1、病毒感染和实验诊疗病毒感染和实验诊疗病毒的基本性状和分类病毒的基本性状和分类7病毒的大小与形态病毒的大小与形态 一、病毒的大小与测量单位一、病毒的大小与测量单位 极其微小，测量单位为纳米（nanometer，nm），20nm-300nm观察及测量：电镜、滤过、超速离心、观察及测量：电镜、滤过、超速离心、X线衍线衍射射二、病毒的形态二、病毒的形态 球形，砖形，杆形，弹形，长丝状，蝌蚪形8狂犬病毒狂犬病毒(100-300 x75nm)乳头瘤病毒乳头瘤病毒(70-90nm)轮状病毒轮状病毒(60-80nm)乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(42nm)病毒的结构与化学组成病毒的结构与化学组成 一、病毒的结构一
2、、病毒的结构 核酸，衣壳，包膜 二、二、病毒的化学组成病毒的化学组成 核酸，蛋白质，脂质和糖类 13核酸（核酸（DNA/RNA)蛋白质蛋白质 保护核酸保护核酸 结构蛋白：结构蛋白：参与感染参与感染 具有抗原性具有抗原性 非结构蛋白：病毒酶类（病毒复制，非结构蛋白：病毒酶类（病毒复制，抑制宿主相应功能）抑制宿主相应功能）脂类和糖：脂类和糖：主要存在于包膜中主要存在于包膜中维护病毒体结构完整性维护病毒体结构完整性与宿主细胞有亲和及融合的性能与宿主细胞有亲和及融合的性能表现病毒种、型抗原性表现病毒种、型抗原性与病毒引起机体中毒症状有关与病毒引起机体中毒症状有关病毒的增殖病毒的增殖 吸附，吸附，穿入，
3、穿入，脱壳，脱壳，生物合成，生物合成，组装成熟组装成熟释放释放 一、一、病毒的复制周期病毒的复制周期15病毒受体病毒受体(viral receptor,VP)是指存在于细胞表面，能被病毒特异识别并与之结合，促进病毒感染的一组分子复合物。受体是病毒侵入的门户，它决定了病毒的宿主范围，组织及细胞嗜性。二、二、病毒的异常增殖病毒的异常增殖 缺陷病毒缺陷病毒:是指因病毒基因组不完整或者因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒。缺陷病毒不能复制，但却能干扰同种成熟病毒体进入易感细胞，故又称为缺陷干扰颗粒(defective interfering particles）顿挫感染顿挫感染:病毒进入宿主细胞，
4、若细胞缺乏病毒复制所需的酶、能量和原料等，则病毒不能合成本身成分；或虽合成部分或全部成分，不能装配和释放，称为顿挫感染。构成顿挫感染的细胞被称为非容纳性细(non-permissive cells)。病毒的遗传与变异病毒的遗传与变异 一、病毒性状的变异一、病毒性状的变异 毒力变异 抗原性变异 空斑变异 对理化因素抵抗力或依赖性的变异 二、病毒变异的机制二、病毒变异的机制 基因突变 基因重组 20遗传物质变异的类型遗传物质变异的类型1.基因突变基因突变突变株突变株指病毒基因碱基序列改变，导致表型性状改变指病毒基因碱基序列改变，导致表型性状改变的毒株的毒株条件致死性突变株（条件致死性突变株（con
5、ditional-lethal mutant）温度敏感突变株（温度敏感突变株（temperature sensitive mutant,ts株株）为条件致死性突变株中应用最广泛的为条件致死性突变株中应用最广泛的缺陷型干扰突变株（缺陷型干扰突变株（defective inhibition mutant，DIM）宿主范围突变株（宿主范围突变株（host range mutant,hr突变株）突变株）耐药突变株（耐药突变株（drug-resistant mutant）2.基因重组与重配基因重组与重配 两种不同病毒感染同一细胞时，可发生基因两种不同病毒感染同一细胞时，可发生基因交换而形成新性状的重组体
6、。交换而形成新性状的重组体。基因重组（基因重组（recombination）不分节段基因组病毒不分节段基因组病毒 基因重配（基因重配（reassortment）分节段基因组的病毒分节段基因组的病毒 类型：类型：活病毒之间：活病毒之间：N0H0 +N1H1N0H1活病毒与灭活病毒之间（交叉复活）活病毒与灭活病毒之间（交叉复活）灭活病毒灭活病毒 之间（多重复活）之间（多重复活）3.基因整合（gene integration）病毒基因组（病毒基因组（DNA病毒与逆转录病毒）病毒与逆转录病毒）与细胞细胞基因组的重组过程。与细胞细胞基因组的重组过程。整合可引起宿主细胞基因改变整合可引起宿主细胞基因改变细
7、胞遗细胞遗传性改变传性改变细胞转化细胞转化个别可发生细胞恶化个别可发生细胞恶化肿瘤肿瘤病毒对理化因素的抵抗力病毒对理化因素的抵抗力 一、一、物理因素物理因素 温度，电离辐射，紫外线温度，电离辐射，紫外线 二、化学因素二、化学因素 氧化剂，脂溶剂，酚，甲醛，甘氧化剂，脂溶剂，酚，甲醛，甘油油,酸碱等酸碱等25 病毒的分类与命名原则病毒的分类与命名原则 1.病毒体特征 颗粒大小，颗粒形状，有无包膜，衣壳对称性和结构2.基因组特征 核酸类型（DNA或RNA），核酸链数（单链/双链），核酸极性（正链/负链），核酸片段数3.蛋白质特征 蛋白质数目，大小，蛋白质功能（转录酶，血凝素，蛋白融合）4.复制特征
8、 核酸复制类型，转录特征5.理化特征 pH稳定性，离子强度，抵抗力 6.生物学特征 血清学关系，宿主范围，致病性，组织嗜性，传播途径，媒介关系，地理分布 26病毒的感染与免疫病毒的感染与免疫 27w细胞病变效应（细胞病变效应（CPE）ABL929 cells+EMCV细胞融合麻疹病毒包涵体 细胞凋亡后基因组细胞凋亡后基因组DNA梯状电泳条带梯状电泳条带病毒致肿瘤的原因病毒致肿瘤的原因宫颈癌宫颈癌肝癌肝癌鼻咽癌鼻咽癌恶性淋巴瘤恶性淋巴瘤白血病白血病（二）病毒感染的免疫病理作用（二）病毒感染的免疫病理作用1.抗体介导的免疫病理作用：抗体介导的免疫病理作用：、型超型超敏反应敏反应2.细胞介导的免疫病
9、理作用：细胞介导的免疫病理作用：CTL、自身、自身抗原抗原3.免疫抑制作用：免疫抑制作用：HIV、CMV水平传播水平传播 病毒在人群不同个体间的传播，病毒在人群不同个体间的传播，也包括从动物到动物再到人的传播也包括从动物到动物再到人的传播垂直传播垂直传播 通过胎盘或产道，病毒由宿主通过胎盘或产道，病毒由宿主的亲代传给宿主的子代的方式的亲代传给宿主的子代的方式HBV、CMV、HIV、风疹病毒（其他微生物种少见）。、风疹病毒（其他微生物种少见）。隐性感染隐性感染显性感染显性感染急性感染急性感染持续性感染持续性感染慢性感染慢性感染潜伏性感染潜伏性感染慢发病毒感染慢发病毒感染 病毒感染后不引起临床症状
10、病毒感染后不引起临床症状 病毒在体内持续数月至数年，甚至病毒在体内持续数月至数年，甚至数十年，且经常反复间断地向外排毒，数十年，且经常反复间断地向外排毒，可出现症状，引起慢性进行性疾病，也可出现症状，引起慢性进行性疾病，也可不出现症状而长期带病毒。可不出现症状而长期带病毒。病毒感染后有很长的潜伏期，病毒感染后有很长的潜伏期，经数年，数十年后，可发生某些进行性疾病，经数年，数十年后，可发生某些进行性疾病，最终死亡。（最终死亡。（HIV）病程长，病毒可检出（病程长，病毒可检出（HBV）潜伏感染：潜伏感染：病毒的基因存在于一定的组织或病毒的基因存在于一定的组织或细胞中并不产生感染性的病毒体，细胞中并
11、不产生感染性的病毒体，但在一定的条件下，病毒被激活但在一定的条件下，病毒被激活而进入复制状态，引起临床症状而进入复制状态，引起临床症状（）慢发病毒感染慢发病毒感染 持持续续性性感感染染 慢性感染慢性感染 潜伏感染潜伏感染病毒感染的实验诊断病毒感染的实验诊断 46儿童腮腺炎病毒感染儿童腮腺炎病毒感染HSV-I 感染引起的唇疱疹感染引起的唇疱疹乳头瘤病毒感染引起的各种症状乳头瘤病毒感染引起的各种症状病毒感染诊断的意义病毒感染诊断的意义病毒诊断是治疗的前提病毒诊断是治疗的前提用于判断预后用于判断预后用于疾病的预防用于疾病的预防用于疾病的监测用于疾病的监测指导用药指导用药病毒学实验室诊断的四个方面病毒
12、学实验室诊断的四个方面 检测病毒体极其所致宿主细胞的检测病毒体极其所致宿主细胞的病理改变（直接检测和分离鉴定）病理改变（直接检测和分离鉴定）检测病毒蛋白抗原和核酸检测病毒蛋白抗原和核酸 检测抗体检测抗体 其他非特异性物质其他非特异性物质一、标本采集与送检一、标本采集与送检标本采集时间的选择标本采集时间的选择发病早期发病早期 标本的储存和运送标本的储存和运送 低温、含抗生素培养基低温、含抗生素培养基标本采集部位及种类的选择标本采集部位及种类的选择血液、脑脊液、宫腔拭子、粪便、血液、脑脊液、宫腔拭子、粪便、含漱液、咽喉拭子、尿液或尿道含漱液、咽喉拭子、尿液或尿道拭子、尸检标本拭子、尸检标本甲型肝炎
13、标本采集及时间的选择甲型肝炎标本采集及时间的选择常规分离与鉴定常规分离与鉴定动物接种动物接种鸡胚接种鸡胚接种组织培养组织培养器官培养移植培养 细胞培养 原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养三大培养方法三大培养方法病毒在细胞内增殖的指标病毒在细胞内增殖的指标1、CPE2、红细胞吸附、红细胞吸附正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞内基氏小体内基氏小体病毒的鉴定形态学鉴定：细胞病变效应（CPE）、包含体血吸附和血凝作用干扰作用病毒成分的直接检测电镜技术标本制备：超薄切片法（正染法）和负染法病毒的识别：有包膜和无包膜的病毒电镜技术的应用：分类及诊断病毒的免疫学诊断方法病毒的免疫学诊断方法标记法标记法不标
14、记法不标记法免疫酶法、免疫荧光法血凝法、乳胶凝集法免疫转印法SPA法、凝集抑制法放射免疫法补体结合法、中和试验法化学发光法沉淀反应、免疫电镜测热及其他其他颗粒凝集法免疫PCR法 病毒的血清学诊断病毒的血清学诊断中和试验中和试验补体结合试验补体结合试验血凝抑制试验血凝抑制试验免疫扩散等免疫扩散等免疫荧光免疫荧光免疫酶技术免疫酶技术血凝抑制试验血凝抑制试验双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验病毒的快速诊断病毒的快速诊断光镜光镜-包涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blotbiochip免疫酶技术免疫荧光技术Western blot技术123bp246bp369bp492bpM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13PCR技术Integrated gene DS SS 1 2 3 4A3.5 2.1/2.4 GAPDH kb 1 2 3 4BSouthern blot 和 Northern blot 技术Dot blot 技术原理：采用聚合酶链反应,核酸杂交和酶联显色技术.首先将模板DNA(或cDNA)进行PCR扩增,并将扩增产物加入预先包被捕获探针的微孔板,再加入酶标亲和素应用液,最后加入底物液进行显色反应.基因芯片技术
