1、性病的实验室检验与质量控制1 一、什么是性病性病 是一组传染性疾病，通过性接触而传播的疾病。2我国重点防治的八种性病n梅毒、梅毒螺旋体n淋病、淋球菌n软下疳、杜克雷嗜血杆菌n性病性淋巴肉芽肿、衣原体n生殖道沙眼衣原体感染、沙眼衣原体n尖锐湿疣、乳头瘤病毒n生殖器疱疹、生殖器疱疹病毒n艾滋病、HIV病毒3性病实验室在性病疫情监测中的任务疾病准确诊断*梅毒*淋病*沙眼衣原体感染淋球菌耐药监测实验室检测专项性病患病率调查实验室质量控制4性病实验室在性病防治中的作用临床服务疫情监测实验室诊断效果评价科学研究5主要常见性病实验室检测介绍n梅毒n淋病n生殖道沙眼衣原体6常用梅毒检测方法n病原学检测n血清学
2、检测7病原学检测n原理：查找梅毒螺旋体n方法：暗视野显微镜检查、镀银染色法、直接荧光法、PCR8暗视野显微镜检查n制片：标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在暗视野显微镜上油镜观察。n观察：由于光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出光亮。9梅毒螺旋体特征n螺旋整齐n折光性强n运动缓慢而有规律，有三种运动方式：1.围绕其长轴旋转运动 2.伸缩其螺旋间距离移动 3.弯曲扭动如蛇形10病原学检查的临床意义n可以确诊为梅毒n及时治疗、预后、尽早切断传染源n注意：未找到梅毒螺旋体，不能排除患梅毒的可能性。11梅毒血清学检测一、非梅毒螺旋体抗原血清学试验二、梅毒螺旋体抗原血清学试验12
3、非梅毒螺旋体抗原血清学试验1、原理：检测人体感染梅毒螺旋体产生的抗类脂抗原的抗体2、方法：性病研究实验室试验（VDRL）不加热血清反应素试验（USR）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）13RPRRPR定性试验n在纸卡圆圈中加入50L待检血清，涂满整待检血清，涂满整个圆圈个圆圈n使用滴管和专用针头（60滴滴/mL），加），加1滴滴抗原悬液抗原悬液n旋转100rpm8minn立即判断结果14RPRRPR定量试验n待检血清用等渗盐水在纸卡圆圈中作6个个稀释度：原血清，稀释度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32n按定性试验步骤操作，以出现阳性反应的
4、最高稀释度报告结果15RPRRPR定量试验定量试验n中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确但很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均匀分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为阴性16非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点：优点：*敏感性特异性好敏感性特异性好 *不需要昂贵设备，简单易行不需要昂贵设备，简单易行 *适用于大量人群的血清筛查适用于大量人群的血清筛查 *有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、判愈、复发。判愈、复发。*20分钟可获得实验结果。分钟可获得实验结果。*试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较
5、。试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。*试验可被内部质控和外部质控监控进行。试验可被内部质控和外部质控监控进行。缺点：缺点：*敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，BFP反应和前带反应和前带现象现象 17非梅毒非梅毒抗原血清试验的敏感性和特异性抗原血清试验的敏感性和特异性 未经治疗的各期梅毒的敏感性未经治疗的各期梅毒的敏感性18非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n简单、快速n硬下疳出现1周-2周可呈阳性n适用于大量人群的筛查n疗效观察、复发或再感染判断19非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n早期梅毒
6、（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。n 一期梅毒1年后转为阴性n 二期梅毒2年后转为阴性。n 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。20生物学假阳性生物学假阳性n滴度常滴度常1:81:8分为急性（分为急性（6 6个月内消失）个月内消失）慢性（持续慢性（持续6 6个月以上）个月以上）21生物学假阳性生物学假阳性n急性反应见于：急性反应见于：n发热性疾病如肺炎、上呼吸道感染、疟疾、心内膜发热性疾病如肺炎、上呼吸道感染、疟疾、心内膜炎、传染性单核细胞增多症等；炎、传染性单核细胞增多症等；n疫苗接种；疫苗
7、接种；n妊娠。妊娠。22n慢性反应见于慢性反应见于n自身免疫学疾病如自身免疫学疾病如SLESLE；n抗磷脂综合征；抗磷脂综合征；n瘤型麻风；瘤型麻风；n吸毒者；吸毒者；n老年人。老年人。生物学假阳性生物学假阳性23前带现象前带现象n发生率发生率22 当抗体滴度高，原倍血清只是弱阳性甚或阴性，如当抗体滴度高，原倍血清只是弱阳性甚或阴性，如将血清稀释后再做，则见高滴度反应将血清稀释后再做，则见高滴度反应24梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验原理：用梅毒螺旋体抗原检测特异性抗梅毒螺旋体抗体 方法：n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)n 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)n 梅毒酶联免
8、疫吸附试验（ELISA）n 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）n 梅毒IgM抗体检测（IgM）n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）25梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验nTPPA2627梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如如RPRRPR等等)初初筛阳性标本的确证试验。筛阳性标本的确证试验。n梅毒患者经过抗梅治疗后，梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPATPPA等梅毒螺旋等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性，故体抗体试验试验仍可阳性，故TPPATPPA等试验阳等试验阳性不能作为疗效观察的指标。性不能作为
9、疗效观察的指标。nTPPATPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。诊断。28梅毒血清学试验结果的临床意义总汇梅毒血清学试验结果的临床意义总汇 TRUST _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 一期梅毒的早期一期梅毒的早期 +现症梅毒现症梅毒(梅毒孕妇所生梅毒孕妇所生 的婴儿除外的婴儿除外)+-+-生物学假阳性生物学假阳性 -+-+早期梅毒、经治疗后早期梅毒、经治疗后29梅毒实验室检测策略选择梅毒实验室检测策略选择n根据目的选择检测方法及检测策略。n可采用任何一类梅毒血清学检测方法作
10、为筛查试验。方法选择依据n敏感性、特异性（试剂评估）n操作流程（可及性）n试剂的价格、结果时间（可接收性）30淋淋 病病31常用淋病检测方法常用淋病检测方法n直接显微镜检查n分离培养淋球菌32直接显微镜检查直接显微镜检查n原理：男性淋菌性尿道炎的分泌物中，多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。33直接显微镜检查的临床意义直接显微镜检查的临床意义n男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。n宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。n不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染n不能用于疗后判愈n多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌
11、，需做培养进行确证34淋球菌培养淋球菌培养1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。2、方法特点：n敏感性 81100%。n 特异性 100%35淋球菌培养淋球菌培养n培养条件：35 36，含5%10%CO2，湿润（70%湿度）的环境。nCO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。n培养时间：2448小时36淋球菌的初步鉴定淋球菌的初步鉴定初步鉴定淋球菌的依据n菌落特征n氧化酶试验n革兰染色37淋球菌培养的临床意义淋球
12、菌培养的临床意义n培养法为诊断淋病的金标准.n用于女性感染者、亚临床感染者、以及来自直肠和咽部的感染的确诊试验。38生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染39常用生殖道衣原体感染检测方法常用生殖道衣原体感染检测方法n抗原检测抗原检测 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）免疫层析快速检测免疫层析快速检测n核酸检测核酸检测40酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验原理：与衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。方法特点n 敏感性：7997n 特异性:9799n试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘
13、故41n结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染的检测。n在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体检；低流行率（小于5%）的人群中应用时，结果解释应慎重。酶联免疫吸附试验临床意义酶联免疫吸附试验临床意义42抗原快速检测抗原快速检测原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原。方法特点n简易，方便，快速，尤其适用于基层单位n标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果43抗原快速检测临床意义抗原快速检测临床意义n该方法主要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏感性较低。n该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合基层实验室开展。44核酸扩
14、增检测核酸扩增检测原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。方法：包括聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、等温链置换扩增技术（SDA）、转录介导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用的有实时荧光PCR。45核酸扩增检测临床意义核酸扩增检测临床意义n核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。n核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。n开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。46方法评价方法评价
15、n核酸检测 是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性上的局限性nELISA抗原检测 严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法高通量，自动化n快速抗原检测 操作时间短，单人份操作，但敏感性极低47性病实验室的质量控制n内部质量控制n外部质量控制481.有实验室负责人，实验人员分工明确2.实验室人员应该定期参加培训、进修或专业研讨会3.有实验室各项管理制度4.制定常规实验室标准操作程序（SOP）性病实验室的质量管理性病实验室的质量管理49性病实验室的质量管理性病实验室的质量管理n1仪器、设备 实验室所有使用仪器应有使用、保养及维修记录有温控的仪器需每天记录温度n2培养基及试剂 严格按配方及技术要求配制培养基及试剂 对配制的培养基及试剂应有质检 购买的试剂盒应为经国家有关部门检验 合格的产品（附有关证明）所有培养基及试剂的保存都应符合要求50性病实验室质量管理性病实验室质量管理3质控（1）实验室开展室内质控，包括使用阳性 对照和阴性对照质控品（2）外部质控:省临检中心的室间质评活动4.记录（LIS、描述性文字记录）作用：可查询、统计、上报、科研515152
