓷板一块，向各凹分别加1 1滴碘液，每隔半分钟用滴管滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1
10、 1滴，加滴，加到已加有碘液的小凹中，观察到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管（即只显棕黄色时），向各管加碘液加碘液1 1滴，摇匀观察颜色变滴，摇匀观察颜色变化。化。（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响管号管号12341%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴pH6.8缓冲液缓冲液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴蒸馏水蒸馏水2滴滴氯化钠溶液氯化钠溶液2滴滴CuSO4溶液溶液2滴滴Na2SO4溶液溶液2滴滴稀释唾液稀释唾液5滴滴5滴滴5滴滴5滴滴把三支管摇匀，然后放至把三支管
11、摇匀，然后放至 37水浴水浴10分钟，加碘分钟，加碘2滴摇匀滴摇匀结果与分析结果与分析 将各管摇匀，放进将各管摇匀，放进3737水水浴箱中保温。取白瓷板一浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加块，向各凹分别加1 1滴碘滴碘液，每隔半分钟用滴管或液，每隔半分钟用滴管或玻棒从玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液时），向各管加碘液1 1滴，滴，摇匀，观察各管颜色变化。摇匀，观察各管颜色变化。激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂激活剂
12、与抑制剂五、思考题五、思考题1.什么是酶的最适温度？什么是酶的最适温度？2.什么是酶的最适什么是酶的最适pH?3.激活剂与抑制剂对酶活性影激活剂与抑制剂对酶活性影 响实验中设置第四管的作用响实验中设置第四管的作用 是什么？是什么？4.什么是酶的特异性？什么是酶的特异性？（四）（四）酶的专一性对酶促反应的影响。酶的专一性对酶促反应的影响。加入物加入物1号管号管2号管号管3号管号管PH值值6.8缓冲液缓冲液20滴滴20滴滴20滴滴1%的淀粉的淀粉10滴滴10滴滴1%的蔗糖的蔗糖10滴滴煮沸唾液煮沸唾液5滴滴 稀释唾液稀释唾液5滴滴5滴滴结果与分析结果与分析（2）混匀，）混匀，37 水浴水浴10min，分别加入班氏试剂，分别加入班氏试剂20滴。滴。（3）各管摇匀置于沸水煮沸）各管摇匀置于沸水煮沸8-10min，观察结果并记录。，观察结果并记录。酶的专一性酶的专一性
