1、生防微生物内生细菌黄瓜内生菌分离菌株对苹果腐烂病菌的抑制效果黄瓜内生菌分离菌株对苹果腐烂病菌的抑制效果 分离菌株对棉花枯萎病菌的抑制效果分离菌株对棉花枯萎病菌的抑制效果小麦内生菌小麦内生菌菌株对小麦全蚀病菌株对小麦全蚀病菌的抑制作用菌的抑制作用菌株的革兰氏染色情况（菌株的革兰氏染色情况（G-）不同部分内生菌分离纯化 活性菌株发酵液和菌丝体提取物生物活性测 活性测定活性最高的菌株菌株鉴定活性成分分离活性成分鉴定（2）分离用培养基这一现象显示银杏可能具有某种机制抵抗病原菌的侵染，这种机制是否与其体内内生真菌的次生代谢产物有关。对多种植物病害有防治作用的P.该菌能够寄生于立枯丝核菌、终极腐霉(P.内
2、生真菌产生细胞壁分解酶，用来克服寄主防御异物的天然屏障，还可产生果胶酶、脂酶、纤维素酶、酯酶等胞外酶，但对淀粉的利用却相当受限制。绿粘帚菌(Gliocladiumviens)Kostaka发现从百慕大草(Cynodon dactylon)中分离的木质棍状杆菌犬齿亚种(Clavbacter xyli subsp.毛壳霉(Chaetomium spp.毛壳霉(Chaetomium spp.根际内生菌Pseudomonas spp.根际内生菌产生的抗生素物质包括2,4-二乙酞藤黄酚(PHL)、吩嗪羧酸(PCA)、藤黄绿脓菌(pyoluterin,PLT)、硝吡咯菌素(pyrrolnitrin,PRN
3、)、脓青素(PYO)、HCN和一类丁酰内酯(butyrolactones)。傅正擎等80用内生菌及其代谢产物与棉花黄萎病菌共培养的方式，证明内生菌可通过促生长作用来提高棉株的抗逆性。毛壳霉和木霉一样能够产生拮抗物质和营养竞争作用对植物病原菌起到有效的抑制作用，但毛壳霉适应性更广，作用更强，特别能够防治多年生植物病害，如果树根病等。dahliae)的黄色黄丝曲霉(Talaromycesflavus)等都有大量的报道，它们都是很有应用潜力的生防菌。麦角菌科的系统性草生菌产生强力抗食草动物的生物碱；植物内生真菌产生的生理活性物质中，生物碱是最重要的一类。植物内生真菌和内生细菌另一个重要的生防机制是产
4、生水解酶类，如几丁质酶和葡聚糖酶。烟草内生细菌抑制了烟草疫霉菌丝生长，游动孢子游动和萌发。1.小麦内生细菌小麦内生细菌菌株对小麦全蚀病菌的抑制作用菌株对小麦全蚀病菌的抑制作用菌株的革兰氏染色情况（菌株的革兰氏染色情况（G-）2.黄瓜内生菌黄瓜内生菌 病菌的抑制效果病菌的抑制效果 分离菌株对苹果腐烂分离菌株对苹果腐烂 分离菌株对棉花枯萎分离菌株对棉花枯萎 病菌的抑制效果病菌的抑制效果菌株产菌株产-1,3葡聚糖酶的皿内情况葡聚糖酶的皿内情况菌株对油菜菌核病菌的抑制效果菌株对油菜菌核病菌的抑制效果甜菜中的腐烂棒杆菌，存在于整个生活史中。内生细菌以假单胞菌属（Pesudomonas）、芽孢杆菌属（Ba
5、cillus）、肠杆菌属（Enterobacter）和土壤杆菌属（Agrobacterium）为主。菌株产-1,3葡聚糖酶的皿内情况某些根际定殖内生细菌能产生噬铁素与病菌竞争铁元素，而植物并不受其影响。菌株产-1,3葡聚糖酶的皿内情况一些内生菌具有固氮作用。中国农业大学从棉株分离的一种内生真菌(Chaetomium sp.取出培养液，用双层纱布过滤掉菌丝，滤液经6000rpm离心，再取上清液高温灭菌后得无菌滤液备用。内生真菌的生物活性代谢产物：从栎树（Quercus sp.此外，该化合物对一些植物病原真菌辣椒疫霉（Phytophthora capisici）、禾谷丝核菌（Rhizoctonia
6、 cerealis）和禾顶囊壳小麦变种（Gaeumannomyces graminis var.2ml加入3种分离培养基中进行内生菌的分离，每个处理重复3次。目前常用的人工接种内生细菌的方法有3种：灌根接种法，用内生菌悬浮液浇灌植株根际，这种方法可以使内生菌进入植物根茎内101。内生螺旋毛壳ND35菌株对立枯丝核菌的重寄生：菌丝相互作用的超微结构和细胞化学光学显微镜观察光学显微镜观察透射电镜（透射电镜（TEM）观察）观察内生螺旋毛壳ND35菌株对立枯丝核菌的重寄生：菌丝相互作用的超微结构和细胞化学图图 2-2C图图 2-3A图图 2-3BN-乙酰基葡糖胺残基（几丁质）的细胞化学定位乙酰基葡糖胺
7、残基（几丁质）的细胞化学定位水解酶粗提液对杨树腐烂病菌水解酶粗提液对杨树腐烂病菌(A)、苹果树腐烂病菌、苹果树腐烂病菌(B)和苹和苹果炭疽病菌果炭疽病菌(C)菌丝生长的抑制作用。菌丝生长的抑制作用。Glu,-1,3-葡聚糖酶的粗提液；葡聚糖酶的粗提液；CK,对照。对照。内生菌螺旋毛壳产生的抗生素和水解酶的协同抗菌作用水解酶和抗生素对杨树腐烂病菌菌丝生长的协同作用。水解酶和抗生素对杨树腐烂病菌菌丝生长的协同作用。A,抗生素；抗生素；P,酶蛋白；酶蛋白；A+P,抗生素和酶蛋白混合；抗生素和酶蛋白混合；CK,对照。对照。水解酶和抗生素对苹果树腐烂病菌菌丝生长的抑制作用。水解酶和抗生素对苹果树腐烂病菌
8、菌丝生长的抑制作用。A,菌丝在没有抗生素和水解酶的对照处理菌丝在没有抗生素和水解酶的对照处理(CK)中正常生长；中正常生长；B,经水解酶处经水解酶处理理(P)的菌丝显示肿胀，畸形变暗；的菌丝显示肿胀，畸形变暗；C,经抗生素处理经抗生素处理(A)菌丝显示液泡化；菌丝显示液泡化；D,用水解酶和抗生素混合物处理用水解酶和抗生素混合物处理(A+P)的菌丝显示严重扭曲。的菌丝显示严重扭曲。Bars=10 m(A和和D),7.5 m(B和和C)ABCDEF抗生素培养滤液对不同病原抗生素培养滤液对不同病原菌分生孢子萌发抑制作用的菌分生孢子萌发抑制作用的光学显微照片。光学显微照片。A,对照处理的玉米弯孢叶斑病
9、菌。B,用抗生素处理的玉米弯孢叶斑病菌的分生孢子。C,对照处理的杨树腐烂病菌的分生孢子。D,用抗生素处理的杨树腐烂病菌。E,对照处理的苹果炭疽病菌分生孢子；F,用抗生素处理的苹果炭疽病菌分生孢子。Bars=20 m(A,D and E),25 m(B and F),40 m(C).Direct counts 1Good for bacteria,fungal spores and mycelia and actinomycete myceliaSpatial arrangments and associations as they exist in soilDead and live cell
10、s are not distinguishableDifferentiation between organismsis very problematicCharacterization of organisms is reducedSingle cells in colonies are not enumerableSoil particules can be counted as cellsDirect counts 2In-situ identification:DNA probes,hybridizationAntibodies Gram+,Gram-Live/Dead cellsMo
11、st probable numberTable of resultsQuantification of organisms performing a specific functionEnrichment/isolation from tubes is possibleInaccurateHeavy to implementNoImage(Dehydrogenases,phosphatases,reductases,proteases)Carbohydrates,amino acids,proteins pH,pe changes,intermediate metabolism谢谢观看谢谢观看
