1、遗传学实验医学宣遗传学实验医学宣教教2遗传学实验医学宣教有丝分裂制片技术和显微镜观察3遗传学实验医学宣教 通过对植物组织的取材、预处理、解通过对植物组织的取材、预处理、解离、染色、压片等步骤的学习，掌握植物离、染色、压片等步骤的学习，掌握植物制片技术，为进行细胞遗传学的研究奠定制片技术，为进行细胞遗传学的研究奠定基础。通过对植物根尖细胞的观察，掌握基础。通过对植物根尖细胞的观察，掌握有丝分裂过程染色体的形态特征和动态变有丝分裂过程染色体的形态特征和动态变化化4遗传学实验医学宣教l 各种生长旺盛的植物组织如根尖，常常进行着有丝分裂。各种生长旺盛的植物组织如根尖，常常进行着有丝分裂。通过有丝分裂，
2、细胞核内染色体准确地复制，有规律地，均通过有丝分裂，细胞核内染色体准确地复制，有规律地，均匀地分配到两个子细胞中去，子细胞和母细胞的遗传组成一匀地分配到两个子细胞中去，子细胞和母细胞的遗传组成一样。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处样。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，可以使细胞和染理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，可以使细胞和染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和染色体色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和染色体的变化特点，并进行染色体计数。的变化特点，并进行染色体计数。5遗传学实验医学宣教蚕豆（Vici
3、a faba,2n=12）干种子 洋葱（Allium cepa,2n=16）鳞茎 6遗传学实验医学宣教 多媒体系统（带显微演示）、显微镜、多媒体系统（带显微演示）、显微镜、培养箱、分析天平、水浴锅、酒精灯、剪培养箱、分析天平、水浴锅、酒精灯、剪刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片滤纸、铅笔、标签纸、胶水盖玻片滤纸、铅笔、标签纸、胶水7遗传学实验医学宣教 秋水仙碱、秋水仙碱、8羟基喹啉、羟基喹啉、苏木精、水合三氯乙醛、铁矾铁苏木精、水合三氯乙醛、铁矾铁钾矾钾矾KFe(SO4)212H2O或铁铵矾或铁铵矾NH4Fe(SO4)212H2O、50丙酸丙酸 无水
4、酒精、冰醋酸无水酒精、冰醋酸 1N盐酸盐酸8遗传学实验医学宣教l丙酸铁矾苏木精丙酸铁矾苏木精 贮存组：贮存组：A液：液：苏木精苏木精2克，溶于克，溶于100ml 50丙酸，丙酸，B液：液：铁钾矾铁钾矾0.5克溶于克溶于100ml 50丙酸。丙酸。l染色液：染色液：A液和液和B液等量混合，每液等量混合，每5ml的的A液和液和B液的混合液液的混合液中加入中加入2克水合三氯乙醛，克水合三氯乙醛，充分溶解摇匀，存放一天充分溶解摇匀，存放一天后使用。贮存液可较长久后使用。贮存液可较长久保存，染色液只能保存一保存，染色液只能保存一个月，在两周内使用效果个月，在两周内使用效果最好。最好。9遗传学实验医学宣教
5、（一）材料准备（一）材料准备（二）预处理（二）预处理（三）固定（三）固定（四）解离（四）解离（五）染色液和制片（五）染色液和制片（六）显微观察（六）显微观察10遗传学实验医学宣教蚕豆根尖：蚕豆根尖：选取新鲜无病斑的蚕豆干种选取新鲜无病斑的蚕豆干种子，经日晒后，放在烧杯内子，经日晒后，放在烧杯内清水浸泡一昼夜。种子吸水清水浸泡一昼夜。种子吸水膨胀后，放在搪瓷盘上，覆膨胀后，放在搪瓷盘上，覆盖双层纱布，盖双层纱布，20左右保湿左右保湿培养，待根长培养，待根长1-2cm时，于上时，于上午午9：0010：30或下午或下午14：0016：00剪下根尖备用。剪下根尖备用。11遗传学实验医学宣教0.05的秋
6、水仙碱水溶液处的秋水仙碱水溶液处理理 2 小时小时12遗传学实验医学宣教1.卡诺氏固定液卡诺氏固定液冰醋酸一份，无水酒精冰醋酸一份，无水酒精三份混合。三份混合。2.预处理的材料经蒸馏预处理的材料经蒸馏水冲洗干净后，用卡水冲洗干净后，用卡诺氏固定液在室温下诺氏固定液在室温下固定固定24小时，固定液小时，固定液量应为材料体积的量应为材料体积的15倍以上。倍以上。3份1份卡諾氏固定液13遗传学实验医学宣教 固定材料如暂不使用，可固定材料如暂不使用，可经经95酒精酒精80酒精酒精70酒精各半小时浸泡酒精各半小时浸泡转换，最后用转换，最后用70酒精置酒精置04冰箱保存半年。如冰箱保存半年。如保存时间太长
7、，需重新固保存时间太长，需重新固定后再用。定后再用。95%酒精80%酒精70%酒精70%酒精保存14遗传学实验医学宣教1.1N HCl配制：盐酸配制：盐酸83ml,用蒸馏水定容用蒸馏水定容1升升.2.取蚕豆根尖，放入取蚕豆根尖，放入1N HCl溶液中，在溶液中，在25下解下解离离30分钟左右。取出，用分钟左右。取出，用水漂洗三遍，置于载玻片水漂洗三遍，置于载玻片上。上。1N盐酸溶液15遗传学实验医学宣教 选取根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织选取根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，呈十字形的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，
8、呈十字形交叉盖在有根尖的载玻片上，用大拇指按压在载玻片的中央，交叉盖在有根尖的载玻片上，用大拇指按压在载玻片的中央，使根（茎）尖压成一簿层，然后将两载玻片分开，各滴一小使根（茎）尖压成一簿层，然后将两载玻片分开，各滴一小滴上述染色液进行染色，稍等片刻，盖上盖玻片，然后用一滴上述染色液进行染色，稍等片刻，盖上盖玻片，然后用一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。制手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。制好的片子若不能及时进行显微镜观察，可用矾士林临时封住好的片子若不能及
9、时进行显微镜观察，可用矾士林临时封住盖玻片四周。盖玻片四周。（六）制片16遗传学实验医学宣教1.取根尖一枚置载玻片中央2.吸去多余的水份4.用大母指按压3.二个玻片十字交叉17遗传学实验医学宣教6.放上盖玻片8.对准材料轻敲7.放上滤纸5.分开玻片加染色液18遗传学实验医学宣教l制备好的细胞学片子，制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台置于显微镜的载物台上，先用低倍镜上，先用低倍镜（1010）调焦观察，）调焦观察，寻找具有分裂相的细寻找具有分裂相的细胞后，再转换到高倍胞后，再转换到高倍镜（镜（1040）下观察。）下观察。19遗传学实验医学宣教l l1、极早前期 l2、早前期 l3、中前期l4、
10、晚前期 l5、中期 l6、后期l7、早末期 l8、中末期 l9、晚末期20遗传学实验医学宣教21遗传学实验医学宣教七 实验作业1.Make 1-2 slides containing every phase of mitosis.2.Draw the picture for every phase of cell mitosis,and describe the events that characterize each stage of mitosis.。22遗传学实验医学宣教23遗传学实验医学宣教二、二、各物种染色体的形态、结构和数目是相对稳定的。各物种染色体的形态、结构和数目是相对稳定的
11、。核型分析核型分析是研究一个物种细胞核内染色体的数目及是研究一个物种细胞核内染色体的数目及各染色体的形态特征，如对染色体的长度、着丝点位置、各染色体的形态特征，如对染色体的长度、着丝点位置、臂比和随体有无等进行观察臂比和随体有无等进行观察从而描述和阐明该生物的从而描述和阐明该生物的染色体组成染色体组成为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。究提供实验依据。细胞有丝分裂中期染色体细胞有丝分裂中期染色体具有较典型的特征且易于具有较典型的特征且易于计数，因而核型分析大都以这一分裂时期进行观察。计数，因而核型分析大都以这一分裂时期进行观察。24遗传学实验
12、医学宣教三、三、实验材料实验材料 onion 洋葱（洋葱（Alliums cepa,2n=16）barley barley 大麦（大麦（Hordeum sativum，2n=14）、）、broad bean 蚕豆（蚕豆（Vicia faba,2n=12）rye 黑麦黑麦（2n=14）maizemaize玉米（玉米（2n=202n=20）beetbeet甜菜（甜菜（2n=182n=18）cottoncotton斯特提棉（斯特提棉（2n=262n=26）25遗传学实验医学宣教蚕豆蚕豆玉米玉米大麦10um26遗传学实验医学宣教四、四、Experiment steps 实验步骤实验步骤(一一)、染色体
13、标本玻片的制作；、染色体标本玻片的制作；1.种子萌发和取材：种子萌发和取材：大麦等种子置于培养皿内的湿滤纸上，大麦等种子置于培养皿内的湿滤纸上，在在25（夏季作物（夏季作物30）恒温箱中培养，待根长至）恒温箱中培养，待根长至12厘米时切取。厘米时切取。2.预处理：预处理：幼根放在蒸馏水中，置幼根放在蒸馏水中，置04冰箱内处理冰箱内处理 20小小时；幼根用时；幼根用0.05%秋水仙碱溶液处理秋水仙碱溶液处理7小时。小时。3.固定：固定：经过预处理的材料用新配制的卡诺氏固定液固定经过预处理的材料用新配制的卡诺氏固定液固定24小时，然后换入小时，然后换入70%酒精中，置冰箱内备用（这三个过酒精中，置
14、冰箱内备用（这三个过程要在上一周进行）。程要在上一周进行）。4.解离：解离：取已固定的根尖数条，经蒸馏水冲洗后，加取已固定的根尖数条，经蒸馏水冲洗后，加1N盐盐酸，在酸，在60恒温水浴锅中解离恒温水浴锅中解离10分钟。分钟。27遗传学实验医学宣教5.染色和压片：染色和压片：水冲洗后的根尖置于载玻片上，用刀片水冲洗后的根尖置于载玻片上，用刀片切去根尖最前端切去根尖最前端0.50.5毫米的根冠和伸长区毫米的根冠和伸长区然后切取少然后切取少于于1 1毫米的分生组织，滴一滴改良苯酚品红染色液毫米的分生组织，滴一滴改良苯酚品红染色液半半分钟后盖上盖玻片，用手指按住盖玻片一角（手指下可分钟后盖上盖玻片，用
15、手指按住盖玻片一角（手指下可先放一滤纸）先放一滤纸）再用解剖针在材料上面垂直敲打盖玻片，再用解剖针在材料上面垂直敲打盖玻片，最后盖上滤纸用大拇指用力压片（最后盖上滤纸用大拇指用力压片（不可使盖玻片移不可使盖玻片移动！动！）。）。6.镜检和显微摄影技术：镜检和显微摄影技术：经镜检，寻找数目完整、重叠经镜检，寻找数目完整、重叠少、染色体特征明显的细胞少、染色体特征明显的细胞利用数码万能显微镜中进利用数码万能显微镜中进行摄影、图片保存和打印。行摄影、图片保存和打印。28遗传学实验医学宣教29遗传学实验医学宣教短臂的长度长臂的长度臂比%1002/1全部染色体的总长度度某染色体（臂）绝对长相对长度备注备
16、注 染色染色体类体类型型 臂臂比比 相对相对长度长度 长臂长臂 短臂短臂 全长全长放大相片长度（放大相片长度（mm）染色染色体序体序 号号 30遗传学实验医学宣教31遗传学实验医学宣教1.臂比（长臂臂比（长臂/短臂）短臂）形态特征形态特征1-1.71.71-3.03.01-7.0 7.01m 中着丝粒染色体中着丝粒染色体sm 近中着丝粒染色体近中着丝粒染色体st 近端着丝粒染色体近端着丝粒染色体t 端着丝粒染色体端着丝粒染色体10 m如蚕豆如蚕豆l具随体染色体（sat）用*标出。32遗传学实验医学宣教l蚕豆核型图蚕豆核型图33遗传学实验医学宣教 6.写出写出染色体核型公式染色体核型公式：如蚕豆
17、为：如蚕豆为2n=2m(SAT)+10t.7.按染色体的相对长度画出按染色体的相对长度画出染色体核型模式图染色体核型模式图。相相对对长长度度%8420248染色体序号染色体序号34遗传学实验医学宣教lSubmit the measurement data,caryogram,ideogram and karyotype formula of a plant,for example:2n=6m+4sm+4st+2b.35遗传学实验医学宣教 一、一、Experiment objective目的目的 学习花粉母细胞学习花粉母细胞涂抹制片技术涂抹制片技术，观察细，观察细胞胞减数分裂减数分裂时期染色体变
18、化规律及特征并绘时期染色体变化规律及特征并绘图。图。观察花蕾或花药长度与减数分裂时期的观察花蕾或花药长度与减数分裂时期的关系。关系。37遗传学实验医学宣教l 减数分裂是生物在性母细胞成熟形成配子过程中发减数分裂是生物在性母细胞成熟形成配子过程中发生的一种特殊有丝分裂，它包括连续两次的细胞分裂生的一种特殊有丝分裂，它包括连续两次的细胞分裂阶段，最终分裂为染色体数目减半的四个子细胞，从阶段，最终分裂为染色体数目减半的四个子细胞，从而发育为雌性或雄性配子（而发育为雌性或雄性配子（n）。l 由于植物花药取材容易，操作和鉴定比较方便，故由于植物花药取材容易，操作和鉴定比较方便，故一般都取用花粉母细胞作为
19、减数分裂制片材料。在生一般都取用花粉母细胞作为减数分裂制片材料。在生物发育的适宜时期取样、固定、压片等程序，便可在物发育的适宜时期取样、固定、压片等程序，便可在显微镜下观察到减数分裂过程中染色体的行为变化。显微镜下观察到减数分裂过程中染色体的行为变化。38遗传学实验医学宣教1细线期、2偶线期、3粗线期、4双线期、5终变期前期39遗传学实验医学宣教l中期 后期 末期40遗传学实验医学宣教前期 中期 后期 末期41遗传学实验医学宣教 lily百合（Oryza sativa 2n=24）gingko银杏（Ginkgo biboba 2n=24）pea豌豆（Pisum sativum 2n=14）pu
20、rple dayflower紫鸭趾草 （Commelina communis 2n=12）42遗传学实验医学宣教 多媒体显微演示系统、显微镜、电子天平、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、滤纸、标签纸、铅笔43遗传学实验医学宣教 苏木精、铁钾矾、丙酸、水合三氯乙醛、冰醋酸、无水酒精、丙酸、铁矾苏木精染色液，卡诺氏固定液（同实验一）44遗传学实验医学宣教（一）取材一）取材（二）制片（二）制片（三）显微镜观察（三）显微镜观察 45遗传学实验医学宣教（一）取材（一）取材（1）水稻：减数分裂期株型特征：水稻：减数分裂期株型特征：剑叶的叶枕距为剑叶的叶枕距为0左右，左右，幼穗和颖花为终长的幼穗和颖花为终长的1/
21、2时，时，早上早上8:0010:00采集水稻幼穗，进行固定采集水稻幼穗，进行固定（卡诺氏固定液）（卡诺氏固定液）1小时，保存在小时，保存在70酒精中。酒精中。（2）银杏花蕾：银杏花蕾：3月下旬当银杏进入减数分裂月下旬当银杏进入减数分裂时，采集整个花枝将整朵花蕾置于卡诺氏固定液时，采集整个花枝将整朵花蕾置于卡诺氏固定液固定固定1小时，然后转入小时，然后转入70乙醇保存。乙醇保存。46遗传学实验医学宣教（3）蚕豆花蕾）蚕豆花蕾在早春蚕豆现蕾后，于早上在早春蚕豆现蕾后，于早上8-10时，摘取茎顶幼时，摘取茎顶幼小花序，将周围小叶和苞叶去掉，留长约小花序，将周围小叶和苞叶去掉，留长约1mm 左右的花苞
22、，固定、保存。左右的花苞，固定、保存。47遗传学实验医学宣教（二）临时片（二）临时片和永久片和永久片制作制作:从小花中取出花药从小花中取出花药13 枚置于载玻片枚置于载玻片滴一滴醋酸洋滴一滴醋酸洋红溶液红溶液用镊子夹碎花药用镊子夹碎花药去尽肉眼可见残渣去尽肉眼可见残渣染色染色35分钟分钟盖上盖玻片盖上盖玻片在低倍镜下寻找花粉母细胞在低倍镜下寻找花粉母细胞高倍镜高倍镜下观察各分裂相细胞染色体的特征及变化规律下观察各分裂相细胞染色体的特征及变化规律.选择典型分裂相的临时片选择典型分裂相的临时片12张张在酒精灯火焰上缓在酒精灯火焰上缓缓烘干（不能沸腾！）缓烘干（不能沸腾！）将玻片放入液氮罐，在液氮表
23、面将玻片放入液氮罐，在液氮表面冷冻冷冻1分钟分钟取出玻片放在白纸上，手按盖玻片一边，用取出玻片放在白纸上，手按盖玻片一边，用刀片从另一边将盖玻片揭开置于白纸上（有材料的一面朝刀片从另一边将盖玻片揭开置于白纸上（有材料的一面朝上）上）滴一滴中性树胶在载玻片上的材料处滴一滴中性树胶在载玻片上的材料处原位盖上盖原位盖上盖玻片玻片树胶凝固后镜检。树胶凝固后镜检。48遗传学实验医学宣教（三）显微镜观察（三）显微镜观察 先在低倍镜下寻找具分裂相的花粉母先在低倍镜下寻找具分裂相的花粉母细胞，然后依次转换到高倍镜观察减数分细胞，然后依次转换到高倍镜观察减数分裂各个时期染色体的行为和形态特征。裂各个时期染色体的
24、行为和形态特征。49遗传学实验医学宣教水水稻稻减减数数分分裂裂过过程程50遗传学实验医学宣教1.Make 1-2 slides containing every phase of meiosis.2.Draw the picture of every phase for cell meiosis,and describe the events that characterize each stage of meiosis.3.Use various length flower bud as materials,calculate cell percentage of every phase of meiosis in 100 random cells seen in low power.According to the experiment data,try to narrate the relationship between the development of pollen mother cell and flower organ.4.Describe the characteristic of each phase in the field of view for meiosis.51遗传学实验医学宣教
