1、+引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒,也称丹氏颗粒。+我国的乙肝病毒感染率约60%-70%;乙肝表面抗原携带率约占总人口的7.18%。免疫学方法免疫学方法a)酶免疫法(ELISA)b)时间分辨荧光分析技术(TRFIA)c)胶体金法分子生物学方法分子生物学方法a)HBV-DNA法(PCR)b)bDNA法+目的:对乙肝血清标志物进行定性的分析+优点:简单、快速、稳定+缺点:敏感度相对较低;出现钩状效应(前带/后带)和受到交叉污染的可能性较大;不能够对乙肝病毒标志物实施动态观察;对低水平HBV感染标志物的漏检率相对较高。示踪剂:镧系元素流程:1.具有双功能基团的镧系元素对抗原或抗体进行标记2.通过时间
2、延迟将非特异性的荧光去除3.发生特异性结合时,抗原抗体复合物在可以增强液中发生解离,在特定的激发光的激发作用下发出一种特定波长的荧光,在固定的时间对特异性荧光进行检测即可意义:适用于急诊或手术前对HBV病毒进行定性检查,其主要优点在于检测速度较快、操作简单方便,对操作技术和检测环境的要求相对较低。胶体金:由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态。原理:胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合
3、,所以不影响蛋白质的生物特性。类型:免疫胶体金光镜染色法 免疫胶体金电镜染色法 胶体金免疫层析法 等+优点:检测速度相对较快,在取得血清的情况下,一般情况下在十分钟之内就可以对结果进行判读。+缺点:只能对乙肝病毒实施定性检测,准确率与酶联免疫吸附试验比较相对低,且对于弱阳性的表现度相对较差,造成弱阳性标本的漏读和误读的可能性相对较大,性价比跟准确度方面都要略逊于ELISA。+传统PCR+PCR-ELISA+实时定量PCRHVB-DNA法(法(PCR)+原理:探针杂交+方法:bDNA是人工合成的侧链DNA片段,每个侧链上都可以带标记物。在用于检测的微孔板上包被有一套人工合成的HBV-DNA特异性
4、核苷酸捕获探针,当HBV-DNA从细胞中释放出来时,被板上的捕获探针所捕获。另一套靶向延伸探针既能与捕获的HBV-DNA杂交,又能与预放大探针杂交。随后,放大探针与预放大探针杂交,形成bDNA复合物。标记有多个碱性磷酸酶的探针固定到该复合物上,与发光底物共同孵育,记录发光强度,并根据标准曲线求得HBV-DNA浓度。+意义:目标物不被扩增,但检测信号被放大,从而提高了灵敏度。bDNA法法(branched DNA)【1】胡晓丹,目前乙肝病毒不同临床检测方法的对照研究J.国际病毒学杂志,2015,Vol.22,supplement.142-143.【2】王健,闵福援,乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义J.中华检验医学杂志,2005,Vol.28,No.1.113-115.【3】张宝华,黄婷,乙型肝炎病毒检测方法的相关性分析J.现代检验医学杂志,2010,Vol.7,No.4.69-71.【4】王家杰,何庆明,刘佳文,李宝玲,李金红,乙型肝炎病毒标志物定量检测方法的评价J.国际检验医学杂志,2015,Vol.3,No.1.123-124.【5】魏来,乙型肝炎与丙型肝炎病毒感染临床检测的进展J.2015,Vol.28,No.6.657-659.-ThanksThanks-