1、细菌感染的检查方法和防治原则一、掌握掌握病原菌的常规分离与鉴定方法原则和常用的检测细菌抗原的方法。人工自动免疫和人工被动免疫的概念。常用生物制品的概念和特点。细菌标本的采集与送检的主要原则。二、熟悉二、熟悉抗菌药物的主要作用机制。三、了解三、了解 临床感染性疾病用药的基本原则及检测细菌对药物敏感性的常用方法。目的要求目的要求2细菌感染的检查方法和防治原则第一节 细菌感染的诊断3细菌感染的检查方法和防治原则病原菌感病原菌感染的诊断染的诊断检测病原菌及其检测病原菌及其Ag产物或核酸产物或核酸 4细菌感染的检查方法和防治原则一、病原菌检测1.标本的采集标本的采集疾病种类不同采集不同的标本疾病种类不同
2、采集不同的标本注意无菌操作注意无菌操作,严防标本污染严防标本污染抗菌药物应用之前抗菌药物应用之前尽快送检尽快送检,特殊要求标本要特殊处理特殊要求标本要特殊处理标本作好标记标本作好标记,认真填写化验单认真填写化验单(6)正确的包装正确的包装、运输和保存运输和保存 5细菌感染的检查方法和防治原则6细菌感染的检查方法和防治原则 标标 本本直接检查直接检查 涂片涂片Gram染色染色 初报初报Ag检测检测 分离培养分离培养直接药敏试验直接药敏试验初初报报观察挑选可疑菌观察挑选可疑菌落落药敏试验药敏试验报告报告 纯培养纯培养生化反应生化反应培养特性培养特性血清学鉴定血清学鉴定 报告报告动物实验动物实验分子
3、生物学检查分子生物学检查报告报告7细菌感染的检查方法和防治原则(1)细菌形态结构检查细菌形态结构检查显微镜放大法显微镜放大法普通光学显微镜普通光学显微镜 电子显微镜电子显微镜 暗视野显微镜暗视野显微镜 相差显微镜相差显微镜 荧光显微镜荧光显微镜 同焦点显微镜同焦点显微镜3.检验方法检验方法染色法染色法 单染色法单染色法、革兰染色法革兰染色法 抗酸染色法抗酸染色法、特殊特殊 结结 构构 染色法染色法、异染颗粒染色法、异染颗粒染色法、细胞壁染色法细胞壁染色法8细菌感染的检查方法和防治原则9细菌感染的检查方法和防治原则单单 染染 法法只显示细菌的形态与排列只显示细菌的形态与排列复复 染染 法法可观察
4、细菌的形态、排列及其染色性可观察细菌的形态、排列及其染色性革兰革兰染色（染色（Gram Gram stain)stain)抗酸抗酸染色（染色（Acid-fast stain)Acid-fast stain)特殊染色法特殊染色法荚膜染色、芽胞染色、荚膜染色、芽胞染色、鞭毛染色、异染颗粒鞭毛染色、异染颗粒染色法10细菌感染的检查方法和防治原则脑膜炎奈瑟菌（革兰染色）脑膜炎奈瑟菌（革兰染色）结核分枝杆菌（抗酸染色）结核分枝杆菌（抗酸染色）11细菌感染的检查方法和防治原则液体培养基：液体培养基：增菌培养增菌培养半固体培养基：半固体培养基：查动力或保存菌种查动力或保存菌种固体培养基：固体培养基：平板用于
5、分离培养平板用于分离培养 斜面用于纯培养或保存菌种斜面用于纯培养或保存菌种12细菌感染的检查方法和防治原则糖发酵试验糖发酵试验VPVP试验（试验（ViVi）甲基红试验（甲基红试验（M M）枸橼酸盐利用试验（枸橼酸盐利用试验（C C）靛基质（吲哚）试验（靛基质（吲哚）试验（I I）硫化氢试验硫化氢试验尿素分解试验尿素分解试验13细菌感染的检查方法和防治原则已知抗体（抗血清）已知抗体（抗血清）待检抗原待检抗原（未知菌）（未知菌）直接法直接法玻片凝集试验（玻片凝集试验（定性试验定性试验）14细菌感染的检查方法和防治原则主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性
6、等15细菌感染的检查方法和防治原则（1 1）沉淀反应（）沉淀反应（precipitationprecipitation）可溶性抗原（细菌可溶性抗原、可溶性抗原（细菌可溶性抗原、免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，液等）与相应抗体结合，形成不形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。疫电泳、免疫比浊法等。17细菌感染的检查方
7、法和防治原则（2 2）协同凝集：用）协同凝集：用SPASPA测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌可溶性抗原作早期诊断。杆菌可溶性抗原作早期诊断。（3 3）免疫荧光法：志贺菌荧光）免疫荧光法：志贺菌荧光AbAb培养基培养基+粪便标本粪便标本 荧光球。荧光球。（4 4）酶 免 疫 测 定：）酶 免 疫 测 定：ELISAELISA测淋球菌、肠道菌测淋球菌、肠道菌抗原检测。抗原检测。（5 5）PCRPCR测细菌核酸测细菌核酸18细菌感染的检查方法和防治原则标本：标本：双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高清
8、中抗体效价升高44倍者方有意义倍者方有意义种类：种类：凝集试验：凝集试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等沉淀试验：沉淀试验：梅毒梅毒VDRLVDRL、RPRRPR试验等试验等中和试验：中和试验：抗抗“O”“O”试验等试验等补体结合试验：补体结合试验：Q Q热柯克斯体抗体检测等热柯克斯体抗体检测等原理：原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。的辅助诊断。19细菌感染的检查方法和防治原则补体结
9、合试验：补体结合试验：诊断诊断Q Q热；热；中和试验：中和试验：诊断链球菌后风湿热的抗诊断链球菌后风湿热的抗O O试验试验 链球菌溶血素链球菌溶血素O+SRBCO+SRBC溶血（毒性）溶血（毒性）病人血清病人血清+链球菌溶血素链球菌溶血素O+SRBCO+SRBC不溶血（中和）不溶血（中和）ELISA:ELISA:间接法查病人血清中病原体抗体（间接法查病人血清中病原体抗体（HBVHBV）；）；双抗体夹心法测病原体抗原（双抗体夹心法测病原体抗原（HBVHBV）。）。20细菌感染的检查方法和防治原则一、人工主动免疫一、人工主动免疫(artificial active immunization)(ar
10、tificial active immunization)1.1.疫苗疫苗:（1 1）死）死疫苗疫苗(killed vaccine)(killed vaccine)如白百破、伤寒、流脑、如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。可激发体液免疫应答乙脑、流感、钩端螺旋体等。可激发体液免疫应答(HI)(HI)，安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。重）。（2 2）活疫苗（活疫苗（living vaccineliving vaccine）如如BCGBCG、鼠疫、炭疽、脊、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。可激发髓灰质炎和麻疹
11、疫苗等。可激发HIHI、CMICMI；多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。，接种后发病。联合疫苗在试用中。（3 3）基因工程疫苗：）基因工程疫苗：目的基因目的基因 原核或真核细胞原核或真核细胞 基因产物基因产物 （如乙肝疫苗）（如乙肝疫苗）导入导入 第二节细菌感染的特异性预防第二节细菌感染的特异性预防21细菌感染的检查方法和防治原则（4 4）重组载体疫苗：）重组载体疫苗：蛋白质抗原基因蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌减毒的病毒或细菌 基因整合基因整合 基因产物基因产物 疫苗疫苗（5 5）合成疫苗：）合成疫苗
12、：根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。缺点是免疫原性弱、只激发缺点是免疫原性弱、只激发B B细胞引起细胞引起HIHI，因为抗，因为抗病毒依赖病毒依赖CMICMI）。）。转入转入 培养培养 表达表达22细菌感染的检查方法和防治原则（6 6）亚单位疫苗：）亚单位疫苗：除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。如脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌表面的特异性多糖如脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌表面的特异性多糖+吸吸附剂制成疫苗（不含类脂、无
13、毒）附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、乙肝疫、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。在的致癌作用。（7 7）DNADNA疫苗：疫苗：即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种核酸即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的杀伤功能的T T细胞，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫细胞，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。引起的传染。23细菌感染的检查方法和防治原则（8 8）转基因植物疫苗：）转
14、基因植物疫苗：将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。（9 9）治疗性疫苗：）治疗性疫苗：葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。用，后者是打破免疫耐受。（1010）类毒素：）类毒素：细菌外毒素细菌外毒素+0.3%+0.3%0.4%0.4
15、%甲醛处理后甲醛处理后 毒性消失毒性消失,保留抗原性的生物制剂，如白百破疫苗保留抗原性的生物制剂，如白百破疫苗.24细菌感染的检查方法和防治原则1.1.抗毒素抗毒素(antitoxin)(antitoxin)2.2.抗菌血清（抗菌血清（antiseraantisera）3.3.丙球丙球4.4.其他免疫制剂（其他免疫制剂（IFN-IFN-、IFN-IFN-、ILIL、CSFCSF、LAKLAK细胞）。细胞）。(二二)人工被动免疫人工被动免疫25细菌感染的检查方法和防治原则（一）抗菌药物的种类（一）抗菌药物的种类:1.1.按生物来源分类：按生物来源分类：(细菌产多细菌产多粘菌素和杆菌肽、真菌产青霉
16、粘菌素和杆菌肽、真菌产青霉素和头孢菌素等、放线菌产链素和头孢菌素等、放线菌产链霉素和红霉素等）霉素和红霉素等）2.2.按化学结构和性质分类：（按化学结构和性质分类：（抗菌药物的主要作用机制）抗菌药物的主要作用机制）3.3.抗菌药物的主要作用机制抗菌药物的主要作用机制三、细菌感染的治疗三、细菌感染的治疗26细菌感染的检查方法和防治原则 细菌胞质膜上有青霉细菌胞质膜上有青霉素结合蛋白（素结合蛋白（penicillin penicillin binding proteinsbinding proteins，PBPPBP），），PBPPBP既是青霉素受既是青霉素受体，又具有酶活性（转肽体，又具有酶活性
17、（转肽酶）。青霉素酶）。青霉素-内酰胺内酰胺环的酰胺键打开，竞争性环的酰胺键打开，竞争性地与转肽酶结合，阻止了地与转肽酶结合，阻止了转肽酶在合成肽聚糖中的转肽酶在合成肽聚糖中的作用，而不能合成菌细胞作用，而不能合成菌细胞壁，导致细菌死亡。壁，导致细菌死亡。（1 1）影响细胞壁的合成）影响细胞壁的合成27细菌感染的检查方法和防治原则 多粘菌素使类脂质膜的分子排列改变，胞多粘菌素使类脂质膜的分子排列改变，胞膜被分层裂开，胞质外漏，细菌死亡；膜被分层裂开，胞质外漏，细菌死亡；两性霉素两性霉素B B可与真菌胞膜上固醇类结合，破可与真菌胞膜上固醇类结合，破坏膜结构而杀菌但对细菌无效（细菌无固醇成坏膜结构而杀菌但对细菌无效（细菌无固醇成分）。分）。（2 2）影响细胞膜功能）影响细胞膜功能28细菌感染的检查方法和防治原则（3 3）影响蛋白质合成）影响蛋白质合成29细菌感染的检查方法和防治原则（4 4）影响核酸代谢的药物）影响核酸代谢的药物30细菌感染的检查方法和防治原则
