1、常用类型常用类型Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶来源来源_T4噬菌体噬菌体功能功能只只“缝合缝合”_“缝缝合合”_结果结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_作用结果作用结果作用底物作用底物作用部位作用部位名称名称将单个脱氧核苷酸依将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端次连接到单链末端脱氧核苷酸脱氧核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键D N A 聚 合聚 合酶或热稳定酶或热稳定D N A 聚 合聚 合酶酶将两个将两个DNA片段连片段连接为一个接为一个DNA分子分子DNA片段片段磷酸二酯键磷酸二酯键DNA连接连接酶酶将将DNA切成两个片切成两个片段段DN
2、A磷酸二酯键磷酸二酯键限制酶限制酶将单个核糖核苷酸将单个核糖核苷酸依次连接到单链末依次连接到单链末端端核糖核苷酸核糖核苷酸磷酸二酯键磷酸二酯键RNA聚合酶聚合酶将双链将双链DNA分子局分子局部解旋为单链，形部解旋为单链，形成两条长链成两条长链DNA碱基对之间碱基对之间的氢键的氢键解旋酶解旋酶将将DNA片段水解为片段水解为单个脱氧核苷酸单个脱氧核苷酸DNA磷酸二酯键磷酸二酯键DNA(水解水解)酶酶作用结果作用结果作用底物作用底物作用部位作用部位名称名称解析解析返回返回限制限制酶酶BamHBclSau3AHind识别识别序列序列及切及切割位割位点点过程过程说明说明图解图解变性变性当温度上升到当温度
3、上升到 以上时，以上时，双链双链DNA解聚为单链解聚为单链复性复性温度下降到温度下降到_左右，两种左右，两种引物通过碱基互补配对与两引物通过碱基互补配对与两条单链条单链DNA结合结合72 左右时，左右时，_有最大活性，可使有最大活性，可使DNA新链新链由由5端向端向3端延伸端延伸 人工合成人工合成从基因文库中获取从基因文库中获取过过程程反转反转录法录法化学合化学合成法成法从部分基因文库，如从部分基因文库，如cDNA文库中获取文库中获取从基因组文从基因组文库中获取库中获取方方法法基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程项目项目区别区别与联系与联系定向改造生物的遗传特定向改造生物的遗传特性，以获得人类
4、所需的性，以获得人类所需的类型或生物产品类型或生物产品定向改造或生产人类所需定向改造或生产人类所需的蛋白质的蛋白质实质实质获取目的基因获取目的基因构建基构建基因表达载体因表达载体将目的基将目的基因导入受体细胞因导入受体细胞目的目的基因的检测与鉴定基因的检测与鉴定预期蛋白质功能预期蛋白质功能设计预设计预期的蛋白质结构期的蛋白质结构推测应推测应有的氨基酸序列有的氨基酸序列找到相找到相对应的脱氧核苷酸序列对应的脱氧核苷酸序列过程过程区区别别基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程项目项目区别与区别与联系联系区区别别蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程的第二代基因工程基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白基因工程中所利用的某些酶需要通过蛋白质工程进行修饰、改造质工程进行修饰、改造联系联系只能生产自然界已有的蛋只能生产自然界已有的蛋白质白质可生产自然界没可生产自然界没有的蛋白质有的蛋白质结果结果解析解析返回返回解析解析返回返回解析解析返回返回
