1、铜绿假单胞菌蒋月婷 非发酵菌非发酵菌(Nonfermentative Bacilli)定义定义-一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利 用葡萄糖的需氧或兼性厌氧的革兰阴用葡萄糖的需氧或兼性厌氧的革兰阴 性无芽胞杆菌性无芽胞杆菌发酵型 氧化型 产碱型概述n非发酵菌：非发酵菌：G-b 葡萄糖葡萄糖O/需需O2或兼性厌或兼性厌O2 动力动力+/氧化酶氧化酶+/n分类：分类：假单胞菌属假单胞菌属 产碱杆菌属产碱杆菌属 不动杆菌属不动杆菌属 黄杆菌属黄杆菌属 莫拉杆菌属莫拉杆菌属 窄食单胞菌属窄食单胞菌属 金氏杆菌属金氏杆菌属 艾肯菌属艾肯菌属 土壤杆菌属土壤杆菌属 丛毛单胞菌
2、属丛毛单胞菌属 等等嗜麦芽嗜麦芽15%15%其他其他13%13%不动杆菌不动杆菌16%16%铜绿假单胞铜绿假单胞菌菌56%56%非发酵菌分离率n假单胞菌科：根据假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为同源性分为5个个rRNA群群 rRNA群群/假单胞菌属假单胞菌属rRNA群群/伯克菌属伯克菌属rRNA群群/丛毛单胞菌属、食酸菌属丛毛单胞菌属、食酸菌属rRNA群群/短波毛单胞菌属短波毛单胞菌属rRNA群群/窄食单胞菌属窄食单胞菌属其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等假单胞菌属Pseudomonas种类：种类：n铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)n荧
3、光假单胞菌荧光假单胞菌(P.fluorescence)n恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌(P.putica)n斯氏假单胞菌斯氏假单胞菌(P.stutizeri)n曼多辛假单胞菌曼多辛假单胞菌(P.mendocina)n产碱假单胞菌产碱假单胞菌(P.alcaligenes)n假产碱假单胞菌假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)假单胞菌属Pseudomonasn共同特点：共同特点：G-b 菌体细长菌体细长 单端单端鞭毛鞭毛 无芽胞无芽胞 专性需专性需O2 营养要求不高营养要求不高 35生长，少数生长，少数4、42 生长生长 葡萄糖葡萄糖O/动力动力+氧化酶氧化酶+可产多种色素：绿脓素可产
4、多种色素：绿脓素 荧光素荧光素 脓玉红素脓玉红素 各种菌产生的色素 菌名菌名 色素色素 颜色颜色铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素 蓝、红、黑、黄色蓝、红、黑、黄色荧光假单胞菌荧光假单胞菌 荧光素荧光素 黄绿色黄绿色恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌 荧光素荧光素 黄绿色黄绿色斯氏假单胞菌斯氏假单胞菌 未定名黄色素未定名黄色素 黄色黄色洋葱伯克霍尔德菌洋葱伯克霍尔德菌 未定名黄色素、紫色素未定名黄色素、紫色素 黄色、紫色黄色、紫色腐败希瓦讷拉菌腐败希瓦讷拉菌 未定名色素未定名色素 淡红褐色淡红褐色 n抵抗力：抵抗力：较强，对多种抗生素耐药较强，对多种抗
5、生素耐药n临床意义：临床意义：分布广泛，条件致病菌，分布广泛，条件致病菌，主要引起皮肤粘膜受损部位感染和各种医主要引起皮肤粘膜受损部位感染和各种医院内感染院内感染假单胞菌属Pseudomonas 各种标本各种标本 血平板和血平板和Mac平板平板 可疑菌落可疑菌落涂片革兰染色涂片革兰染色革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 氧化酶氧化酶(+)、OF：O 非发酵菌鉴定系统鉴定到种非发酵菌鉴定系统鉴定到种 微生物检验程序微生物检验程序n药敏试验药敏试验 假单胞菌属和不动杆菌属可做假单胞菌属和不动杆菌属可做K-B法药敏试法药敏试验，嗜麦芽窄食单胞菌只有验，嗜麦芽窄食单胞菌只有3种药物的种药物的K-B法药敏标准，其
6、余需用稀释法或法药敏标准，其余需用稀释法或E test法法n抗生素敏感试验：抗生素敏感试验：A组：组：头孢他啶、美洛西林或替卡西林、哌拉西头孢他啶、美洛西林或替卡西林、哌拉西 林、庆大霉素林、庆大霉素B组：组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培 南、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星南、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星C组：组：头孢噻肟或头孢曲松、氯霉素、奈替米星头孢噻肟或头孢曲松、氯霉素、奈替米星U组：组：羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星 或氧氟沙星、磺胺甲基异恶唑或氧氟沙星、磺胺甲基异恶唑 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 P.aer
7、uginosan形态形态：G-b 菌体长短不一菌体长短不一 球杆状或长丝状球杆状或长丝状 单端单鞭毛单端单鞭毛 动力动力+无芽胞无芽胞n特性特性：专性需氧：专性需氧 营养要求不高营养要求不高 35+4 42+可形成多种不同形态的菌落可形成多种不同形态的菌落 产多种色素产多种色素(主要为绿脓素、荧光素主要为绿脓素、荧光素)铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌n生化反应：生化反应：氧化酶氧化酶+OF：O 硝还硝还+N2+液化明胶液化明胶+枸橼酸盐枸橼酸盐+精双水解精双水解+乙酰胺酶乙酰胺酶+吲哚吲哚-革兰染色铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌电镜图铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌n抗原：抗原：O抗原抗原(外膜蛋白外膜蛋白-保护
8、性抗原保护性抗原 脂多糖脂多糖-型特异性型特异性)H抗原抗原 血清学分型血清学分型 n抵抗力：抵抗力：抵抗力强抵抗力强 耐干燥耐干燥 不耐热不耐热 多重耐药多重耐药 在室温水中长期生存在室温水中长期生存 4不生长不生长 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌致病性n 广泛存在环境中的广泛存在环境中的条件致病菌，条件致病菌，是院内感染是院内感染 主要病原菌主要病原菌 n 可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染、囊性纤维变性等烧伤感染、囊性纤维变性等n 有多种毒力因子：包括菌毛、有多种毒力因子：包括菌毛、荚膜多糖、荚膜多糖、内内 毒素、外毒素、毒素、外毒素、绿脓
9、菌素、绿脓菌素、蛋白酶、磷脂酶蛋白酶、磷脂酶等等铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌n粘附素：粘附素：菌毛的神经氨酸酶分解上皮细胞表面的菌毛的神经氨酸酶分解上皮细胞表面的神经氨酸促进细菌侵入神经氨酸促进细菌侵入n荚膜：荚膜：多糖类物质抗吞噬细胞的吞噬作用；使细多糖类物质抗吞噬细胞的吞噬作用；使细菌锚泊在细胞表面，与呼吸道感染有关菌锚泊在细胞表面，与呼吸道感染有关n内毒素、外毒素内毒素、外毒素n绿脓菌素：绿脓菌素：绿色色素，由铜绿假单胞菌的绿色色素，由铜绿假单胞菌的RpoS基基因编码产生的代谢产物，具有氧化还原活性的化因编码产生的代谢产物，具有氧化还原活性的化合物，能催化超氧化物和过氧化氢产生有毒氧基合物，
10、能催化超氧化物和过氧化氢产生有毒氧基团，引起组织损伤。在致病中起重要作用团，引起组织损伤。在致病中起重要作用n弹性蛋白酶：弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，引起肺实质损伤和降解弹性蛋白，引起肺实质损伤和出血；降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与相出血；降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与相应抗体形成复合物，沉积于感染组织中应抗体形成复合物，沉积于感染组织中n磷脂酶磷脂酶C微生物检验n采集标本：各种临床标本采集标本：各种临床标本 医疗器械医疗器械 环境用品环境用品n检验方法：直接镜检检验方法：直接镜检 分离培养分离培养(血平、血平、MAC平板平板)鉴定鉴定 分型：血清学分型、质粒指纹图谱分型、分型：血清学分
11、型、质粒指纹图谱分型、脉冲场凝胶电泳分型等脉冲场凝胶电泳分型等 脓液脓液 痰痰 尿液等尿液等血液血液 环境用品环境用品 分离培养分离培养 直接涂片染色直接涂片染色肉汤增菌肉汤增菌 血平板血平板 37 18-24h 可疑菌落（金属光泽、可疑菌落（金属光泽、-溶血、产绿色素、特殊气味）溶血、产绿色素、特殊气味）初步鉴定初步鉴定 最后鉴定最后鉴定 菌落菌落 色素色素 非发酵菌鉴定系统鉴定非发酵菌鉴定系统鉴定 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 氧化酶氧化酶(+)血清分型血清分型 检验程序 分离培养n普平：普平：18-24h圆形圆形 大小不一大小不一 边缘不整边缘不整 扁平扁平 湿润湿润 常呈融合态常呈融合态
12、琼脂被染成绿或黄绿琼脂被染成绿或黄绿 n血平：血平：扁平扁平 湿润湿润 有有金属光泽金属光泽 琼脂被染成蓝琼脂被染成蓝 绿或灰绿绿或灰绿 有溶血环有溶血环 nMAC平：微小无光泽平：微小无光泽半透明半透明 48h后菌落呈棕色后菌落呈棕色 鉴定n初步鉴定初步鉴定 菌体形态菌体形态 菌落特征菌落特征 产色素产色素 气味气味 氧化酶氧化酶n最终鉴定最终鉴定 非发酵菌生化鉴定系统非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条试条 n细菌耐药机制细菌耐药机制n外膜通透性降低外膜通透性降低n产生灭活酶或钝化酶产生灭活酶或钝化酶n主动外排系统将抗生素泵出胞外主动外排系统将抗生素泵出胞外n抗菌药物作用靶位改变抗菌药物
13、作用靶位改变n膜孔蛋白突变膜孔蛋白突变n生物膜屏障作用生物膜屏障作用n各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能发生耐药。初代敏感菌株在治疗能发生耐药。初代敏感菌株在治疗34天后可能发天后可能发生耐药，有必要重复分离菌株生耐药，有必要重复分离菌株n本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基糖苷类联合治疗糖苷类联合治疗鉴定结果分析鉴定结果分析n从临床标本中分离出来的铜绿假单胞菌，从临床标本中分离出来的铜绿假单胞菌，需要排除污染因素需要排除污染因素n铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续三次痰铜绿假单胞菌下呼吸道
14、感染需连续三次痰培养阳性才能确立。培养阳性才能确立。n典型型典型型n大肠菌样型大肠菌样型n粘液型粘液型n侏儒型侏儒型n粗糙型粗糙型铜绿的菌落分型粘液型（麦康凯平板）粘液型（血平板）菌落光滑凸起成粘液状侏儒型（麦康凯平板）细小，无光泽半透明菌落典型型（麦康凯平板）菌落呈灰绿色 大小不一扁平湿润 边缘不规则呈伞状伸展 表面常可见金属光泽典型型（普通平板上）产绿脓素琼脂染成黄绿色粗糙型（麦康凯平板）菌落中央凸起边缘扁平表面粗糙大肠型（麦康凯平板）菌落圆形凸起似大肠埃希菌菌落常见非发酵菌初步分群鉴定试验 假单胞 不动杆 产碱杆 黄杆 莫拉 菌属 菌 属 菌 属 菌属 菌属氧化酶 +-+葡萄糖O/F O/-O/-O/F -动力 +-+-MAC平板生长 +/-祝您成功！祝您成功！
