1、选修选修1 1生物技术实践生物技术实践20142014年高考考试说明知识内容年高考考试说明知识内容1-11-1微生物的利用微生物的利用 （1 1）大肠杆菌的培养和分离）大肠杆菌的培养和分离 （2 2）分离以尿素为氮源的微生物）分离以尿素为氮源的微生物1-21-2酶的应用酶的应用（1 1）果汁中的果胶和果胶酶）果汁中的果胶和果胶酶（2 2）-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1-31-3生物技术在食品加工中的应用生物技术在食品加工中的应用（1 1）果酒及果醋的制作）果酒及果醋的制作（2 2）泡菜的研制和亚硝酸的测定）泡菜的研制和亚硝酸的测定1-41-4浅尝现代生
2、物技术浅尝现代生物技术植物的组织培养植物的组织培养n锁定：（锁定：（1）培养基的配比与制作）培养基的配比与制作 n （2）无菌技术）无菌技术n （3）接种之平板划线操作）接种之平板划线操作 n （4）菌落观察）菌落观察 实验实验1大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离一、基础知识：一、基础知识：（二）培养基（二）培养基（1 1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基、液体培养基、半固体培养基液体培养基、半固体培养基。其中其中固体培养基用于菌种固体培养基用于菌种保存及保存及分离分离、鉴定菌落鉴定菌落、活菌计数等，半固体培养基可观察微生物的运动，活菌计数等，半固体培养基可观察微生物的
3、运动，液体培养基常用于发酵工业。液体培养基常用于发酵工业。（2 2）按功能分：）按功能分：选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途2.2.不同的微生物往往采用不同的培养基配方，不同的微生物往往采用不同的培养基配方，基本营养要素：基本营养要素：水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐营养物质，营养物质，还要考虑的因素？还要考虑的因素？PH、渗透压渗透压等等按照培养基的用途划分种类种类制备方法制备方法用途用途例子例子选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基培养基中加培养基中加入某种化学入某种化学物质物质培养基中加入培养基中加入某种指示剂或某种指
4、示剂或化学药品化学药品从众多微生从众多微生物中分离所物中分离所需的微生物需的微生物鉴别不同种鉴别不同种类的微生物类的微生物加入青霉素分加入青霉素分离得到酵母菌离得到酵母菌和霉菌和霉菌伊红美蓝培伊红美蓝培养基可鉴别大养基可鉴别大肠杆菌肠杆菌1 1、培养基的划分：、培养基的划分：概念概念 来源来源最常用来最常用来源源 作用作用碳源碳源凡能为微凡能为微生物提供生物提供所需碳元所需碳元素的营养素的营养物质物质无机碳源：无机碳源：COCO2 2NaHCONaHCO3 3等等有机碳源：有机碳源：糖类脂肪酸、糖类脂肪酸、花生粉饼、花生粉饼、石油等石油等糖类、糖类、尤其是尤其是葡萄糖葡萄糖1 1、主要用于、主
5、要用于构成微生物构成微生物的细胞物质的细胞物质和一些代谢和一些代谢产物产物2 2、异养微生、异养微生物的营养物质物的营养物质2.2.微生物需要的五大类营养（主要是碳源和氮源）微生物需要的五大类营养（主要是碳源和氮源）概念概念来源来源最常用来源最常用来源 作用作用氮源氮源凡能为微凡能为微生物提供生物提供所需氮元所需氮元素的营养素的营养物质物质无机氮源：无机氮源：N N2 2、氨、铵盐、硝氨、铵盐、硝酸盐等酸盐等有机氮源：尿有机氮源：尿素、牛肉膏、素、牛肉膏、蛋白栋、氨基蛋白栋、氨基酸等酸等铵盐、铵盐、硝酸盐硝酸盐主要用于主要用于合成蛋白合成蛋白质、核酸质、核酸及含氮的及含氮的代谢产物代谢产物此外
6、，还需要无机盐、水分和生长因子（如维生素等）此外，还需要无机盐、水分和生长因子（如维生素等）细菌分类细菌分类细菌细菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌对青霉素更为敏感。对青霉素更为敏感。金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌、链球菌等金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌、链球菌等大肠杆菌（兼性厌氧型）大肠杆菌（兼性厌氧型）1.1.无菌技术无菌技术无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。2.2.消毒与灭菌的区别消毒与灭菌的区别 消毒：消毒：利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生物的过程。
7、物的过程。灭菌：灭菌：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微生物，包括所有细微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。(2)灭菌的方法：灭菌的方法：1 1、灼烧灭菌（接种环）、灼烧灭菌（接种环）2 2、高压蒸汽灭菌：、高压蒸汽灭菌：1Kg/cm1Kg/cm2 2 压力、压力、121 121 下维持下维持15min15min。（灭菌锅或高压锅、（灭菌锅或高压锅、三角瓶）三角瓶）3 3、过滤灭菌、过滤灭菌（G6G6玻璃砂漏斗）玻璃砂漏斗）4 4、紫外线灭菌、紫外线灭菌1 1、培养基配制、培养基配制灭菌：
8、灭菌：高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：1Kg/cm2 压力、压力、121 下维持下维持15min细菌培养基：细菌培养基：蛋白胨和酵母提取物蛋白胨和酵母提取物来配制，还有加入一来配制，还有加入一定量的定量的氯化钠氯化钠，以维持一定的，以维持一定的渗透压渗透压，PH:中性偏碱中性偏碱。霉菌：一般用无机物配制或添加霉菌：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁蔗糖的豆芽汁，PH:中性中性偏酸偏酸。尿素（加热会分解）：用尿素（加热会分解）：用G6玻璃砂漏斗玻璃砂漏斗过滤，过滤，121 下下用纸包灭菌用纸包灭菌培养基分装到各三角瓶、试管和培养皿等培养基分装到各三角瓶、试管和培养皿等不能沾到培养不能沾到培养基，否则
9、容易发生污染基，否则容易发生污染实验中所需的棉花实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染水后容易引起污染2 2、倒平板、倒平板将灭菌后冷却到将灭菌后冷却到60600 0C C的的LBLB固体培养基，在固体培养基，在酒精灯酒精灯火焰旁火焰旁倒入灭菌过的培养皿中，制备培养基平板倒入灭菌过的培养皿中，制备培养基平板3 3、微生物接种、微生物接种将大肠杆菌从斜面接种到将大肠杆菌从斜面接种到LBLB液体培养基液体培养基中在中在酒精酒精灯火焰旁灯火焰旁操作，接种前先冷却。在操作，接种前先冷却。在37370 0C C，每分钟，每分钟200200转的摇床
10、中振荡培养转的摇床中振荡培养12h12h接种环：接种环：灼烧灭菌灼烧灭菌4 4、分离：、分离：划线分离法、涂布分离法划线分离法、涂布分离法划线分离法（划线分离法（方法简单方法简单）：用接种环取振荡培养后的菌液，）：用接种环取振荡培养后的菌液，只在菌液中蘸一次，只在菌液中蘸一次，在固体培养基平板上划线，在固体培养基平板上划线，由于划线由于划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距离加大，每个细菌细胞产生一个菌落。菌间距离加大，每个细菌细胞产生一个菌落。若在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。若在划线的末端出现不连续的
11、单个菌落，表明菌已被分离。涂布分离法（单菌落更易分开，操作复杂）：需将培养的涂布分离法（单菌落更易分开，操作复杂）：需将培养的菌液稀释，菌液稀释，玻璃刮刀（灼烧灭菌）玻璃刮刀（灼烧灭菌），有，有20个以内的单菌落个以内的单菌落为合适。为合适。将培养皿倒置，防止培养基水分散失，空气中杂菌沉降。将培养皿倒置，防止培养基水分散失，空气中杂菌沉降。370C恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养1224h，观察菌落；，观察菌落；5 5、菌种的保存：、菌种的保存：在无菌下将单个菌落用接种环取出，再在无菌下将单个菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，用划线法接种在斜面上，37370 0C C培养培养24h24
12、h，置于，置于4 40 0C C冰箱中保存。冰箱中保存。1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到60 60 左右时，才能用左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，
13、为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可
14、能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。5 5.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，
15、接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。6.6.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。7.7.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
