1、会自己发光的转基因树一、获取目的基因一、获取目的基因大肠杆菌基因组文库基因组文库部分基因文库部分基因文库基因文库基因文库一、获取目的基因一、获取目的基因方法一：从基因文库中获取方法二：利用利用PCRPCR技术扩增技术扩增利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因DNA双链复制双链复制模板、模板、原料、原料、酶、酶、能量能量引物引物原理：原理：条件：条件：Taq酶酶一、获取目的基因一、获取目的基因方法一：从基因文库中获取方法二：利用利用PCRPCR技术扩增获取技术扩增获取方法三：人工合成1、利用PCR技术扩增的原理是什么？2、实现PCR技术需要什么条件？3、利用PCR技术扩增与体内DN
2、A复制有何区别？（尝试从酶的角度进行分析）利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因1、利用PCR技术扩增的原理是什么？2、实现PCR技术需要什么条件？3、利用PCR技术扩增与体内DNA复制有何区别？（尝试从酶的角度进行分析）DNA双链复制模板、模板、原料、原料、酶、酶、能量能量（1）在利用PCR技术扩增过程中是高温解旋不需要DNA解旋酶。（2）在复制过程中需要的是耐高温的热稳定性聚合酶（Taq酶）【思考】二、构建基因表达载体二、构建基因表达载体【思考思考】（限时（限时2 2分钟）分钟）1 1、为什么要构建基因表达载体？、为什么要构建基因表达载体？2 2、构建好的基因表达载体包括哪些
3、结构？、构建好的基因表达载体包括哪些结构？3 3、启动子有什么作用？、启动子有什么作用？4 4、标记基因有什么作用？、标记基因有什么作用？（核心）（核心）质粒质粒目的基因目的基因限制酶限制酶DNA连接酶连接酶二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建【基本过程】利用所给的质粒和含利用所给的质粒和含发光基因的片段，构建发光基因的片段，构建发光基因表达载体发光基因表达载体（限时（限时5分钟）分钟）1 1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只用一种酶切割会出现什么弊端？用一种酶切割会出现什么弊端？2 2、能不能用两种不同的酶切割？、能不能用
4、两种不同的酶切割？3 3、请讨论并制定一个最佳构建方案、请讨论并制定一个最佳构建方案【展示分享】1 1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只用一种酶切割会出现什么弊端？用一种酶切割会出现什么弊端？2 2、能不能用两种不同的酶切割？、能不能用两种不同的酶切割？3 3、请讨论并制定一个最佳构建方案、请讨论并制定一个最佳构建方案 各共同体成员要积极参与、协同合作。要确定好展示各共同体成员要积极参与、协同合作。要确定好展示者，展示者声音要洪亮，语言表达要简洁、清晰。者，展示者声音要洪亮，语言表达要简洁、清晰。双酶切的优点：双酶切的优点：1.1.
5、防止目的基因与运载体反向连接防止目的基因与运载体反向连接2.2.防止防止运载体和目的基因的自身环化运载体和目的基因的自身环化 【小结小结】构建基因表达载体的注意事项：构建基因表达载体的注意事项：1、要使用同种限制酶切割，使质粒和载体形成相同的粘性末端。3、防止质粒和载体反向连接2、目的基因应插在启动子和终止子之间三、导入受体细胞三、导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法受体细胞【课前预习成果展示课前预习成果展示】三、导入受体细胞三、导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2+处理形成感受态细胞受体细胞体细胞受精卵原核细胞发光基因发光基因
6、三、目的基因导入受体细胞三、目的基因导入受体细胞农杆菌转化法：农杆菌转化法：构建基因表达载体构建基因表达载体导入植物细胞导入植物细胞原理：1、农杆菌对植物具有感染能力。2、T-DNA易整合到受体细胞的染色体DNA上。四、目的基因检测与鉴定四、目的基因检测与鉴定翻翻译译转转录录RNARNA蛋白质蛋白质DNADNA导入检测导入检测转录检测转录检测翻译检测翻译检测个体水平检测个体水平检测分子水平检测分子水平检测功能性检测四、目的基因检测与鉴定四、目的基因检测与鉴定翻翻译译转转录录RNARNA蛋白质蛋白质DNADNA导入检测导入检测DNADNA分子杂交技术分子杂交技术原理：碱基互补配对原则DNA分子杂
7、交技术分子杂交技术形成杂交带形成杂交带放射性元素标记放射性元素标记基因探针非目的基因四、目的基因检测与鉴定四、目的基因检测与鉴定翻翻译译转转录录RNARNA蛋白质蛋白质DNADNA导入检测导入检测转录检测转录检测翻译检测翻译检测DNADNA分子杂交技术分子杂交技术分子杂交技术分子杂交技术抗体抗体-抗原检测抗原检测抗性检测、功能活性比较等抗性检测、功能活性比较等获取目的基因获取目的基因构建表达载体构建表达载体导入受体细胞导入受体细胞目的基因检测与鉴定目的基因检测与鉴定发光基因发光基因含发光基因含发光基因的重组质粒的重组质粒课堂评价课堂评价当堂巩固当堂巩固知识运用知识运用举一反三举一反三1 1、据
8、图回答：、据图回答：(1)(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_限制酶限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。(2)(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_(_(填字母代号填字母代号)。A A启动子启动子 B BtetR CtetR C复制原点复制原点 D DampRampR(3)(3)过程可采用的操作方法是过程可采用的操作方法是_(4)(4)该过程成功的标志是该过程成功的标志是_。HindHind和和BamH BamH A A 显微注射显微注射 牛乳汁中含有人乳铁蛋白牛乳汁中含有人乳铁蛋白2.（山东理综）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_作探针进行分子杂交检测又要用_方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。耐盐基因（目的基因）3.（山东理综）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是_；获得转基因母牛后，如果_即说明目的基因已经表达。显微注射法牛奶中含有人类白细胞介素（或牛乳腺细胞已合成人类白细胞介素）一定浓度的盐水浇灌（移植到盐碱地中）
