1、综合性血液病分子诊断体系我们一直在进步n更强的团队力量n更好的硬件支持n更多的新项目n优化的项目设置血液病诊断和治疗差不多进入分子生物学时代分类标准：1985 FAB WHO 2001 20081960年 1973年 1985年 1995年 1997年 2001年 2008年 2011年 鉴定Ph染色体鉴定t(9;22)易位鉴定BCR-ABL1STI571临床试验FDA批准ImatinibBCR-ABL1定量标准化会议19851988 年Mullis等发明PCR技术HGP，1985年提出，1990年启动2000年，人类基因组草图完成2003年，HGP完成，后基因组时代开始第二代测序技术荧光定量
2、PCR技术第一台毛细管基因测序仪生物信息：检测技术：第二代测序临床应用定量PCR临床应用定性PCR临床应用基因组学的研究推动疾病分子标记的发现和临床应用n 97、3%的AML患者携带其中一种或以上的基因突变n 预后差:FLT3-ITD、MLL-PTD、ASXL1、PHF6n 预后好:CEBPA、IDH2、NPM1伴IDH1/IDH2突变n 伴DNMT3A、NPM1突变、MLL易位患者,采纳大剂量的柔红霉素治疗可提高生存率Prognostic Relevance of Integrated Genetic Profiling in Acute Myeloid LeukemiaJay P、Pate
3、l,et al、,N Engl J Med 2012;366:1079-89肿瘤的突变组n 每一个肿瘤的发生都是一个基因团伙在犯罪 每一个肿瘤基因组都是不同的基因突变的组合n 白血病分子诊断 只依照一种融合基因分类的患者仍有异质性 AML1-ETO VS、AML1-ETO+KIT突变 只检测一种突变也是不够的 NPM1 VS、FLT3 VS、NPM1+FLT3 新的突变出现提早估计预示临床进展 急变、耐药等n 对肿瘤突变组的全面了解有助于指导个性化治疗分子诊断的发展趋势及挑战Lucy A、Godley,DOI:0、1056/NEJMe1200409分子诊断临床应用遇到的问题n 临床医师如何认识
4、新的项目？n 实验室假如向临床医师推荐新的项目？n 如何提高突变的检测灵敏度？n 如何降低检测费用？提高发现分子标记的速度？综合性血液病分子诊断体系融合基因筛查定量监测MRDMRD耐药、疾病进展监测基因突变筛查定量监测MRDMRD原癌基因表达谱定量监测个体差异相关的药物代谢、药物不良反应等其它项目:移植后嵌合状态;IGIG、TCRTCR克隆性;BCR-ABL1BCR-ABL1变异分析等孟德尔遗传病:先天性免疫缺陷、范可尼贫血等n“活在当下”与“追本溯源”用初治时的石蜡、形态涂片标本进行基因突变筛查n 从实验方案和流程设计上加快报告速度 新技术的应用和技术创新n 融合基因和基因突变筛查 针对性监
5、测 降低总体检测费用,争取宝贵时间 内容将不断增加,价格一般不再调整综合性血液病分子诊断体系高通量基因测序的应用n 降低单位检测成本 肿瘤“突变组”分析变为估计n 深度测序 突变MRD监测n IG、TCR免疫组库分析白血病融合基因和基因突变检测V2、3版31种融合基因筛查新的融合基因筛查项目n AML融合基因筛查(13种)AML1-EAP(1);AML1-ETO(1);AML1-MDS1(2);CBFB-MYH11(8);DEK-CAN(1);NPM-ALK(1);NPM-MLF1(1);NPM-RARA(2);PLZF-RARA(2);PML-RARA(5);SET-CAN(1);TEL-A
6、BL1(2);TLS-ERG(5)n ALL融合基因筛查(10种)BCR-ABL1(6);E2A-HLF(3);E2A-PBX1(2);NPM-ALK(1);NPM-MLF1(1);SET-CAN(1);SIL-TAL1(1);TEL-ABL1(2);TEL-AML1(2);TLS-ERG(5)n MPN融合基因筛查(23种)AML1-MDS1(2);BCR-ABL1(6);FIP1L1-PDGFRA(5);TEL-ABL1(2);18种PDGFRB fusion gene;TLS-ERG(5)n MLL融合基因筛查(11种)MLL-PTD;MLL-AF1p(4);MLL-AF1q(4);ML
7、L-AF4(12);MLL-AF6(4);MLL-AF9(8);MLL-AF10(18);MLL-AF17(1);MLL-AFX(4);MLL-ELL(8);MLL-ENL(4)融合基因筛查的特点和意义n 从分子水平快速鉴定患者基因异常 节约时间和总体费用n 大多数情况下,某一患者只有一种融合基因阳性n 提供按WHO2008标准分类的依据n 预后判断和指导用药n 提供灵敏的MRD监测指标病例:格列卫治疗FIP1L1-PDGFRA白血病n 男,43岁,贫血,血小板低,嗜酸粒细胞增多n 31种融合基因筛查:FIP1L1-PDGFRA阳性n 格列卫每周200mg每周100mg治疗 血象特别快转为正常
8、 FIP1L1-PDGFRA定量逐渐降低 20090728 32、56%20091021 5、83%20100426 0、0089%基因突变筛查项目n AML基因突变筛查(11种)CEBPA;DNMT3A;FLT3-ITD/TKD;IDH1;IDH2;KIT;KRAS;NPM1;NRAS;TET2;WT1n ALL基因突变筛查(11种)FBXW7;FLT3;KRAS;IKZF1;JAK1;JAK2;NOTCH1;NRAS;PAX5;PHF6;MLL-PTDn MPN基因突变筛查(7种)IDH1;IDH2;JAK2;KIT;MPL;SH2B3(LNK);TET2n MDS基因突变筛查(8种)DN
9、MT3A;IDH1;IDH2;JAK2;MPL;SF3B1;SRSF2;TET2基因突变筛查的特点和意义n 同一患者估计同时存在多种基因突变 可与融合基因或其它基因突变同时存在 同一患者的同一基因估计存在不同的突变 克隆性判断;诊断分型;预后判断;个体化用药n 基因突变在疾病发展过程中估计会变化 FLT3、IKZF1等,与疾病进展有关n 目前大多数基因突变作为MRD监测指标有困难 用高通量测序进行深度测序分析可帮助实现n 能够用初诊时的石蜡、涂片标本回顾性分析KIT基因突变n 主要见于伴inv(16)/CBFB-MYH11融合基因的M4和伴t(8;21)/AML1-ETO的M2n 伴KIT突变
10、的患者预后相对较差n 伴KIT突变的患者用格列卫治疗有一定效果IKZF1基因突变n 主要见于ALL 约20%儿童B-ALL;30%成人B-ALL;5%T-ALL 约63、083、7%的BCR-ABL1阳性B-ALL 约20%染色体核型正常的B-ALL患者 MLL融合基因阳性的ALL患者常伴IKZF1突变 B-ALL患者独立的预后不良因素n CML患者急淋变时约86%发生IKZF1突变 建议CML患者复诊时检测,可提早预警急变病例n男,30岁,形态学为M1型,柔红霉素+阿糖胞苷化疗一疗程后nNPM1突变阳性 42、15%nFLT3突变阳性n31种融合基因阴性,HOX11表达阳性血液系统遗传病分子
11、诊断血液系统遗传病检测项目n 噬血细胞综合征相关基因突变 PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11 SH2D1A、XIAPn 范可尼贫血基因突变 FANCA 60%、FANCC 15%、FANCG 10%n WAS综合征n 遗传性铁粒幼细胞性贫血噬血细胞综合征相关基因突变和疱疹病毒检查结果基因突变谱型疱疹病毒感染谱型先天遗传因素和疾病表型关系先天遗传因素由弱到强的一组病因相关的症候群？FHL，XLPCAEBVEBVEBV相关淋巴瘤IM范可尼贫血突变检测n 部分患者可无显著的先天畸形n 部分患者可染色体断裂实验阴性而基因突变阳性,不能相互替代n 可提供范可尼贫血与继发再障鉴别诊断的依据范可尼贫血基因突变患者示例n 女,6岁,患者骨髓造血衰竭、发育迟缓、身材矮小、皮肤黑、两眼间距宽、多指。n 染色体断裂实验及彗星电泳实验结果阳性。c.989_995delACAGCCC/p.H330LfsX2c.3971CT/p.P1324L感谢您的聆听！
