1、 出血性疾出血性疾病病贫血症贫血症白细胞白细胞疾病疾病常见血液病常见血液病造血系统造血系统恶性肿瘤恶性肿瘤多发性骨髓瘤（MM）慢性髓系白血病（CML）急性髓系白血病（AML）慢性淋巴系白血病（CLL）急性淋巴系白血病（ALL）骨髓增殖性肿瘤（MPN）骨髓增生异常综合征（MDS）恶性血液病类型MICMMICM FAB形态学诊断(Morphology)：包括血液和骨髓形态学及组织化学染色。免疫学检查(Immunology)遗传学检查(Cytogenetics)分子生物学检查(Molecular)检测方法检测方法骨髓骨髓/血涂片血涂片骨髓活检骨髓活检骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构，相互补充相互验证相
2、互补充相互验证不能相互替代 血凝块：废物利用、骨髓活检的补充血凝块：废物利用、骨髓活检的补充铁粒幼红细胞定义铁粒幼红细胞定义四、细胞遗传学四、细胞遗传学人类人类23对染色体对染色体1950196019701980199020002010确定染色体数目=46发现Ph；发现+21各种显带技术出现；发现多数AL患者伴有染色体异常FISH出现；阐明某些染色体异常的分子学改变SKYCGHPCR技术FLT3-ITD(1996)c-KIT突变（1993）.芯片技术：cDNA arrayArray-CGH、SNP-array、测序技术的发展大量基因突变的发现：JAK2、NPM、CEBPA、PAX5、IKZF1
3、、FLT3、RUNX1、WT1、RAS、NOTCH1.新一代高通量测序技术；各种遗传学改变间的相互作用血液肿瘤遗传学研究的历史多数AML患者有非随机性染色体改变，包括易位、倒位、插入、缺失、扩增、等臂染色体等染色体异常在AML诊断、分型、预后评价、发病机制研究及靶向治疗药物研发方面有重要价值一些特殊的细胞遗传学异常在WHO分型建议中已被列为特殊亚型对不同细胞遗传学类型的血液肿瘤患者进行个体化治疗可以获得更好的疗效AML常见染色体异常t(8;21)t(15;17)10%8%inv(16)/t(16;16)11q23异常5-10%3-5%302045单一异常：45%2种异常：55%-5/5q-；-
4、7/7q-；8；-Y；+11；+13；+21;+223q26；del(9q)t(6;9)；t(9;22)等AML的WHO分型伴再现性遗传学异常的AML伴多系发育异常的AML继发于MDS；无MDS病史治疗相关性AML烷化剂相关；拓扑异构酶抑制剂相关；其它无法分类的AML髓细胞肉瘤Downs综合征相关AML伴再现性遗传学异常的AMLAML with t(8;21)(q22;q22)AML with inv(16)(p13.1q22)or t(16;16)APL with t(15;17)(q22;q12)AML with t(9;11)(p22;q23)AML with t(6;9)(p23;q3
5、4)AML with inv(3)(q21q26.2)or t(3;3)AML-M7 with t(1;22)(p13;q13)RUNX1-RUNX1T1CBFB-MYH11PML-RARAMLLT3-MLLDEK-NUP214RPN1-EVI1RBM15-MKL1?AML with mutated NPM1?AML with mutated CEBPA通常AML的诊断标准，原始细胞比例为20%，但如果t(8;21)、t(15;17)或inv(16)阳性，则不论原始细胞比例为多少，白血病诊断成立AML染色体异常的预后分级预后等级好中差核型类型t(8;21)、t(15;17)、inv(16)正常
6、、+8、+21、+22、del(9q)、del(7q)、t(9;11)(p13;q23)-5、del(5q)、-7、inv(3)、复杂异常、t(8;16)(p11;p13)、inv(3)(q21q26)、11q23异常（t(9;11)除外）、t(6;9)(p23;q34)等l核酸分子杂交技术荧光原位杂交（FISH）l 聚合酶链反应（PCR）技术实时荧光定量PCR、多重PCR技术 l 基因测序Sanger 测序法、二代测序技术荧光原位杂交(FISH)l 生命科学中的“钓鱼”技术l原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交l 目的：获得细胞内多条染色体或多种基因状态的信息荧光标记探
7、针探针变性样本DNA变性杂交荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）FISH检测BCR/ABL融合基因BCR/ABL 基因正常BCR/ABL基因融合9号22号双色单融合探针，检测染色体易位ablbcr聚合酶链反应PCR9572,dNTP,酶,Mg2+55按照上述步骤重复操作，PCR产物呈指数扩增模板DNA 扩增倍数T=2n(n:循环次数)Sanger 测序法DNA双脱氧链终止法测序各个平台的特点FISH平台PCR平台测序平台灵敏度百分之一万分之一十分之一精确度精确假阳性精确价格高低较高优点结果直观有商品化试剂盒对微小、复杂异常有优势可以检测
8、基因的表达量灵敏度高，监测MRD基因序列一目了然检测基因突变的金标准缺点成本高应用较短的cDNA探针时效率下降不能发现未知异常、染色体数目异常需知道确切的断裂位点耗时较长标本类型肝素钠抗凝骨髓3mlEDTA抗凝骨髓3mlEDTA抗凝骨髓3ml血液病分子诊断的意义补充MIC检查的不足检测相关微小残留病灶（MRD）发现新的亚型研究各类血液病发病机制MLL/ELLMLL/AFXMLL/AF1q MLL/AF1p PLZF/RARaMLL/AF6MLL/MLL（dupMLL）TLS/ERGTEL/PDGFRTEL/ABLSET/CANDEK/CANMLL/AF17E2A/HLFNPM/RARaAML1
9、/MDS1急性髓系白血病急髓相关突变检测FLT3-TKD，Fms样酪氨酸激酶3-TK区域点突变，13q12，预后不良多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤骨髓增殖性肿瘤2008年WHO 髓系肿瘤的分类方案1.急性髓系白血病2.骨髓增生异常综合症（MDS）3.骨髓增殖性肿瘤4.MDS/MPN5.伴有PDGFRA,PDGFRB和FGFR1异常的嗜酸性细胞增多性髓性肿瘤 慢性髓性白血病 真性红细胞增多症 特发性血小板增多症 原发性骨髓纤维化 慢性中性粒细胞白血病 慢性嗜酸细胞性白血病-没有另外分类 高嗜酸细胞综合症 肥大细胞病 MPN,未分类型MPN是以一系或多系髓系细胞增殖为主要特征的克隆性造血干细胞肿瘤，在骨髓细胞普遍增生的基础上有一个系列细胞尤其突出，呈持续不断的过度增殖。外周血一系或多系细胞增多。骨髓增殖性肿瘤骨髓增生异常综合征NCCN提及的MDS分子检测项目TET2突变，见于20%MDS，预后较好ASXL1突变，见于15%MDS，预后较差RUNX1突变、EZH2突变、ETV6突变，预后较差CBL突变、IDH2突变、U2AF1/U2AF35突变、SF3B1突变SRSF2突变、ZRSR2突变，预后较差，增加白血病转化率探索探索 希望希望THANKS!
