1、肿瘤临床分子诊断技术的应用进展（优选）肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制 肿瘤自身原因肿瘤自身原因 外因外因内因内因无限增殖无限增殖转移转移空间空间资源资源 免疫监控免疫监控 攘外攘外 安内安内同流和污同流和污视而不见视而不见 肿瘤免疫监控失活肿瘤免疫监控失活功能丧失功能丧失肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展 一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展Limitless replicativ
2、epotentialTissue invasion&metastasisSustainedangiogenesisInsensitivity toanti-growth signalsSelf-sufficiency ingrowth signalsEvadingapoptosis一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展Self-sufficiency in growth signalsAutocrine loopsOver-expression of receptorReceptor is always onDownstream
3、signals一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展 External triggers Intracellular triggers Death receptors Caspases Sensors(8,9)Executioners(3)Evading apoptosis一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展Insensitivity to antigrowth signals一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技
4、术的应用进展Sustained angiogenesis VEGF FGF1/2 Thrombospondin Thalidomide Avastin一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展Tissue invasion and metastases一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制1、肿瘤自身肿瘤自身肿瘤临床分子诊断技术的应用进展Limitless reproductive potentialHayflick hypothesisLimited number of doublingsTelomere mainte
5、nanceTelomeraseNot all tumor cells have this potential Tumor stem cells(1)免疫监视系统免疫监视系统要素要素 识别力识别力攻击力攻击力组成组成分工分工 快速反应快速反应特异反应特异反应 信息传递信息传递肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制2、免疫监控失调、免疫监控失调（1）、）、免疫监视系统免疫监视系统识别识别特异反应特异反应抗原递呈细胞抗原递呈细胞肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制2、免疫监控失调、免疫监控失调（1）、）、免疫监
6、视系统免疫监视系统攻击攻击效应细胞效应细胞肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制2、免疫监控失调、免疫监控失调（2）、）、免疫监视系统与肿瘤发生免疫监视系统与肿瘤发生证据证据体内细胞突变随时在发生，但肿瘤不是随时发生。体内细胞突变随时在发生，但肿瘤不是随时发生。免疫缺陷与肿瘤发生免疫缺陷与肿瘤发生免疫功能与肿瘤发展免疫功能与肿瘤发展肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制2、免疫监控失调、免疫监控失调EGFR 基因20外显子核苷酸序列检测图谱肿瘤临床分子诊断技术的应用进展即：研究基因本身及其突变体对不同个体药
7、物作用效应差异的影响，以此为平台指导合理用药，提高用药的安全性和有效性，避免不良反应，减少药物治疗的费用和风险。曲妥珠单抗/赫赛汀（1）、免疫监视系统Her-2阳性的乳腺癌患者对紫杉醇化疗的反应性明显高出HER-2阴性的患者。初步的分组研究表明,在满足：1、EGFR阴性，2、不吸烟或少吸烟，3、肺腺癌的条件中,EML4-ALK融合基因阳性率相对较高，可达到13%-23%。抗有丝分裂药物是化疗药物的重要组成部分，根据与微管的结合部位不同可分为三类：紫杉烷类（如紫杉醇、紫杉萜）；2、化疗药物治疗指导用药miR-181,imR-181a,imR-181b,imR-181c二、肿瘤的分子诊断内容二、肿
8、瘤的分子诊断内容术后游离DNA水平迅速下降至18ng/ml，并随病情的好转进一步下降。蛋白组学代表着对有机生物、器官和细胞器中所有蛋白的特性、分子量、结构和生物化疗、细胞功能加以明确与细胞外基质的黏附一、肿瘤发生发展的分子机制肿瘤临床分子诊断技术的应用进展MicroRNAs:potential biomarkers for cancer diagnosis,prognosis and targets for therapy.根据五个基因指纹RT-PCR检测的不同结果，用Kaplan-Meier法分析非小细胞肺癌患者的生存时间三、肿瘤治疗的分子监控（2）、）、免疫监视系统与肿瘤发生免疫监视系统与
9、肿瘤发生肿瘤监控失常原因肿瘤监控失常原因识别问题识别问题肿瘤自身肿瘤自身免疫细胞免疫细胞隐蔽抗原隐蔽抗原来源与正常细胞相同来源与正常细胞相同抗原递呈功能缺失抗原递呈功能缺失无视无视肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制2、免疫监控失调、免疫监控失调（2）、）、免疫监视系统与肿瘤发生免疫监视系统与肿瘤发生肿瘤监控失常原因肿瘤监控失常原因杀伤问题杀伤问题肿瘤自身肿瘤自身 免疫细胞免疫细胞杀伤免疫细胞杀伤免疫细胞抑制因子抑制因子功能异常功能异常抑制性免疫细胞抑制性免疫细胞肿瘤临床分子诊断技术的应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制一、肿瘤发生发展的分子机制2、
10、免疫监控失调、免疫监控失调肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容诊断预后评估判定治疗效果分子分子内容内容基因突变基因表达有无类型位置效应有无水平效应临床应用临床应用检测技术检测技术PCR基因测序蛋白芯片核酸杂交免疫化学肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容样本样本内容内容与遗传有关的基因突变检测技术检测技术PCR基因测序蛋白芯片基因测序免疫化学血液肿瘤组织血浆DNA变化血浆变中癌基因表达检测肿瘤标志物的检测肿瘤细胞的基因突变肿瘤细胞的基因表达肿瘤细胞的蛋白表达PCR肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿
11、瘤的分子诊断内容肿瘤标志物的检测肿瘤标志物的检测 1978年Herberman在美国国立癌症研究所召开的人类肿瘤免疫诊断会上提出的。由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关的物质,这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞膜上或体液中；不存在于正常成人组织而见于胚胎组织,或在肿瘤组织中含量超过正常含量。存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容肿瘤标志物的检测肿瘤标志物的检测理想的TM 特异性高，对肿瘤与非肿瘤鉴别的准确性可100%。敏感性高，能在极早期发现肿瘤的存在，不漏诊。在体液中的
12、浓度应与瘤体大小、临床分期密切相关，并可据此判断预后。半衰期短，可根据其水平的升降监测治疗效果及肿瘤是否复发或转移。检测方法灵敏可靠，操作简便，价格低廉。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容肿瘤标志物的检测肿瘤标志物的检测肿瘤标志物的测定：包括测定血液、尿液中蛋白质（包括多肽）、脂类，糖类、核酸物质。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学：引领21世纪生物科学1、蛋白检测 蛋白组学代表着对有机生物、器官和细胞器中所有蛋白的特性、分子量、结构和生物化疗、细胞功能加以明确 同时了解这些特性在空间、时间或不同生理状态下
13、的变化肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学相同的基因组不同的蛋白组肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学在分子水平上描述蛋白和在分子水平上描述蛋白和DNA的特性的特性是理清基因功能的关键是理清基因功能的关键基因组学蛋白组学DNAmRNAt-RNAt-RNAt-RNAt-RNA核糖体(.)蛋白CHOPO4(.)翻译后修饰XX具有活性的蛋白肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容2、蛋白组学肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学表面
14、增强激光解吸离子化表面增强激光解吸离子化(SELDI)化学化学表面表面 蛋白蛋白表达谱表达谱:疏水性H50 C9 链 H4 C16 链 阳离子WCX2-羧酸盐金属离子亲和层析金属螯合物(Cu,Ni,Zn,Ga,Mn,)常态NP20 SiO2阴离子SAX2 4O 铵盐PS-10 or PS-20蛋白耦合 抗体 抗原 受体 配体 DNA 蛋白生物生物表面表面 蛋白蛋白相互作用检测相互作用检测:肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容2、蛋白组学CA 125 and transvaginal ultrasoundSELDI技术筛选出2-微球蛋白、转铁蛋白、载脂蛋白A
15、1、甲状腺素运载蛋白二、肿瘤的分子诊断内容抗体 抗原肿瘤临床分子诊断技术的应用进展（4）肿瘤分子遗传学诊断二、肿瘤的分子诊断内容由于健康状态下少量衰老死亡(坏死或凋亡)细胞的DNA 的释放,健康人血液中存在一定量的游离DNA。6、多吃鸡、鱼，少量吃猪；肿瘤临床分子诊断技术的应用进展CYC19A1 芳香化酶肿瘤临床分子诊断技术的应用进展并进一步发现XPD 312SNP变异数目与化疗具有很好的相关性，即含有变异型等位基因的个数越多，其中位生存时间越短。胸腺嘧啶合成酶（TYMS）基因2R/3R（GC）检测269 例患者只根据手术前信息进行评估转录/染色体结构调节因子无论是单独使用、与标准化疗联合、还
16、是在标准化疗之后使用，赫赛汀均能提高治疗反应率、无病存活期以及整体存活期，毒副反应小，患者耐受性好，较好地保证了HER2 阳性乳腺癌妇女的生活质量。由于血清标本来源方便和非侵入性等优点，因此血液中游离DNA定量检测可预测受检者早期肿瘤的发生风险，从而采取有针对性的预防和治疗措施。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展筛选靶向治疗药物Hercepetin的使用者：分子靶向治疗药物Trastuzumab/Herceptin对具有HER-2基因扩增的患者具有良好的治疗效果，而对于17号染色体非整倍体导致的HER-2基因数目相应的增加及不扩增的患者效果不佳。（2）、基因突变与用药肿瘤临床分子诊断技术的应用进展
17、二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学 通过比较蛋白图谱可以容易地找出标志物 SELDI 技术比2D PAGE速度快，可重复性高 这一技术用以发现多种疾病的生物标志物，如卵巢癌、乳腺癌、前列腺和膀胱癌肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容2、蛋白组学肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学FDA于于2009年年9月月11日批准了日批准了OVA1 试验试验 首个FDA获准的基于蛋白水平基于蛋白水平的体外诊断多因素指数检测 首个FDA获准的用于卵巢癌术前和术后的预后检测预后检测 在血标本血标本中检测 5 个
18、蛋白个蛋白 SELDI技术筛选出2-微球蛋白、转铁蛋白、载脂蛋白微球蛋白、转铁蛋白、载脂蛋白A1、甲状腺素运载蛋白甲状腺素运载蛋白 CA125 预测良恶性良恶性可能肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容蛋白组学 将生物标志物的发现从实验室开拓到临床应用中从实验室开拓到临床应用中 基于一项前瞻性双盲的临床研究，纳入27个机构共516例患者 269 例患者只根据手术前信息手术前信息进行评估 247 例患者根据手术前信息手术前信息和OVA1结果结果进行评估 OVA1 检测能识别出额外的潜在恶性肿瘤潜在恶性肿瘤患者能够在盆腔包块中检查出是否罹患卵巢癌，并确定是否需要
19、手术治疗，帮助病人和医护人员确定属于什么类型的手术，以及应该由谁负责实施。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤的分子诊断内容三、肿瘤的分子诊断内容2、核酸检测 血浆DNA(plasma DNA)又被称为循环DNA(circulating DNA),是存在于循环血液中的细胞外DNA(cell-free DNA),它可以以DNA-蛋白质复合物的形式存在,也可以游离DNA 片断形式存在。由于健康状态下少量衰老死亡(坏死或凋亡)细胞的DNA 的释放,健康人血液中存在一定量的游离DNA。同时,由于健康状态下,循环DNA 的生成与清除处于动态平衡状态,因此对于健康人而言,血液中循环DNA 的水平能够维持
20、在一个比较恒定的低水平。循环DNA 能反映人体内新陈代谢的状况,是健康评判的一个重要指标。近年来的研究表明,人外周血液中的血浆循环DNA 量和质的改变与多种疾病(包括肿瘤、复合性严重外伤、器官移植、妊娠相关疾病、感染性疾病、器官衰竭等)关系密切,因此血浆DNA 作为一种无创性检测指标,有望成为某些疾病早期诊断、病程监测、疗效及预后评估的一种重要的分子标志物。（1）、血浆DNA含量检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（1）、血浆DNA含量检测血浆DNA浓度检测 研究发现，正常健康人群循环系统游离DNA平均约为7ng/ml；肿瘤患者循环系统游离DNA水平明
21、显升高，可达到29ng/ml；术后游离DNA水平迅速下降至18ng/ml，并随病情的好转进一步下降。这种游离DNA的升高可发生在肿瘤早期，出现于临床症状发生之前。由于血清标本来源方便和非侵入性等优点，因此血液中游离DNA定量检测可预测受检者早期肿瘤的发生风险，从而采取有针对性的预防和治疗措施。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（1）、血浆DNA含量检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（1）、血浆DNA含量检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容血浆血浆DNA基因检测基因检测检
22、测检测DNA甲基化甲基化 包括包括P16基因、基因、MGMT基因、基因、DAPK基因、基因、TMS1基因、基因、RASSF1A基因。基因。检测基因突变：检测基因突变：K-RAS基因突变、基因突变、P53基因突基因突变、变、FHit基因突变。基因突变。微卫星检测：微卫星检测：MSA-2,3,4,5,12,16检测检测（1）、血浆DNA含量检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容血浆血浆RNA检测检测 检测检测HER2/NEU以及以及HNrnp-b-1基因，文献基因，文献报道联合两种基因可以发现报道联合两种基因可以发现100%肺癌患者。肺癌患者。（1）、血浆D
23、NA含量检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（2）、基因组检测 科学家们预计，当完成了人类基因组项目之后科学家们预计，当完成了人类基因组项目之后应该能够发现一些与人体常见疾病和性状相关的应该能够发现一些与人体常见疾病和性状相关的遗传信息。但人类基因组图谱公布之后大家突然遗传信息。但人类基因组图谱公布之后大家突然发现，现实与预期的完全不同，科学家们居然一发现，现实与预期的完全不同，科学家们居然一无所获。但我们真的就不能从人类基因组图谱当无所获。但我们真的就不能从人类基因组图谱当中发现一点有价值的东西吗？中发现一点有价值的东西吗？肿瘤临床分子诊断技术的应用
24、进展研究报道：高表达的Topo 使用依托泊苷效果较好，低表达的Topo 对依托泊苷药物耐药。新一代靶向药物PLX4032可选择性抑制BRAF V600E突变，I期临床试验(87例患者)表明，PLX4032治疗BRAF V600E突变型黑色素瘤的有效率高达81%，可使目标病变体积缩小30%。生物表面 蛋白相互作用检测:SELDI 技术比2D PAGE速度快，可重复性高Downstream signals生物表面 蛋白相互作用检测:Cloned in 1995(Wooster et al.研究报道：高表达的Topo 使用依托泊苷效果较好，低表达的Topo 对依托泊苷药物耐药。肿瘤临床分子诊断技术的
25、应用进展一、肿瘤发生发展的分子机制目前XRCC1 基因中已识别的氨基酸突变中与铂类药物敏感性的研究主要集中在第194(Arg Trp)和第399(Arg Gln)密码子这两个位点。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展在刚刚落幕的第46届ASCO年会上，Bang 等报告了Crizotinib（PF02341006）治疗晚期NSCLC的临床试验结果，针对ALK基因的小分子抑制剂Crizotinib在期临床试验中就显示出良好疗效。非编码RNA曾经被认为是毫无意义的多余物not applicable25%30%的乳腺癌为 Her-2基因的扩增/过度表达。BMI计算方式为体重（公斤）身高（公尺）平方。肿瘤临床
26、分子诊断技术的应用进展三、肿瘤的分子诊断内容三、肿瘤的分子诊断内容4、基因组检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（2）、基因组检测Dual-specificity phosphatase 6(DUSP6),monocyte-to-macrophage differentiation associated protein(MMD),signal transducer and activator of transcription 1(STAT1),v-erb-b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene h
27、omolog 3(ERBB3),lymphocyte-specific protein tyrosine kinase(LCK).结论结论五个基因指纹与非小细胞肺癌的无复发生存期和总生存期密切相关肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤的分子诊断内容三、肿瘤的分子诊断内容4、基因组检测根据五个基因指纹根据五个基因指纹RT-PCR检测的不同结检测的不同结果，用果，用Kaplan-Meier法分析非小细胞肺法分析非小细胞肺癌患者的生存时间癌患者的生存时间 Overall survival and relapse-free survival are shown for the 101 patients
28、 with NSCLC(Panel A and Panel B,respectively)and for the 59 patients with stage I or II disease(Panel C and Panel D,respectively).Overall survival is also shown for the independent cohort of 60 patients(Panel E),for the 42 patients in this cohortwho had stage I or II disease(Panel F),and for the 86
29、patients described in an independent set of published NSCLC microarray data10(Panel G).肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容4、基因组检测70 个预后相关基因表达谱个预后相关基因表达谱监督分析监督分析vant Veer et al.,Nature 415,p.530-536,200270 个与预后显著相关的基因肿瘤标本肿瘤临床分子诊断技术的应用进展 细胞增殖 血管新生 与细胞外基质的黏附 局部侵犯 进入血管内、存活、外渗 细胞增殖 血管新生 与细胞外基质的黏附 未知功能的
30、基因(25)70 个预后相关基因个预后相关基因与肿瘤细胞生物学各个方面均有关与肿瘤细胞生物学各个方面均有关肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容4、基因组检测良好预后组患者没有一例复发MammaPrint:良好预后组(n=23)不良预后组(n=144)Straver M et al,Brit Cancer Res Treat 2009如何评估乳腺癌患者的复发风险传统病理学标准传统病理学标准Oncotype DX基因组学时代的基因组学时代的新工具新工具年龄肿瘤大小淋巴结状态ER/PRHER2肿瘤分期辅助化疗基于电脑模式RS=+0.47 x HER2 指数指数-
31、0.34 x ER 指数指数+1.04 x 细胞增殖指数细胞增殖指数+0.10 x 细胞侵润指数细胞侵润指数+0.05 x CD68-0.08 x GSTM1-0.07 x BAG1细胞增殖细胞增殖Ki-67STK15SurvivinCyclin B1MYBL2雌激素雌激素ERPRBcl2SCUBE2细胞侵润细胞侵润Stromelysin 3Cathepsin L2HER2GRB7HER2BAG1GSTM1参考基因Beta-actinGAPDHRPLPOGUSTFRCCD68Paik et al,NEJM 2004;351:2817-2616个肿瘤基因和个肿瘤基因和5个参考基因构成了个参考基因
32、构成了Oncotype DX基因组，根据这基因组，根据这些基因的表达情况计算复发指数：些基因的表达情况计算复发指数：Oncotype DX 21-基因复发指数基因复发指数肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（2）、基因组检测 低复发指数（RS）与最小化疗获益相关；高复发指数（RS）与较好的化疗获益相关。Oncotype DX复发指数提供了简洁、定量的个体预后信息，是具有统计学意义、与患者年龄、肿瘤大小和肿与患者年龄、肿瘤大小和肿瘤分期分级无关的独立指标瘤分期分级无关的独立指标。Oncotype DX肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿
33、瘤的分子诊断内容（3）、microRNA 检检测测非编码RNA曾经被认为是毫无意义的多余物 tRNA rRNA snRNA tmRNA Rnase P RNA vRNAs gRNAs MRP RNA SRP RNAs 端粒酶RNA 转录/染色体结构调节因子 转录调节因子 蛋白功能调节因子 RNA/蛋白定位调节因子RNA 转录 调节RNAmiRNAsiRNApiRNA反义 RNA编码蛋白的mRNA 非编码 RNA 转录核仁小RNAs管家 RNAs 非编码非编码-RNA在复杂的基因组学中起重要作用在复杂的基因组学中起重要作用 microRNA（miRNA）是长度在1825个核苷酸左右的内源性非编码
34、小分子RNA。miRNA在进化上高度保守，具有转录后基因调控功能。它由基因组DNA编码，在RNA聚合酶II的作用下被转录。这些小分子通过RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex,RISC）靶向到达mRNA，进而行使阻遏翻译或引导酶切的功能。最近有研究表明，miRNA具有多种生物学功能，如调节细胞发育、分化、增殖、凋亡等。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容MiRNA生物合成基本过程 MiRNA调控基因表达两种机制microRNAs肿瘤形成肿瘤
35、形成诊断诊断 预后预后miR-9神经母细胞瘤miR-10b乳腺癌miR-15,miR-15a白血病，垂体瘤miR-16,miR-16-1白血病，垂体瘤miR-17-5p,miR-17-92肺癌，淋巴瘤miR-20a淋巴瘤，肺癌miR-21乳腺癌，胆管癌，头颈肿瘤，白血病胰腺癌miR-29,miR-29b白血病，胆管癌miR-31结直肠癌miR-34a胰腺癌神经母细胞瘤miR-96结直肠癌miR-98头颈部肿瘤miR-103胰腺癌miR-107白血病，胰腺癌miR-125a,miR-125b神经母细胞瘤，乳腺癌miR-128胶质瘤miR-133b结直肠癌miR-135b结直肠癌miR-143结肠
36、癌miR-145乳腺癌，结直肠癌miR-146甲状腺癌microRNAs肿瘤形成肿瘤形成 诊断诊断 预后预后miR-155,has-miR-155乳腺癌，白血病，胰腺癌肺癌miR-181,imR-181a,imR-181b,imR-181c白血病，胶质瘤，甲状腺癌miR-183结直肠癌miR-184神经母细胞瘤miR-193胃癌miR-196a-2胰腺癌miR-221胶质瘤，甲状腺癌胰腺癌miR-222甲状腺癌miR-223白血病miR-301胰腺癌miR-376胰腺癌let-7,let-7a,let-7a-1,has-let-7a-2,let-7a-3肺癌，结肠癌肺癌Cho WC.Micro
37、RNAs:potential biomarkers for cancer diagnosis,prognosis and targets for therapy.Int J Biochem Cell Biol 2010.Cho WC.OncomiRs:the discovery and progress of microRNAs in cancers.Mol Cancer 2007;6:60.肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤的分子诊断内容三、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断BRCA
38、1 and BRCA2 are human genes that belong to a class of genes known as tumor suppressors.In normal cells,BRCA1 and BRCA2 help ensure the stability of the cells genetic material(DNA)and help prevent uncontrolled cell growth.Mutation of these genes has been linked to the development of hereditary breast
39、 and ovarian cancer.The names BRCA1 and BRCA2 stand for breast cancer susceptibility gene 1 and breast cancer susceptibility gene 2,respectively.肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断Cloned in 1995(Wooster et al.)Mapped to chromosome 13q12-1310,254 kb(3,418 aa)27 exonsCloned in 1995(Woost
40、er et al.)Mapped to chromosome 13q12-1310,254 kb(3,418 aa)27 exons肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断Type of Cancer General Population That Will Develop Disease People With BRCA1 Mutation Who Will Develop Disease People With BRCA2 Mutati
41、on Who Will Develop Disease Breast 12.5%55 85%33 86%Ovarian 1.43%28 44%10 30%Prostate 4 6%12 18%12 18%Male breast cancer Less than 1%6%4 14%Pancreatic 0.6%not applicable 6 7%肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断 Screening for Breast Cancer
42、 Monthly breast self-exam Clinical breast exam every 6 months 25 Annual Mammogram 25,Bi-annual 50 Discuss+/-of prophylactic mastectomy with MD Screening for Ovarian Cancer At least annual rectovaginal pelvic exam CA 125 and transvaginal ultrasound Prophylactic bilateral oophorectomy by age 35肿瘤临床分子诊
43、断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断乳腺癌基因检测的意义乳腺癌基因检测的意义降低风险，安全更放心保乳手术的术式选择：BRCA突变携带者乳腺癌复发或对侧乳腺癌风险可高达70%-80%，因此基因突变携带者不宜做保乳手术，还是以乳腺切除术为好。某些妇女可预防切除另一侧乳腺。关心自己，更关爱家人遗传性乳腺癌并非不可预知，关键在于加强监测、早期诊断、早期治疗。如果检出BRCA突变，可尽早采取有效的防治措施，降低癌症危险度，保障健康人生，同时，可以告知家族成员接
44、受BRCA检测，了解自身癌症风险。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容（4）肿瘤分子遗传学诊断乳腺癌遗传检测适宜人群乳腺癌遗传检测适宜人群(如果有以下因素，强烈建议如果有以下因素，强烈建议接受乳腺癌接受乳腺癌BRCA检查检查)一个或多个直系亲属有乳腺癌史，如母亲或姐妹 家族成员里有早发乳腺癌患者，发病年龄早于40岁 家族成员里两代以上出现乳腺癌患者 家族成员有双侧乳腺癌患者 家族成员里有卵巢癌患者 家族成员有男性成员乳腺癌患者 一个或多个家族成员携带BRCA基因突变，即遗传检测阳性 肿瘤临床分子诊断技术的应用进展二、肿瘤的分子诊断内容二、肿瘤的分子诊断内容
45、9种预防癌症的生活方式种预防癌症的生活方式1、盯住你的身体质量指数BMI：亚洲人最好将身体质量指数（BMI）控制在18.5至22.9之间。BMI计算方式为体重（公斤）身高（公尺）平方。2、每天流汗30分钟：这是最经济实惠的防癌方法。运动可以调整血液中睾固酮与雌激素，保护女性对抗与荷尔蒙相关的癌症。3、喝绿茶或咖啡：绿茶含有儿茶素及维生素A、C等抗氧化剂因此有防癌功效，咖啡也可以降低某些癌症发生率。4、新鲜蔬果：建议青少年及成年人，应每天摄食9份蔬果。蔬菜类1份约为生重100公克，水果类约为150公克。5、跳开脂肪诱惑：美国国家科学院报告指出，所有饮食构成要素中，脂肪与癌症关系最强烈，特别是乳癌
46、、大肠癌。6、多吃鸡、鱼，少量吃猪；戒烟、戒酒、戒槟榔7、少盐、不喝含糖饮料：每天摄取的盐不超过6公克，少喝含糖分饮料，喝白开水最理想，天然果汁每天不超过150，并且不吃发霉的谷类及豆类。8、保持轻松的情绪减少压力：心情郁卒容易诱发癌症，许多罹癌的人回顾发病前两、三年，常是身心处于压力的状态。9、喂母乳：建议母亲至少喂6个月母乳。研究指出，喝母乳的宝宝将来罹患血癌风险比较低，妈妈则可得到降低乳癌风险的好处。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤治疗的分子监控三、肿瘤治疗的分子监控1、靶向治疗、靶向治疗 随着人类基因组学、药物基因组学及肿瘤分子生物学随着人类基因组学、药物基因组学及肿瘤分子生物学
47、研究的不断深入和发展，肿瘤治疗性药物的开发从传统的广研究的不断深入和发展，肿瘤治疗性药物的开发从传统的广谱药向特异性更强的靶向药发展。谱药向特异性更强的靶向药发展。与此同时，传统的标准治疗、同病同治也正逐渐向个与此同时，传统的标准治疗、同病同治也正逐渐向个体化治疗转变。个体化治疗已经成为肿瘤临床治疗的发展方体化治疗转变。个体化治疗已经成为肿瘤临床治疗的发展方向和最有效的手段。向和最有效的手段。大量的临床研究和试验结果表明：特异肿瘤分子标志物大量的临床研究和试验结果表明：特异肿瘤分子标志物（靶标）是识别患者个体差异的重要依据，实现对这些肿瘤（靶标）是识别患者个体差异的重要依据，实现对这些肿瘤靶标
48、的检测是个体化治疗的前提和基础。靶标的检测是个体化治疗的前提和基础。对癌症患者检测相关基因的表达状态，已成为靶向治疗对癌症患者检测相关基因的表达状态，已成为靶向治疗药物治疗肿瘤的必要前提。药物治疗肿瘤的必要前提。肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤治疗的分子监控三、肿瘤治疗的分子监控1、靶向治疗、靶向治疗肿瘤种类肿瘤种类靶向药物靶向药物检测基因检测基因检测方法检测方法非小细胞非小细胞肺癌肺癌易瑞沙（吉非替易瑞沙（吉非替尼）尼）特罗凯（厄洛替特罗凯（厄洛替尼）尼）EGFRK-RASBRAFALK基因测序突变基因测序突变大肠癌大肠癌西妥昔单抗西妥昔单抗/爱必爱必妥妥 K-RASBRAF基因测序突
49、变基因测序突变乳腺癌乳腺癌曲妥珠单抗曲妥珠单抗/赫赛赫赛汀汀 HER2 FISHFISH检测基因含量检测基因含量黑色素瘤黑色素瘤PLX4032 BRAF（v600e)基因测序突变基因测序突变胃间质瘤胃间质瘤伊马替尼伊马替尼/格列卫格列卫 c-kit 基因测序突变以及基基因测序突变以及基因检测表达因检测表达肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤治疗的分子监控三、肿瘤治疗的分子监控非小细胞肺癌靶向治疗敏感性基因检测非小细胞肺癌靶向治疗敏感性基因检测肿瘤临床分子诊断技术的应用进展三、肿瘤治疗的分子监控三、肿瘤治疗的分子监控 临床试验表明易瑞沙和特罗凯仅对临床试验表明易瑞沙和特罗凯仅对10-30%10
50、-30%的的NSCLCNSCLC病人有显著疗效。研究发现病人有显著疗效。研究发现EGFREGFR基因基因突变与突变与NSCLCNSCLC靶向治疗的疗效具有相关性，绝靶向治疗的疗效具有相关性，绝大多数携带大多数携带EGFREGFR基因突变的病人疗效显著。基因突变的病人疗效显著。突变可以增强肿瘤细胞对突变可以增强肿瘤细胞对TKITKI的敏感性，并的敏感性，并且可作为且可作为TKITKI治疗的有效预测指标。因此，检治疗的有效预测指标。因此，检测测EGFREGFR基因突变对于指导基因突变对于指导NSCLCNSCLC病人临床用药病人临床用药具有重要的参考价值。具有重要的参考价值。20102010年年NC
